Uso de transplante de células-tronco hematopoiéticas para avaliar a origem da síndrome mielodisplásica
Summary
Nós descrevemos o uso do transplante de células-tronco hematopoéticas (TCTH) para avaliar o potencial maligno das células hematopoiéticas geneticamente modificados. TCTH é útil para avaliar várias células hematopoiéticas malignas na vivo , bem como gerar uma grande coorte de ratos com Síndromes Mielodisplásicas (MDS) ou leucemia para avaliar novas terapias.
Abstract
Síndromes Mielodisplásicas (MDS) são um grupo diverso de desordens de células-tronco hematopoiéticas são definidos pela hematopoiese ineficaz, sangue periférico citopenias, displasia e uma propensão para a transformação para leucemia aguda. NUP98-HOXD13 (NHD13) ratos transgénicos recapitular MDS humana em termos de citopenias de sangue periférico, displasia e transformação para leucemia aguda. Demonstramos anteriormente que a MDS poderão ser transferidos de um rato geneticamente modificado com MDS para destinatários do selvagem-tipo por transplante de células de medula óssea nucleated MDS (BMNC). A mais claramente compreender a célula MDS de origem, desenvolvemos abordagens específicas de transplante, immunophenotypically definidos hematopoiéticos subconjuntos. Neste artigo, descrevemos o processo de isolar e transplantar populações específicas de tronco hematopoiético e células progenitoras. Após transplante, descrevemos abordagens para avaliar a eficiência do transplante e a persistência das células MDS doador.
Introduction
Síndromes Mielodisplásicas (MDS) representam um conjunto diverso de desordens de sangue clonal caracterizada pela hematopoiese ineficaz, evidências morfológicas de displasia e uma propensão para a transformação para leucemia mieloide aguda (LMA)1,2 ,3,4. Hematopoiese ineficaz é reconhecido como uma prisão de maturação na medula óssea, resultando em sangue periférico citopenias apesar de medula hipercelular1,3. A incidência de MDS foi estimada vària como 2-12 casos por 100.000 pessoas por ano nos Estados Unidos, e a incidência de MDS aumenta com a idade, tornando esta uma condição importante para entender tendo em conta o envelhecimento da população dos EUA3, 5. Embora a maioria dos casos de MDS tem sem etiologia, alguns casos de MDS são pensados para ser devido à exposição a agentes genotóxicos conhecidos, incluindo solventes tais como benzina e quimioterapia de câncer6.
Pacientes MDS normalmente adquiriram mutações no MDS células7. Embora relativamente incomum, um número de pacientes MDS adquiriram equilibradas translocações cromossômicas envolvendo genes tais como NUP98, EVI1, RUNX1 e MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman). Nosso laboratório tem um interesse de longa data em translocações cromossómicas, que envolvem o gene de NUP988. Ratos transgénicos que expressa um transgene NUP98-HOXD13 (NHD13), regulado pelo promotor Vav1 e elementos de potenciador exibem todos os principais recursos do MDS, incluindo citopenias de sangue periférico, evidências morfológicas de displasia e transformação para LMA9 .
Embora o MDS foram reconhecidos por mais de 60 anos,10e são considerados ser uma desordem clonal de células estaminais, os esforços para engraft célula humana do MDS em camundongos imunodeficientes foram pela maior parte mal sucedidos, porque as células MDS engraft mal11, 12,13,14 e os ratos não desenvolvem a doença clínica. Em um esforço para identificar quais células hematopoiéticas podem transmitir MDS, viramos para o modelo de NHD13 e mostrou que nós poderíamos engraft MDS como uma entidade de doença que mostrou todas as características cardinais da MDS humano, incluindo sangue periférico citopenias, displasia, e transformação para LMA15. Neste relatório, nós apresentamos os detalhes técnicos destas experiências, bem como abordagens para fracionar mais tronco hematopoiético e células precursoras (HSPC), em um esforço para identificar células MDS-iniciando.
Protocol
Representative Results
Discussion
Embora MDS são uma desordem clonal células-tronco hematopoiéticas, os MDS “tronco”, ou células de iniciante, ainda não foram caracterizados. Demonstramos anteriormente que o MDS pode ser para transplante para camundongos WT usando a medula óssea de ratos NHD13 por TCTH, caracterizada por anemia macrocítica, leucopenia, neutropenia e evidências morfológicas de displasia15. Além disso, ensaios de repovoamento do competidor identificaram uma vantagem de crescimento de células de medula ós…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelo programa de pesquisa Intramural do Instituto Nacional de câncer, National Institutes of Health (conceder números ZIA SC 010378 e BC 010983).
Materials
| 14 mL round bottom tube | Falcon | 352057 | |
| Hank's balanced salt solution | Lonza | 10-527F | |
| Anti-CD45.2 antibody | Southern Biotech | 1800-15 | LOT# A077-T044O |
| 3 mL Syringe | Monoject | 8881513934 | |
| 27-G needle | BD | 305109 | |
| 20-G needle | BD | 305176 | |
| Lineage Cocktail | Miltenyi | 130-090-858 | LOT# 5170418221 |
| Anti-Biotin antibodies | Miltenyi | 130-113-288 | LOT# 5171109046 |
| 1 mL Syringe | Excelint | 26027 | Insulin Syringe |
| Heating Lamp | Thermo Fisher Scientific | E70001901 | |
| FACS machine | Cytec | FACScan | 2 lasers, 5 color detectors |
| FACS sorting instrument | Beckman Coulter | MOFLO ASTRIOS | 5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously |
| Propidium Iodide | Thermo Fisher Scientific | P3566 | |
| Gamma Irradiator | Best Theratronics | Gammacell 40 | |
| Blood collection tube | RAM scientific | 76011 | |
| Recipient mice | Charles River | B6-LY5.1/Cr, CD45.1 | |
| NUP98-HOXD13 mice | n/a | C57Bl/6, CD45.2 | Colony maintained at NIH |
| 5 mL round bottom tube | Falcon | 352058 |
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