Intravenöse und Intra-Fruchtwasser In der Gebärmutter Transplantation in den Mausmodell

Jüngste Fortschritte in pränatale Screening und Diagnose haben die Möglichkeit der Behandlung von den Fötus für eine Reihe von angeborenen Störungen, die nicht über ausreichende postnatale Behandlungsmöglichkeiten und erheblicher Morbidität und Mortalität zur Folge Licht gebracht. Insbesondere haben in Utero Transplantation hämatopoetischer Stammzellen (IUHCT) und Gen-Therapie/Genom-Bearbeitung das Potenzial, normale Entwicklungsstörungen Eigenschaften des Fötus zur Behandlung von angeborenen hämatologischen, Immun- und genetischen nutzen effizienter als postnatale HSC-Transplantation und Gen-Therapie/Genom-Bearbeitung^1,2vermag Störungen. Insbesondere kann aufgrund der geringen Größe des Fötus, die Spender Zelle oder viralen Vektoren Dosis pro das Gewicht des Empfängers maximiert werden. Darüber hinaus ermöglicht die immunologische Unreife des Fötus, dass Spender HSCs injiziert werden, ohne die Bolusinjektion und immunsuppressive Konditionierung, die in den Protokollen der postnatalen Transplantation erforderlich ist. In ähnlicher Weise können virale Vektoren mit einem therapeutischen Transgen oder Genom-Bearbeitungs-Technologie ohne eine einschränkende Immunantwort auf das Transgen-Produkt oder die viralen Vektoren injiziert werden. Schließlich leisten die Zugänglichkeit und proliferative Natur des fetalen Stammzellen/Vorläuferzellen die Möglichkeit, eine effizientere Transduktion Ziel Vorläuferzellen sowie bestimmte Modi des Genoms bearbeiten (unter der Regie von Homologie Reparatur) erfordern Radfahren Zellen effizient auftreten. Das Mausmodell dient als eine aufschlussreiche und erschwingliche Mittel auf wichtige Fragen in Stammzellbiologie und Immunologie vor in präklinischen große Tiermodellen zu experimentieren und als solche diente als das primäre Modell in der IUHCT und in der Gebärmutter Gen-Therapie wurden erkundet^1,2,3.

Obwohl viele Variablen eine wichtige Rolle für den Erfolg der IUHCT und in Utero Gen Therapie/Genom-Bearbeitung in murinen und große Tiermodellen spielen, ist eine wichtige Variable die Methode der Lieferung der HSCs oder viralen Vektoren. Die Lieferung von hohen Dosen von Hsz Spender mit einem First-Pass-Effekt in der fetalen Leber, das blutbildende Organ zum Zeitpunkt der IUHCT auftretenden nachweislich maßgeblich bei der Erreichung Macrochimeric Ebenen des Engraftment in Maus und große Tiermodellen^{4 ,5}. Dies wurde erreicht durch eine Injektion von Spender Zellen über die dotterhäutchen Vene im Mausmodell und über eine Intra kardiale Injektion im eckzahn Modell. Die Route der Einspritzung spielt auch eine wesentliche Rolle bei der Ausrichtung der Vorläuferzellen der verschiedenen Organe während der Entwicklung. Zum Beispiel eine intravenöse Injektion über die dotterhäutchen Vene nachweislich effizient transduzieren Kardiomyozyten und Hepatozyten nach einem späten Schwangerschaft Injektion^6,7. Alternativ kann eine Intra-Fruchtwasser Injektion von viralen Vektoren, die Ausrichtung der Organe, die physisch ausgesetzt sind, basierend auf der Faltung/Embryonalentwicklung zum Zeitpunkt der Injektion⁸. Dies ist am besten veranschaulicht durch die Ausrichtung der respiratorischen Epithel über einer Intra-Fruchtwasser Injektion spät in der Schwangerschaft normal “atmen” Kindsbewegungen, nutzen die Macht der Atemwege zu den viralen Vektoren in der Fruchtblase Fluid-⁹. Diese beiden Modi der IUT intravenös über die Vene dotterhäutchen und Intra-Fruchtwasser, wurden die Grundlage für mehrere abgeschlossene und laufende Experimente in unserem Labor. In diesem Protokoll beschreiben wir detailliert die Methoden zum Ausführen von intravenösen und Intra-Fruchtwasser IUT in das Mausmodell.