Summary

Indução cirúrgica simples da perda auditiva condutora com verificação usando a visualização do otoscópio e a resposta comportável do startle do clap no rato

Published: October 26, 2019
doi:

Summary

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer uma indução de perda auditiva condutora replicável por meio de punção cirúrgica da membrana de tympanic e verificação por visualização de otoscópio e avaliação comportamental por verino de gonorreia.

Abstract

A perda auditiva condutiva (CHL) é um comprometimento auditivo prevalente em seres humanos. O objetivo do protocolo é descrever um procedimento cirúrgico simples para induzir CHL em roedores. O protocolo demonstra CHL por punção de membrana tympanic. A verificação da cirurgia de CHL foi por exame de otoscópio e avaliação comportamental por resposta ao vermão, tanto replicável quanto confiável, e são métodos simples para demonstrar que a perda auditiva ocorreu. O procedimento simples de CHL é vantajoso devido à sua reprodutibilidade e flexibilidade a diferentes atividades na pesquisa de perda auditiva. As limitações da indução de LCH por abordagem cirúrgica estão associadas à curva de aprendizagem para realizar o procedimento cirúrgico e a confiança no exame audiológico. Induzir uma deficiência auditiva por CHL permite que um estude prontamente as manifestações neurais e os resultados comportamentais da perda auditiva.

Introduction

A prevalência da perda auditiva em crianças e adultos é de aproximadamente 19,5%1 e 15,2%2, respectivamente. No entanto, aproximadamente 39,3% de todos os recém-nascidos com triagem auditiva anormal não recebem tratamento corretivo conforme relatado pelo Centers for Disease Control3. A perda auditiva é uma condição amplamente estudada, e o roedor é um modelo robusto para estudar distúrbios normais relacionados à audição e audição4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. Distúrbios auditivos como perda auditiva condutiva (LE) levam a um aumento da depressão sináptica de curto prazo no córtex auditivo4,o que resulta em inclinações psicométricas mais rasas associadas a limiares de detecção de modulação de frequência 5. Modelos de perda auditiva condutora por remoção/deslocamento cirúrgico do malleus, punção da membrana tympanic (TM) ou tampão de ouvido são facilmente empregados e permitem a rápida indução do modelo de perda auditiva5,14 ,15,16,17,18. O objetivo do protocolo e método atual é demonstrar um modelo CHL simples e reproduzível em roedores.

O protocolo atual é barato (US$ 300 com todas as ferramentas) e prontamente alterado para diferentes atividades de pesquisa. O rato teve avaliações detalhadas da anatomia do ouvido médio19,20,21,22,23, abordagens cirúrgicas24, modelos em otitis media25, 26,27 e regeneração de perfuração TM16,17,18,28,29,30,tornando-se um modelo ideal para estudar perda auditiva. Aqui, um procedimento simples da indução de CHL é descrito com verificação pelo otoscope e pela avaliação com resposta do startle do aplauso no rato, que então pode ser usado para explorar sequelas adicionais da perda de audição. O procedimento de LE é induzido pela punção cirúrgica do TM. A verificação do procedimento de CHL é realizada por visualização de otoscópio para determinar a ausência do TM. A avaliação comportamental é realizada por um alto nível de pressão sonora (DB) (SPL) palmas. Este método foi aplicado previamente em uma variedade de roedores. É fácil de replicar, produz diferenças psicométricas robustas e mudanças nas respostas fisiológicas neurais4,5,16,17,18.

Protocol

O presente estudo e procedimentos foram aprovados pelos comitês de ética em pesquisa animal da Universidade da Cidade de Hong Kong, da Universidade de Hong Kong e do Departamento de Saúde da Região Administrativa Especial de Hong Kong. 1. Animais Use ratos Sprague-Dawley (SD) de dois meses (N = 90, 200-250 g).NOTA: Roedores foram fornecidos pela unidade animal do laboratório acreditada da universidade de Hong Kong. Mantenha os ratos uma temperatura constante de 25 …

Representative Results

O procedimento simples do CHL foi executado em 90 ratos e fora deste grupo 2 teve o sangramento significativo e 2 não teve a perda da audição o next day como avaliado pelo startle comportável do clap. Estes quatro ratos foram descartados. Os ratos devem ser descartados conforme descrito pelas razões da discussão devido a complicações. Induzir a punção e/ou o deslocamento/ou a remoção do malleus do TM(figura 2B)elicia CHL, que conduz às manifesta?…

Discussion

Descrevemos uma simples indução cirúrgica de CHL com verificação usando visualização de otoscópio e resposta comportamental de verniz em ratos. Aqui demonstramos o método em rato e anteriormente este método foi aplicado a gerbils e camundongos. O método pode ser facilmente adotado para outros roedores. A indução da CHL permite o estudo de uma forma sutil de perda auditiva que se manifesta em alterações corticais auditivas e achados comportamentais psicofísicos4,<sup clas…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabalho foi apoiado em parte pelo Hong Kong Research Grants Council, Early Career Scheme, Project #21201217 a C. L., para o projeto Brain mapeamento eletrofisiologia guiada com aplicações em audição e pesquisa de poluição sonora. Agradecemos ao Posgrado en Ciencias Biomédicas, ao Instituto de Neurobiologiía da Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), ao Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) México pela Bolsa de Pós-Graduação 578458 à FAM Manno.

Materials

Latex, polyvinyl or nitrile gloves AMMEX Use unpowdered gloves 8-mil
Micro spring scissors (see Fig. 1b) RWD Life Science S11035-08 8.0 cm total length, with 3.5mm cutting edge, or similar micro forceps. Standard tweezers with spring action will suffice
Otoscope mini 3000 HEINE  D-008.70.120M Standard LED otoscope will suffice
Rat or mouse JAX labs Any small rodent 
Small rodent cage Tecniplast 1284L Need two cages to separate CHL rodent from hearing rodent. If rodent are in direct contact with one-another, they will startle each other. Cage dimensions 365 x 207 x 140 mm, floor area: 530 cm2/82.15 in2

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Manno, F. A. M., Manno, S. H. C., Ma, V., Barrios, F. A., Cho, W. C., Cheng, S. H., Lau, C. Simple Surgical Induction of Conductive Hearing Loss with Verification Using Otoscope Visualization and Behavioral Clap Startle Response in Rat. J. Vis. Exp. (152), e57993, doi:10.3791/57993 (2019).

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