מערכת פשוטה רב-תכליתי, בעלות נמוכה במבחנה הידרופוני בהצלחה אופטימלי, הפעלת ניסויים בקנה מידה גדול בתנאים סטריליים. מערכת זו מקלה על היישום של חומרים כימיים פתרון וספיגה יעילה שלהם על ידי השורשים ללימודי מולקולרית, ביוכימיה ו פיזיולוגיים.
מגוון רחב של לימודי בביולוגיה צמח מבוצעות באמצעות תרביות הידרופוני. בעבודה זו, מוצג במבחנה גידול הידרופוני מערכת המיועדת הערכת התגובות מפעל כימיקלים וחומרים אחרים עניין. מערכת זו היא היעילה ביותר בהשגת שתילים הומוגנית ובריא של C3 ו- C4 דגם מינים תודרנית לבנה , זיפן דגולה, בהתאמה. טיפוח סטרילי מונע אצות וזיהום מיקרואורגניזם, אשר ידועים גורמים מגבילים צמח רגיל לצמיחה ופיתוח בהידרופוניקה. בנוסף, מערכת זו היא מדרגית, המאפשר את היבול של חומר צמחי בקנה מידה גדול עם נזקים מכניים קלים, כמו גם את היבול של חלקים נפרדים של צמח במידת הצורך. פרוטוקול מפורט הוכחת כי מערכת זו יש הרכבה קלה, בעלות נמוכה, כפי שהיא משתמשת פיפטה מתלים כפלטפורמה העיקרי לגידול צמחים, מסופק. הכדאיות של מערכת זו אומתה באמצעות תודרנית השתילים כדי להעריך את ההשפעה של הסם AZD-8055, מעכב כימי של היעד של קינאז rapamycin (טור). טור עיכוב ביעילות זוהה מוקדם ככל 30 דקות לאחר טיפול AZD-8055 ב רוטס & שוטס. יתר על כן, צמחים AZD 8055-שטופלו מוצגים על פנוטיפ עמילן-עודף הצפוי. הצענו מערכת הידרופוני זו כמו שיטת אידיאלי עבור חוקרי הצמחים במטרה לפקח על הפעולה של הצמח inducers או מעכבי, כמו גם באשר להעריך פלקסים מטבולית באמצעות תיוג-איזוטופ תרכובות אשר, באופן כללי, מחייב שימוש יקר ריאגנטים.
היתרונות של שימוש הידרופוניקה גידול צמחים זוהו נרחב בייצור של צמחים גדולה ואחידה, הפעלת ניסויים לשחזור1,2,3. במערכת זו, ההרכב של הפתרון התזונתי יכול להיות כראוי נשלטים ועל ממוחזר לאורך כל שלבי התפתחות וצמיחה של הצמח. יתר על כן, שורשים לא נתון והאביוטיים מושם, כפי שעלול לקרות בצמחים שגודלו בקרקע, כגון חומר מזין הרעבה ומים מחסור4. כמו הצמחים גדלו hydroponically נוכח פיזיולוגיים מורפולוגיים תכונות דומים למדי לאלו תרבותי בקרקע, מערכת זו כבר בהרחבה מועסקים במחקר כי זה מאפשר פיקוח על צמיחה שורש/לירות קצירת שלהם מבלי פציעות2,5.
בשל האפשרות של שינוי הרכב ואת ריכוז של הפתרון התזונתי, רוב המחקרים שימוש בתנאים הידרופוני בוצעה כדי לאפיין את הפונקציות של מיקרו – ו macronutrients1,3 ,6,7,8. עם זאת, מערכת זו הוכיחה להיות מאוד שימושי למגוון רחב של יישומים בביולוגיה הצמח, כגון להבהיר את הפונקציות של הורמונים וכימיקלים בצמחים. כך למשל, גילוי סטריגולקטונים כמו סוג חדש של הורמונים9 ו של פנוטיפ הצמיחה המואצת המופעלות על-ידי יישום ברסינוסטרואיד10 בוצעו בתנאים הידרופוני. יתר על כן, מערכת זו מאפשרת ניסויים עם איזוטופים שכותרתו (למשל, 14N /15N ו- 13CO2)11,12 להעריך שלהם שהשתלבה חלבונים ו מטבוליטים באמצעות ספקטרומטר מסה.
בהתחשב החשיבות של מערכת זו במחקר הצמח, מספר גבוה של תרבויות הידרופוני תוכנן בהשנים האחרונות, כולל מערכות המשתמשות (i) את ההעברה של שתילים של פלטות מיכלי הידרופוני3, 13; (ii) rockwool המגבילים גישה בשלבים המוקדמים של שורש פיתוח2,14,15; (iii) פוליאתילן מגרסת כמו הגוף צף, מה שהופך את היישום הומוגנית של מולקולות קטנות/טיפולים קשה16; או (iv) מופחתת מספר צמחים9,17. הנפח של טנקים הידרופוני תיאר ברבות מן הפרוטוקולים האלו הם בדרך כלל גדולים (אחסון קטן הנע בין 1-5 L, עד 32 L)18, מה שהופך את היישום של כימיקלים יקר מאוד. למרות מחקרים מעטים לתאר ההידרופוניות תחת תנאים aseptic8,19, ההרכבה של המערכת בדרך כלל די מייגעת, המורכב ההתאמה המושלמת של רשתות שינוי ניילון פלסטיק או זכוכית מכולות5,8,17,20.
