Intraveineuse amniotique et In Utero une Transplantation chez le modèle murin

Les progrès récents dans le diagnostic et le dépistage prénatal ont mis en lumière la possibilité de traiter le fœtus pour un certain nombre de troubles congénitaux qui ne pas avoir les options de traitement postnatal adéquat et entraîner une morbidité et mortalité. Plus précisément, dans l’utérus de transplantation de cellules souches hématopoïétiques (IUHCT) et d’édition de thérapie/génome gène ont le potentiel pour profiter des propriétés du développement normales du foetus pour traiter congénitale hématologique, immunitaires et génétiques les troubles de manière plus efficace que la greffe de CSH postnatal et édition de thérapie/génome gène peuvent faire^1,2. Plus précisément, en raison de la petite taille du foetus, la cellule du donneur ou la dose de vecteur viral peut être agrandie par le poids du destinataire. En outre, l’immaturité immunitaire du foetus permet de donateurs CSH à doser sans myéloablatif et immunosuppresseurs conditionnement qui est requise dans protocoles greffe postnatal. De même, les vecteurs viraux transportant un transgène thérapeutique ou la technologie d’édition du génome peuvent être injectés sans une réponse immunitaire limitante le produit transgénique ou le vecteur viral. Enfin, l’accessibilité et la nature proliférative des cellules souches/progénitrices foetale s’offrir la possibilité d’une transduction plus efficace des cellules progénitrices de cibles, ainsi que certains modes de génome édition (axés sur l’homologie réparation) qui nécessitent de cyclisme cellules se produire efficacement. Le modèle murin constitue un moyen perspicace et abordable pour répondre à des questions importantes dans la biologie des cellules souches et immunologie avant d’expérimenter dans des modèles animaux grands précliniques et, à ce titre, a été le modèle primaire dans laquelle IUHCT et dans l’utérus la thérapie génique ont été explorés^1,2,3.

Bien que de nombreuses variables jouent un rôle important dans le succès de IUHCT et dans l’utérus gene therapy/génome édition dans des modèles murins et grands animaux, une variable-clé est la méthode de livraison des CSH ou des vecteurs viraux. La livraison de grandes quantités de donateur CSH avec un effet de premier passage dans le foie fœtal, les organes hématopoïétiques au moment de la IUHCT, s’est avérée être contribué à atteindre un niveau de prise de greffe dans les souris et les modèles animaux grands^{4 macrochimeric ,},⁵. Ceci a été réalisé via une injection de donateurs cellules via la veine vitelline chez la souris et via une injection intracardiaque dans le modèle canin. La voie d’injection joue également un rôle fondamental dans le ciblage des cellules progénitrices de différents organes au cours du développement. Par exemple, une injection intraveineuse par l’intermédiaire de la veine vitelline a été démontrée à transmettre efficacement les cardiomyocytes et hépatocytes suite à une fin de gestation injection^6,7. Par ailleurs, une injection intra-amniotique de vecteurs viraux permet le ciblage des organes qui affleurent physiquement basés sur le pliage/développement embryonnaire au moment de l’injection de⁸. Ceci est mieux illustré par le ciblage de l’épithélium respiratoire via une injection intra-amniotique vers la fin de la gestation pour profiter de mouvements normaux foetale « breathing », qui expose les voies respiratoires au vecteur viral dans l’amniotique fluide de⁹. Ces deux modes de l’IUT, par voie intraveineuse via la veine vitelline et amniotique, ont servi de base à plusieurs des expériences passées et en cours dans notre laboratoire. Dans ce protocole, nous décrivons en détail les méthodes permettant d’effectuer par voie intraveineuse et amniotique IUT dans le modèle murin.