Ein Software-basiertes Abbild-Analyse-System bietet eine alternative Methode, um die Morphologie der Ausläufer und Seerosengewächse Arten zu studieren. Dieses Protokoll ermöglicht die Messung von Länge und Durchmesser der Stolonen und Rhizome und kann angewendet werden, um Proben mit einer großen Menge an Biomasse und eine Vielzahl von Arten.
Länge und Durchmesser der Stolonen oder Rhizome sind in der Regel mit einfachen Herrscher und Bremssättel gemessen. Dieses Verfahren ist langsam und mühevoll, so dass es oft auf eine begrenzte Anzahl von Stolonen oder Rhizome verwendet wird. Aus diesem Grund sind diese Eigenschaften in ihrer Verwendung für Morphologische Charakterisierung der Pflanzen begrenzt. Die Verwendung von digitalen Bild-Analyse-Software-Technologie kann Messfehler aufgrund menschlicher Fehler überwinden, die tendenziell zunehmen wie die Anzahl und Größe der Proben auch zu erhöhen. Das Protokoll eignet sich für jede Art von Ernte aber eignet sich besonders für Futter oder Gräser, wo Pflanzen klein sind und zahlreich. Turf Proben bestehen aus oberirdische Biomasse und eine obere Bodenschicht auf die Tiefe des maximalen Rhizom Entwicklung, abhängig von der Sorte von Interesse. In Studien Proben sind aus dem Boden gewaschen und Stolonen/Rhizome werden vor der Analyse durch digitale Bildanalyse-Software per hand gereinigt. Die Proben werden in einem Labor Heizung Ofen zum Trockengewicht messen weiter getrocknet; Daher sind die daraus resultierenden Daten für jede Probe Gesamtlänge, total trocken Gewicht und Durchmesser. Gescannte Bilder können durch ohne sichtbare überflüssige Teile wie verbleibenden Wurzeln oder Blätter, die nicht mit der Reinigung entfernt vor der Analyse korrigiert werden. In der Tat haben diese Fragmente normalerweise viel kleinere Durchmessern als Stolonen und Rhizome, damit sie leicht ausgeschlossen werden können von der Analyse durch die Festsetzung der Mindestdurchmesser, unterhalb derer Objekte nicht berücksichtigt werden. Ausläufer oder Rhizom-Dichte pro Flächeneinheit kann dann basierend auf Stichprobenumfang berechnet werden. Der Vorteil dieser Methode ist die schnelle und effiziente Messung der Länge und Durchmesser des großen Probennummern Stolonen und Rhizome.
Das Studium der Morphologie der Pflanze richtet sich weitgehend in allen Disziplinen der Pflanzen Wissenschaft einschließlich Ökologie, Agrarwissenschaften, Biologie und Physiologie. Das Wurzelsystem der Pflanze ist weithin für seine Bedeutung in Stresstoleranz, Bodenstabilität, Pflanzenwachstum und Produktivität untersucht. Stolonen und Rhizome werden auch weithin für ihre Rolle in der Pflanze Ausbreitung Strategien, erholsamen Fähigkeit und Kohlenhydratspeicher studiert. Stolonen und Rhizome sind modifizierte Stielen, die entweder oberirdisch (Stolonen) horizontal, wachsen oder unterirdische (Rhizome). Stolonen und Rhizome enthalten auch regelmäßig Abstand Knoten und Internodien sowie meristematic Knoten sind in der Lage, die zu neue Wurzeln und Triebe1. Gab es eine große Anzahl von Studien zu verschiedenen Themen, die Untersuchung von Wurzeln, Stolonen und Rhizome von verschiedenen Pflanzen2,3,4,5,6,7, 8. Wurzelwerk, Stolonen und Rhizome der Turfgrasses werden wegen ihrer Bedeutung in Turf Qualität9Frühling grün-bis nach dem Winter Dormanz10, und Verschleiß Toleranz und erholsamen Fähigkeit11untersucht. Diese Organe sind darüber hinaus auch in anderen Kulturen, Turfgrasses wie Reis12, Soja-4, und Mais13und Weiden, wo seitliche Stiele in Boden-Erosion-Kontrolle-5eine wichtige Rolle spielen, untersucht.
Wurzel Länge Dichte (Wurzellänge pro Boden Volumen) und Durchmesser sind häufig mit Scan Software3,4,5,9,14,15gemessen, 16,17,18. Umgekehrt, Länge und Durchmesser der Stolonen und Rhizome werden in der Regel mit einem Lineal gemessen und Bremssattel3,19,20 und erfordern viel Zeit und Arbeit21,22 , 23 , 24. damit, sie werden oft in einer beschränkten Anzahl von Stolonen oder Rhizome11,20,25 gemessen und beschränken sich oft auf die morphologische Charakterisierung von Einzelpflanzen nur. Das Studium der Ausläufer und Rhizom Merkmale in einem Reifen Baldachin beinhaltet eine große Menge an Biomasse Probenahme, so dass in der Regel nur Ausläufer und Rhizom Trockengewicht Dichte (Gewicht pro Einheit der Fläche) sind bestimmt7,11, 26 , 27. Ausläufer Trockenmasse, in der Tat kann leichter gemessen werden als Ausläufer Länge und Durchmesser von Proben in einem Ofen trocknen. Länge der Ausläufer ist jedoch eine wichtige Arten und sortentypischen Charakter, der nicht gut bezogen auf Trockenmasse ist. Eine aktuelle Studie auf schleichende Weidelgras (Lolium Perenne) gezeigt, dass Proben mit hohen Ausläufer Länge Dichte nicht unbedingt hohe Ausläufer Gewicht Dichte6haben.
