骨髄異形成症候群の起源を評価するために造血幹細胞移植の使用
Summary
我々 は遺伝子組み換えの造血細胞の悪性の可能性を評価するために造血幹細胞移植 (造血幹細胞移植) の使用について説明します。造血幹細胞移植、マウス骨髄異形成症候群 (MDS) や白血病の新規治療法を評価するための大規模コホートの生成し同様、生体内で様々 な悪性造血細胞の評価に役立ちます。
Abstract
骨髄異形成症候群 (MDS) は、造血の効果が、末梢血血球減少によって、異形成、急性白血病への変換のための傾向によって定義される造血幹細胞障害の多様なグループです。NUP98 HOXD13 (NHD13) トランスジェニック マウス末梢血血球減少によって、異形成と急性白血病への変換の観点から人間の MDS を要約するでしょう。我々 は以前、MDS 骨髄核細胞 (BMNC) を移植による野生型の受信者に mds 遺伝子組み換えマウスから MDS が転送することを示した。起源の MDS のセルを明確に理解、特定を移植する方法を開発した、immunophenotypically に造血のサブセットが定義されています。この記事で私たちは移植造血幹・前駆細胞の特定の人口の分離とのプロセスを説明します。次の移植は、移植の効率とドナー MDS 細胞の持続性を評価する方法をについて説明します。
Introduction
骨髄異形成症候群 (MDS) は、造血の効果が、異形成の形態学上の証拠と急性骨髄性白血病 (AML)1,2 への変換のための傾向によって特徴付けられるクローン血液疾患の多様なセットを表す ,3,4。無効造血骨髄で成熟逮捕と hypercellular 骨髄1,3にもかかわらず末梢血血球減少によっての結果として認識されます。MDS の発症率は、米国で毎年 10万人あたり 2-12 ケースとしていろいろと推定されている、MDS の発症率は年齢とともに増加この与えられた米国の人口3、老化を理解する重要な条件を作る 5。MDS のほとんどの場合に、明確な病因がない、MDS のいくつかのケースはがん化学療法6ベンゼンなどの溶剤を含む知られている遺伝毒性要因への曝露に起因すると考えられています。
MDS 患者は通常データシート セル7の変異を取得しています。比較的稀に、MDS 患者の数は、NUP98、EVI1、RUNX1、MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman) などの遺伝子を含むバランスのとれた染色体転座を取得しています。私たちの研究室は8NUP98 遺伝子を含む染色体転座の長年の興味。トランスジェニック マウスを表す Vav1 プロモーターによって調整される NUP98 HOXD13 (NHD13) 遺伝子とエンハンサー要素は MDS、末梢血血球減少によって、異形成や急性骨髄性白血病9 への変換の形態学上の証拠などの主要な機能のすべてを表示.
MDS 60 年以上10で認識されているクローン幹細胞障害と見なされます、細胞免疫不全マウスで MDS を接がに取り組み成功していない主、データシート セル接が悪い11、ので 12,13,14マウス臨床病気を開発しません。どの造血細胞は MDS を送信ことができますを識別するために、私たちが NHD13 モデルになってし、末梢血血球減少によってを含む人間の MDS の基本的な機能のすべてを示した病気の実体として MDS を接が可能性が我々 を示した異形成とアジア ・ マイル リミテッド15に変換します。このレポートでは、MDS を開始するセルを識別するためにさらに造血幹・前駆細胞 (HSPC) を分別する方法と同様に、これらの実験の技術的な詳細を紹介します。
Protocol
Representative Results
Discussion
MDS はクローン性造血幹細胞の障害であるが、MDS「幹」、または開始セルは特徴付けされていますいません。以前、MDS 骨髄による造血幹細胞移植、大球性貧血、白血球減少、好中球減少、異形成15の形態学上の証拠によって特徴付けられる NHD13 マウスを用いた WT マウスに移植できることを示した。さらに、競争力のある再試金は NHD13 MDS 骨髄由来細胞の成長の優位性を識別?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、国立がん研究所の学内研究プログラムによって支えられた (許可番号 ZIA SC 010378 と BC 010983) 健康の国民の協会。
Materials
| 14 mL round bottom tube | Falcon | 352057 | |
| Hank's balanced salt solution | Lonza | 10-527F | |
| Anti-CD45.2 antibody | Southern Biotech | 1800-15 | LOT# A077-T044O |
| 3 mL Syringe | Monoject | 8881513934 | |
| 27-G needle | BD | 305109 | |
| 20-G needle | BD | 305176 | |
| Lineage Cocktail | Miltenyi | 130-090-858 | LOT# 5170418221 |
| Anti-Biotin antibodies | Miltenyi | 130-113-288 | LOT# 5171109046 |
| 1 mL Syringe | Excelint | 26027 | Insulin Syringe |
| Heating Lamp | Thermo Fisher Scientific | E70001901 | |
| FACS machine | Cytec | FACScan | 2 lasers, 5 color detectors |
| FACS sorting instrument | Beckman Coulter | MOFLO ASTRIOS | 5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously |
| Propidium Iodide | Thermo Fisher Scientific | P3566 | |
| Gamma Irradiator | Best Theratronics | Gammacell 40 | |
| Blood collection tube | RAM scientific | 76011 | |
| Recipient mice | Charles River | B6-LY5.1/Cr, CD45.1 | |
| NUP98-HOXD13 mice | n/a | C57Bl/6, CD45.2 | Colony maintained at NIH |
| 5 mL round bottom tube | Falcon | 352058 |
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