ひと多能性幹細胞からのニューロンとアストロ サイトの三次元共培養系によるシナプス局所回路におけるモデリング

アストロ サイトは、さまざまな構造サポートを超える機能責任中枢神経系 (CNS) の中で非常に豊富なグリア細胞型。確立および開発¹の中に成熟したシナプスのクラスタ リングによるシナプス形成可溶性因子と細胞外マトリックス (ECM) の分泌をアストロ サイトを支援します。彼らはまたから細胞外シグナル伝達^2,3,4、5シナプスの可塑性、健康を維持するために重要な役割を果たすし、恒常性の長期的な安定性に貢献細胞外カリウム、グルタミン酸とエネルギー基質および ATP^6,7,8の分泌を調節することによって環境。最後に、彼らは櫛谷電流⁹に影響を与える神経伝達に貢献できる、髄鞘化¹⁰の推進など他のセルタイプを通じた活動に直接に影響を与えることができます。重要なは、異常やアストロ サイトの機能不全は、多くの神経発達症候群や成人神経につながることができます、ので、改良するために設計された神経回路網内のニューロンとアストロ サイトを含めるには明白な必要性内因性の脳環境のモデル。アストロ サイトの不可欠な特性は、神経シナプス^1,11,12フォーム動的相互作用する能力です。グリア細胞がない場合は、ニューロンは、シナプスは、一般的にも不足機能成熟度¹³の限られた数を形成します。

人間のアストロ サイト、転写、形態学的および機能的特性を表示-増加のサイズと、分岐として種特異的な遺伝子の複雑さなど-ことがない齧歯動物^{12,14で締めくくっています。 15}。その結果、ひと多能性幹細胞 (hPSC) を利用した研究-派生神経細胞文化パラダイム^{16 や傷害モデル、新規治療法を開発しながら培養中枢神経系疾患を調べる手段として広くなるが ,17}。さらに、hPSCs は、人間のシナプス形成と一次組織^18,19を必要とせず関数の研究を許可します。

シナプス回路機能に貢献するさまざまなセルタイプおよび信号の理解にバリアは、人間の脳の関連モデルの欠如です。そのシナプス ネットワーク高再現性と再現性を要約する適切なプラットフォームの必要性があります。3次元培養システムの生産に関心が最近、浮上している (‘organoids、’ として広く知られている「回転楕円体、’ または ‘ミニ脳’) 携帯とマクロのレベルで構造の複雑な三次元 (3 D) をモデル化する²⁰ 。3次元培養システムは、典型的な 2D 共パラダイム^21,22の中には通常不在か限られた ECM と細胞間の相互作用を保持します。テクニックの豊富さは 3 D 神経スフェロイド^23,24,25; を養殖、します。しかし、多くは長い培養期間を必要とする (月への年) 自発的な開発とレイヤー保存、ユーザーと出展出力を非常に小さな制御。

ここでは、急速に体系的な方法を示すし、一貫して複数の細胞のタイプ (前分化ニューロンとアストロ サイト) 間強酸細胞間相互作用に由来する hPSCs 球共培養系 (「小惑星’)^{26 に細胞を組み立てることによって}3 D で人間固有の形態学的複雑さを要約します。この高密度の神経システムは、時間をかけて成熟したプロパティとすることができます上映または高スループット方法で試金される均等に分散ニューラル サブタイプを生成します。初めて人間のアストロ サイトがこれらの三次元共培養系におけるシナプス ネットワーク バースト活動を誘発することを示す.さらに、このプロトコルは、中枢神経系の地域別の id に指定されたセルを利用して必要に応じて他の複数の細胞型の相互作用を研究する、異なるサイズの球体を生成に容易に適応。