Bildanalyse Systeme machen die Analyse der Wurzeln schneller28,29, genauer und weniger anfällig für menschliche Fehler30,21 als traditionelle, manuelle Methoden31,32, 33. Darüber hinaus diese Systeme bieten hohe Flexibilität und einfach zu bedienende Werkzeuge, einschließlich Licht, optische Aufbau und Auflösung, die oft für jede kalibriert sind gescannte Bild34. Pornaro Et al. 24 unter Beweis gestellt, dass das WinRHIZO-System, eine Bild-Analyse-System speziell für die Messung der gewaschenen Wurzeln, Ausläufer und Rhizom Merkmale vollständig als aktuelle Methoden durch die Überwindung analysieren alternative anbieten kann Messfehler durch menschliche Fehler. Für eine morphologische Beschreibung und quantitative Informationen über Ausläufer und Rhizom Wachstum können Bildanalyse Systeme verwendet werden, um eine große Anzahl von Proben schnell, sogar mit eine große Menge an Biomasse, wodurch erhöhte statistische Genauigkeit zu analysieren. Wurzel-Analyse-Software-Pakete bieten daher eine Alternative, zuverlässige und schnelle Methode zur Untersuchung das Wachstum und Morphologie der Stolonen und Rhizome von verschiedenen Pflanzen Arten24.
Wir präsentieren Ihnen ein Experiment durchgeführt, im Nordosten Italiens, Ausläufer und Rhizom Entwicklung der vier Sorten von Bermudagras (Cynodon spp.) zu studieren. Ziel der Studie waren die Vertiefung der Kenntnisse über die Entwicklung der Stolonen und Rhizome ausgesät (“LaPaloma” und “Yukon”) und vegetative (“Patriot” und “Tifway”) Sorten von Bermudagrass. Das Experiment wurde im Mai 2013 gegründet, und Rasen Proben wurden über drei Zeitpunkten ab Herbst 2013 bis Sommer 2015 jährlich [März (vor dem Grün), Juli (volle Vegetationsperiode) und Oktober (vor der Winterruhe)]. Für die Beschreibung und Erklärung dieser Methode haben wir Proben im Sommer der zweiten Wachstumsperiode (Juli 2014), verwendet, wie die großen Biomasse von den Proben zu diesem Zeitpunkt die Notwendigkeit für eine schnelle Analyse begründet. WinRHIZO, eine digitale Bildanalyse-Software-Tool speziell für gewaschene Wurzel Messungen wurde verwendet, um Dichte Ausläufer Länge und Durchmesser zu bestimmen.
Das hier beschriebene Protokoll wurde entwickelt und für das Studium der Turfgrasses bewertet. Jedoch kann es über einen Ausläufer oder Seerosengewächse Arten mit notwendigen Anpassungen entsprechend ihrer morphologischen Eigenschaften, Umweltbedingungen und Probe Reinigung Präzision verwendet werden.
Der mittlere Durchmesser geschätzt durch dieses Protokoll nicht dem Internodium Durchmesser gemessen mit einer Zange zu vergleichen. Die digitale Bildanalyse enthält Knoten und Internodien bei der Berechnung der durchschnittlichen Durchmesser, das ist das Verhältnis zwischen total Projektionsfläche und insgesamt Länge. Wie besprochen von Pornaro Et al. 24mittlere Durchmesser für Bermudagrass Ausläufer mit WinRHIZO System überschätzt Durchmesser mit der Zange auf die Internodium gemessenen Werte erhalten. Ausläufer Durchmesser wird in der Regel verwendet, um den Durchmesser der Ausläufer Internodien beschreiben und ist ein allgemeiner Parameter für botanische Beschreibung18,25verwendet. Aus diesem Grund, Pornaro Et al. 24 darauf hingewiesen, dass durchschnittliche Durchmesser durch WinRHIZO-System geschätzt und der manuell gemessenen Internodium Durchmesser beschreiben zwei unterschiedliche Morphologie Aspekte.
Der Zeitaufwand für dieses Protokoll ausführen bleibt ein limitierender Faktor für die Routineanalytik. Die zeitaufwändigste Phase ist die Reinigung der Proben (Schritt 2.4). Basierend auf unserer Erfahrung, Reinigung eine Rasen-Probe mit einer großen Menge an Biomasse (z.B. 20 x 20 cm) erfordert etwa drei Personen arbeiten für 2 bis 4 Stunden. Wie im Protokoll beschrieben, ist der Reinigungsprozess notwendig für sowohl die digitale Analyse-System und bei der Verwendung der Bremssattel und Herrscher. Wenn Proben aus einer begrenzten Anzahl von Stolonen/Rhizome bestehen, ist die notwendige Zeit, um Daten zu sammeln, mit den beiden Methoden ähnlich. Jedoch mit zunehmender Stichprobengröße muss die Software-basierte Methode einen späteren Zeitpunkt zu erhöhen, nicht der einzige limitierende Faktor ist die Fläche des Scanners. Im Gegenteil, erhöht die Zeit notwendig, Organe mit dem Lineal und Bremssattel zu messen mit der Anzahl der Stolonen und Rhizome, die Komposition der Probenmaterials.
