Intravenosa e Intra-amniótica no Utero transplante no modelo murino

Recentes avanços no diagnóstico e rastreio pré-natal tem trazido à luz da possibilidade de tratar o feto para um número de doenças congênitas que não tem as opções de tratamento pós-natal adequada e resultar em significativa morbidade e mortalidade. Especificamente, no utero o transplante de células-tronco hematopoiéticas (IUHCT) e edição de terapia/genoma gene têm potencial para tirar proveito das propriedades do desenvolvimento normais do feto para tratar doenças congênitas hematológica, imune e genética os transtornos mais eficientemente do que o transplante de HSC pós-natal e edição de genoma/terapia do gene podem fazer^1,2. Especificamente, devido ao pequeno tamanho do feto, a célula do doador ou dose de vetor viral pode ser maximizado pelo peso do destinatário. Além disso, a imaturidade imunológica do feto permite doadores de linfócitos deve ser injetado sem a mieloablativo e imunossupressoras condicionamento que é exigido nos protocolos de transplante pós-natal. Da mesma forma, carregando um transgene terapêutico ou tecnologia de edição de genoma de vetores virais podem ser injetados sem uma resposta imune limitante para o transgene produto ou o vetor viral. Finalmente, a acessibilidade e a natureza proliferativa de células tronco/progenitoras fetais pagar a possibilidade de uma mais eficiente transdução de células progenitoras de destino, bem como certos modos de genoma edição (dirigido por homologia reparação) que necessitam de ciclismo células ocorra de forma eficiente. O modelo murino serve como um meio perspicaz e acessível para abordar questões importantes em biologia de células-tronco e Imunologia antes de fazer experiências em modelos pré-clínicos de animais grandes e, como tal, tem servido como o modelo principal em que IUHCT e no útero terapia genética têm sido exploradas^1,2,3.

Apesar de muitas variáveis desempenham um papel importante no sucesso de IUHCT e no utero gene terapia/genoma edição em modelos animais murino e grandes, uma variável-chave é o método de entrega dos linfócitos ou vetor viral. A entrega de grandes doses de linfócitos de doadores com um efeito de primeira passagem ocorra no fígado fetal, o órgão hematopoiético aquando do IUHCT, foi mostrada para ser instrumental na obtenção de níveis de macrochimeric de enxertia em mouse e modelos animais grandes^{4 ,5}. Isto foi conseguido através de uma injeção de doador células através da veia vitelínico no modelo de rato e através de uma injeção intra cardíaca no modelo canino. A rota de injeção também desempenha um papel fundamental no direcionamento de células progenitoras de órgãos diferentes durante o desenvolvimento. Por exemplo, uma injeção intravenosa através da veia vitelínico tem demonstrada eficientemente transduce cardiomyocytes e hepatócitos após um final de gestação injeção^6,7. Alternativamente, uma injeção intra-amniótica de vetores virais permite a segmentação dos órgãos que estão expostos fisicamente baseados no dobradura/desenvolvimento embrionário no momento da injeção⁸. Isto é melhor exemplificado pela segmentação do epitélio respiratório através de uma injeção intra-amniótica no final da gestação para aproveitar normal “respirar” movimentos fetais, que expõe o trato respiratório para o vetor viral no amniótico fluido de⁹. Estes dois modos de IUT, por via venosa através da veia vitelínico e intra-amniótica, foram a base para várias experiências passadas e em curso no nosso laboratório. Neste protocolo, descrevemos em detalhe os métodos para a realização de IUT intravenosa e intra-amniótica no modelo murino.