Summary

Utilisation de la greffe de cellules souches hématopoïétiques pour évaluer l’origine du Syndrome myélodysplasique

Published: October 03, 2018
doi:

Summary

Les auteurs décrivent l’utilisation de greffe de cellules souches hématopoïétiques (CSH) pour évaluer le potentiel maligne de cellules hématopoïétiques génétiquement. TCSH est utile pour évaluer les diverses cellules hématopoïétiques malignes in vivo comme générant une grande cohorte de souris atteintes de leucémie ou de syndromes myélodysplasiques (SMD) afin d’évaluer de nouveaux traitements.

Abstract

Syndromes myélodysplasiques (SMD) forment un groupe diversifié de troubles de cellules souches hématopoïétiques qui sont définies par l’hématopoïèse inefficace, sang périphérique cytopénies, dysplasie et une propension à la transformation en leucémie aiguë. NUP98-HOXD13 (NHD13) de souris transgéniques récapitulent MDS humaine en termes de sang périphérique cytopénies, dysplasie et transformation en leucémie aiguë. Nous avons démontré précédemment que MDS pouvaient être transférés d’une souris génétiquement modifiée avec MDS aux destinataires sauvage par la transplantation de cellules de la moelle osseuse nucléée MDS (BMNC). Pour mieux comprendre la cellule MDS d’origine, nous avons développé des approches spécifiques de transplantation, immunophenotypically défini sous-ensembles hématopoïétiques. Dans cet article, nous décrivons le processus d’isolement et le repiquage des populations spécifiques de souches hématopoïétiques et des cellules progénitrices. Après transplantation, nous décrivons les approches pour évaluer l’efficacité de la transplantation et la persistance des cellules donneur MDS.

Introduction

Syndromes myélodysplasiques (SMD) représentent un ensemble diversifié de clonale hémopathie caractérisée par l’hématopoïèse inefficace, les preuves morphologiques de la dysplasie et une propension à la transformation de la leucémie myéloïde aiguë (AML)1,2 ,3,4. Hématopoïèse inefficace est reconnu comme un arrêt de la maturation dans la moelle osseuse et les résultats dans le sang périphérique des cytopénies malgré une hypercellulaire moelle1,3. L’incidence du MDS a été diversement estimée comme 2-12 cas pour 100 000 personnes chaque année aux Etats-Unis, et l’incidence de la MDS augmente avec l’âge, ce qui en fait une condition importante à comprendre étant donné le vieillissement de la population des États-Unis3, 5. Bien que la plupart des cas de MDS n’ont aucune étiologie clair, certains cas de MDS sont censés être en raison de l’exposition à des agents génotoxiques connues, y compris les solvants comme le benzène et le cancer chimiothérapie6.

Les patients MDS en général ont acquis des mutations dans les cellules de SDM7. Bien que relativement rare, un certain nombre de patients de SDM ont acquis équilibrée des translocations chromosomiques impliquant des gènes tels que NUP98, EVI1, RUNX1 et MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman). Notre laboratoire s’intéresse depuis longtemps à des translocations chromosomiques, qui impliquent la de gène NUP988. Souris transgéniques qu’exprimer un transgène NUP98-HOXD13 (NHD13) réglementés par le promoteur Vav1 et éléments activateurs affichent toutes les fonctionnalités clées de SDM, y compris les cytopénies périphériques de sang, des preuves morphologiques de dysplasie et transformation d’AML9 .

Bien que MDS ont été reconnus pour les plus de 60 ans10et sont considérés comme une maladie clonale de cellules souches, efforts pour greffer des cellules humaines de MDS dans des souris immunodéficientes ont été en grande partie échoués, parce que les cellules MDS greffer mal11, 12,13,14 et les souris ne développent pas la maladie clinique. Dans le but d’identifier les cellules hématopoïétiques peuvent transmettre MDS, nous s’est tourné vers le modèle de NHD13 et a montré que nous pourrions greffer SDM comme une entité pathologique qui a montré toutes les fonctionnalités de cardinales de MDS humaine, y compris le sang périphérique cytopénies, dysplasie, et transformation d’AML15. Dans ce rapport, nous présentons les détails techniques de ces expériences, mais aussi des approches de fractionner davantage les souches hématopoïétiques et cellules précurseurs (CSPH), dans un effort pour identifier les cellules qui lance MDS.

Protocol

Les procédures animaux décrits dans cet article ont été approuvés par le National Cancer Institute à Bethesda animalier et le Comité de l’emploi et sont conformes aux politiques contenues dans la politique de Service de santé publique sur la santé humaine et de Use of Laboratory Animals, le Loi sur le bien-être des animaux et le Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 1. préparation de la cellule Récolte cellules nucléées de moelle osseuse (BMNC) Uti…

Representative Results

Nous montrons des chiffres représentatifs des résultats de plusieurs expériences. La figure 1 montre une cytométrie de flux représentant tri experiment. Au cours de la différenciation hématopoïétique normale, comme cellules de sont engager à une lignée hématopoïétique spécifique, ils acquièrent des marqueurs définissant le lignage de surface cellulaire et perdent le potentiel de l’auto-renouvellement. Par conséquent, chez les souris de typ…

Discussion

Bien que MDS sont une maladie clonale de cellules souches hématopoïétiques, le MDS « stem », ou initiatrice des cellules, n’ont pas encore été caractérisées. Nous avons démontré précédemment que SDM peut être transplantables à souris WT à l’aide de la moelle osseuse de souris NHD13 par tcsh, caractérisée par une anémie macrocytaire, leucopénie, neutropénie et des preuves morphologiques de dysplasie15. En outre, des essais de repeuplement concurrentiel identifié un avant…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ce travail a été soutenu par le programme de recherche intra-muros du National Cancer Institute, National Institutes of Health (numéros ZIA SC 010378 et BC 010983 de subventions).

Materials

14 mL round bottom tube Falcon 352057
Hank's balanced salt solution Lonza 10-527F
Anti-CD45.2 antibody Southern Biotech 1800-15 LOT# A077-T044O
3 mL Syringe Monoject 8881513934
27-G needle BD 305109
20-G needle BD 305176
Lineage Cocktail Miltenyi 130-090-858 LOT# 5170418221
Anti-Biotin antibodies Miltenyi 130-113-288 LOT# 5171109046
1 mL Syringe Excelint 26027 Insulin Syringe
Heating Lamp Thermo Fisher Scientific E70001901
FACS machine Cytec FACScan 2 lasers, 5 color detectors
FACS sorting instrument Beckman Coulter MOFLO ASTRIOS 5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously
Propidium Iodide Thermo Fisher Scientific P3566
Gamma Irradiator Best Theratronics Gammacell 40
Blood collection tube RAM scientific 76011
Recipient mice Charles River B6-LY5.1/Cr, CD45.1
NUP98-HOXD13 mice n/a C57Bl/6, CD45.2 Colony maintained at NIH
5 mL round bottom tube Falcon 352058

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Cite This Article
Chung, Y. J., Khawaja, G., Wolcott, K. M., Aplan, P. D. Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome. J. Vis. Exp. (140), e58140, doi:10.3791/58140 (2018).

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