Frequente de amostra de sangue da cauda-ponta em camundongos para a avaliação da secreção pulsátil de hormônio luteinizante

Função gonadal em mamíferos é dependente da secreção de gonadotrofinas, hormônio luteinizante (LH) e folículo estimulante hormônio, da glândula pituitária. As gonadotrofinas são secretadas em um padrão pulsátil ou aumento em resposta à secreção hipotalâmica do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH). A síntese e secreção de LH e FSH são regulados através de ação endócrina, parácrina e autócrina de uma variedade de moléculas incluindo GnRH hipotalâmico, hormônios esteroides gonadais e o sistema de União-inibina-folistatina, bem como uma miríade de condições fisiológicas, incluindo equilíbrio de energia e estresse. ²

O padrão pulsátil de LH no sangue que decorre uma descarga bastante abrupta de LH no sangue periférico, seguido por aproximadamente exponencial eliminação. Importantes características do padrão incluem a frequência de cada descarga de LH e a amplitude da resposta do LH, ambos os quais são ditados, em parte, pela liberação de GnRH. devido à dificuldade em coletar sangue portal do eixo hipotálamo-hipófise para medição de GnRH pulsátil, a amostragem e a medição de LH é usado como um proxy para o Regulamento de GnRH do eixo hipotálamo-hipófise-gonadal. Portanto, a informação crítica é codificada na frequência e a amplitude dos pulsos de LH, o que não pode ser determinada a partir de uma única amostra.

Análise da secreção pulsátil de LH historicamente tem sido limitada a grandes mamíferos (os seres humanos, primatas e ovelhas) devido ao seu volume de sangue grande e tolerância para coleta de amostra de sangue frequente. Em roedores, amostragem de sangue frequentes limitou-se o rato e conseguida através de habitação cateter atrial. ^{3 , 4} o custo relativamente baixo e a disponibilidade de genética (por exemplo, cre-lox, CRISPR) e manipulações de complexo circuito neural (por exemplo, optogenetics, chemogenetics) fazem ratos um organismo modelo atraente; no entanto, obtenção de amostras de sangue frequentes e posterior análise das concentrações de LH até recentemente, provou indescritíveis. Esta tarefa monumental foi pioneira por Steyn e colegas de trabalho. ¹ desde então, diversos laboratórios começaram a utilizar de amostra de sangue frequentes e ensaios de LH ultra sensíveis para avaliar a secreção pulsátil de LH em uma variedade de paradigmas experimentais. ^{5 , 6 , 7 , 8 , 9} Note-se que a busca de um método prático de coletar várias amostras de sangue dos ratos foi em andamento pelo menos 40 anos¹⁰ , com vários refinamentos feitos ao longo do caminho. ^{11 , 12}

Avaliação dos padrões de pulso do LH (ou seja, frequência e amplitude) representa um refinamento maior no acompanhamento a secreção de gonadotrofinas basal neste modelo animal geneticamente tractable. Tradicionalmente, as concentrações de LH em camundongos foram determinadas em uma amostra de sangue. Uma fraqueza de amostras de ponto único é um conjunto de dados altamente variável, porque as concentrações de LH são naturalmente flutuando durante cada pulso. Outro ponto fraco é que medidas isoladas inerentemente perder informação crítica veiculada pelos padrões de secreção de LH pulso. Assim, um método para coletar amostras de sangue frequentes em comportar-se livremente, ratos desenfreados (exceto para manuseio suave durante a amostragem) fornecerá informações avançadas e revelar-se útil para muitos laboratórios investigando Regulamento hormônio pulsátil.

Aqui, descrevemos um protocolo para a recolha de frequentes (a cada 6 min) amostras de ratos acordados, desenfreadas de sangue. É importante, inclui uma manipulação de protocolo de aclimatação que permite a detecção robusta e contínua de secreção pulsátil de LH em amostras de sangue total coletado durante um período de tempo em que pré e pós-avaliação para um desafio agudo pode ser determinado, como a resposta ao estresse psicossocial de imobilização e contenção. Um ensaio eficaz para as concentrações de LH de amostras de sangue total foi descrito anteriormente; ¹ que este protocolo está focado em um método para coletar as amostras de sangue para medição de pulso do LH.