Das Studium der Ausläufer und Rhizom Züge in Reife Turfgrasses basiert seit jeher auf der Messung des Internodienlänge und Durchmesser und Masse trocken Gewicht7,11,26,27. Manuelle Messungen sollte aufgrund der großen Zeitaufwand, Proben und der Rückgang der Genauigkeit mit der Zunahme der Stichprobenumfang zu verarbeiten auf eine kleine Anzahl von Stolonen oder Rhizome11,20,25. Als solche können sie nur für einzelne Pflanzenexperimente geeignet. Der Vorteil eines Bild-Analyse-Systems gegenüber herkömmlichen Methoden ist, dass es, dass die Länge der großen Ausläufer oder Rhizom messen können Proben und Länge Dichte und spezifisches Gewicht (Gewicht-Längenverhältnis) zu berechnen.
Dieses Protokoll ermöglicht die Messung der Ausläufer und Rhizom Länge und Berechnung der Länge dichten in Proben mit großen Biomasse (für welche Ausläufer oder Rhizom Gewicht derzeit der einzige Parameter zur Beschreibung der Morphologie ist). Ausläufer und/oder Rhizom Länge möglicherweise ein wichtiger Parameter für viele Studien, die mit aktuellen Techniken nicht abgeschätzt werden kann. Neuere Untersuchungen zu den verschiedenen Rasen Arten6 haben gezeigt, dass Gewicht und Länge Dichte Ausläufer nicht immer darauf hinweist korreliert sind, dass es möglicherweise wünschenswert, mehrere Parameter, um angemessen zu beurteilen, die Ausläufer und Rhizom-System messen. Diese Methode sollte werden, besonders geeignet für Sorte oder kulturellen Management Praktiken Vergleich.
Mehrere Schritte innerhalb des Protokolls sind entscheidend für eine erfolgreiche Abschätzung der Länge und Durchmesser von Stolonen und Rhizome. Wegen der hohen Variabilität der Morphologie der Pflanze unter verschiedenen Umweltbedingungen, die Anzahl der Proben (Stichprobenumfang) und Grundfläche Dimensionen, die soll Stichprobe (Stichprobe Dimension) sollten sorgfältig geprüft und werden so repräsentativ wie möglich von die Bevölkerung um Daten Variabilität zu reduzieren. Darüber hinaus reinigen Wurzeln und Blätter aus den Stolonen bevor Analyse akribischen Arbeit erfordert besondere Aufmerksamkeit, Überschätzung zu vermeiden ist. Zu guter Letzt vor der Verarbeitung von Bildern empfiehlt es sich, sorgfältig auszuwählen die Breite der Durchmesser Klassen und minimalen Durchmesser mit Software-Optionen um alles auszuschließen, die keine Ausläufer oder Rhizom aus der Analyse ist. Jedes Experiment erfordert die Auswahl der einen Mindestdurchmesser Durchmesser mit Arten und Umweltbedingungen, einschließlich kulturelle Praktiken variiert.
The authors have nothing to disclose.
nichts.
laboratory tape | Any | NA | Tags may be used to label samples |
plastic bags | Any | NA | Any plastic bag can be used to keep samples until they have been cleened |
paper bags | Any | NA | Any paper bag can be used to keep cleaned samples to avoid mold formation |
paper towels | Any | NA | After samples have been washed with water and before to clean them with scissors it is helpful to put them on a paper towel to absorb water |
scissor | Any | NA | Any scissor with fine tips |
aluminium box | Any | NA | Any aluminium box large enough to contain the sample |
trays | Any | NA | It is helpful to use plastic tray to hold samples during the cleaning process |
sieve with 0.5-1.5 mm openings | Any | NA | Any sieve |
soil core sampler | Any | NA | We use core sampler for soil collection with diameter of at least 8 cm |
squared frame | Any | NA | To collect large samples we use squared frame (10 x 10 cm, or 15 x 15 cm, or 20 x 20 cm) |
spade | Any | NA | We use spade to pull out samples delimited with squared frame |
precision electronic balance | Any | NA | Any precision electronic balance |
laboratory oven | Any | NA | Any laboratory oven |
freezer | Any | NA | Any freezer |
WinRHIZO software | Regent Instruments Inc., Quebec | NA | Excluded the "basic" version |
WinRHIZO scanner | Regent Instruments Inc., Quebec | NA | WinRHIZO system includes a scanner calibrated for the software |
WinRHIZO scanner accessories | Regent Instruments Inc., Quebec | NA | WinRHIZO system includes accessories, as plastic tray and positioner, to be used with the scanner |