בשל החשיבות של תודרנית לבנה כמו צמח מודל, הרוב המכריע של הידרופוניקה מערכות תוכננו עבור זה מינים1,2,8,14,18, 19 , 20. עם זאת, ישנם כמה מחקרים דיווח התכונות גידול הידרופוני מיני צמחים אחרים עם רעלני של זרעים לשפר את הנביטה שלהם ומחשיבה סינכרון במבחנה8,16 . כדי לעבוד בקנה מידה גדול, פיתחנו פרוטוקול עבור הגדרת מערכת הידרופוני תחזוקה פשוטה, בעלות נמוכה המאפשר בתנאים סטריליים לגידול צמחים, כולל לבנה א ו מינים אחרים, כגון הדשא זיפן דגולה. השיטה המתוארת כאן מתאימה לניסויים שונים, ככל הגידול שתיל יכול להיות מוגדל, מסונכרנים, בקלות תחת פיקוח. יתר על כן, מערכת זו יש יתרונות רבים כמו: (i) על מנת להרכיב וסופן ולהשתמש מרכיביו; (ii) זה מאפשר את יישום קל של כימיקלים שונים לתוך המדיום הנוזלי; (iii) את השתילים לנבוט ולגדול ישירות בהמדיום תרבות ללא הצורך של העברה אל מערכת הידרופוניקה; (iv) לירות ושורש הפיתוח/הגידול יכול להיות תחת פיקוח צמוד, השתילים נקצרים ללא פיצויים; ו (v) זה עושה את זה אפשרי לעבודה בקנה מידה גדול, שמירה על מצבים פיזיולוגיים.
מבנה הידרופוני ממוטבת זה מאפשר התרבות מוצלחת במבחנה של צמחים. הזרעים לנבוט על המדיום מוצק על משטח שטוח של עצה פיפטה, רווח ניכר לעומת מערכות איפה זרעים רטובים עם הפתרון התזונתי. יתרון גדול של השיטה היא כי במהלך הפיתוח שתיל, שורשים לקבל ישירות עם המדיום הנוזלי ללא הצורך של העברה. יתר על כ…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי קרן מחקר סאו פאולו (FAPESP; להעניק 12/19561-0), אגודת מקס פלאנק. אליאס פ Araújo (FAPEMIG 14/30594), קרולינה ג מונטה בלו (FAPESP; Mafra גרנט 14/10407-3), Valéria (FAPESP; גרנט 14/07918-6), ו- Viviane ג ה דה סילבה (גלימות/CNPEM 24/2013) אסירי תודה על המלגות. המחברים מודים כריסטיאן מאייר מ אינסטיטוט ז’אן פייר Bourgin (INRA, ורסאי, צרפת) על בנדיבות מתן נוגדנים נגד RPS6. המחברים תודה RTV UNICAMP והקלטת אד פאולו Aparecido de Souza מנואל לתמיכה טכנית שלהם במהלך השמע.
Ethanol | Merck | 100983 | |
Sodium hypochlorite solution | Sigma-Aldrich | 425044 | |
Polysorbate 20 | Sigma-Aldrich | P2287 | |
Murashige and Skoog (MS) medium including vitamins | Duchefa Biochemie | M0222 | |
2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES) monohydrate | Duchefa Biochemie | M1503 | |
Agar | Sigma-Aldrich | A7921 | |
Potassium hydroxide | Sigma-Aldrich | 484016 | |
Laminar flow hood | Telstar | BH-100 | |
Hotplate | AREC | F20510011 | |
Growth chamber | Weiss Technik | HGC 1514 | |
Glass Petri dish (150 mm x 25 mm) | Uniglass | 189.006 | |
200 μL pipette tip racks | Kasvi | K8-200-5 * | |
300 μL multichannel pipette | Eppendorf | 3122000060 | |
300 μL pipette tips | Eppendorf | 30073088 | |
200 μL pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
200 μL pipette tips | Eppendorf | 30000870 | |
Scissors | Tramontina | 25912/108 | |
Tweezer | ABC Instrumentos | 702915 | |
Scalpel blade | Sigma-Aldrich | S2771 | |
Adhesive transparent tape (45mm x 50m) | Scotch 3M | 5803 | |
Disposable plastic boxes, external dimensions: 353 mm (L)x 178 mm (W) x 121mm (H) | Maxipac | 32771 |