Яичников культур тканей могут использоваться в качестве модели развития, овуляции и фолликул атрезии фолликулов и указать механизмы регулирования динамических процессов, яичников.
Периодически млекопитающих женщины овуляция почти постоянное количество яйцеклеток во время каждого цикла эструса. Для поддержания таких регулярность и периодичности, регулирование происходит на уровне гипоталамо гипофизарно гонадной оси и на развитии фолликулов в яичниках. Несмотря на активные исследования механизмы развития фолликула не ясны из-за нескольких этапов от активации неактивных первичных фолликулов к овуляции и из-за сложности правил, который отличается на каждом этапе фолликулярной. Для изучения механизмов развития фолликула и динамика фолликулов на протяжении всего цикла эструса, мы разработали модель яичника культуры ткани мыши, который может быть использован для наблюдения развития фолликула с помощью микроскопа. Разработки систематической фолликула, периодических овуляции и атрезии фолликулов могут быть воспроизведены в модели искусственного яичника, и в условиях культуры можно модулировать экспериментально. Здесь мы продемонстрировать полезность этого метода в изучении механизмов регулирования развития фолликула и других явлений, яичников.
Женщины мыши яичники содержат несколько тысяч фолликулов1, и периодические овуляции созревает примерно десять яйцеклеток на каждый цикл эструса. Фолликулов, подразделяются на несколько стадий развития: Братство пресвитериан, начальное, среднее, полостная и Graafian фолликулов, в зависимости от формы гранулезы сотовой слоя, окружающих каждый ооцитов. Большинство первичных фолликулов неактивны, и некоторые из них активизируются и превращаются в первичных фолликулов на каждый цикл эструса2. После этапа вторичных фолликулов развития фолликула регулируется главным образом гонадотропинов, фолликулярная стимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ). Однако изначальное и первичных фолликулов развития независимо от гонадотропина, и регулятивных механизмов, которые регулируют эти этапы остаются плохо inderstood3,4,5. Помимо факторов роста и гормонов изначальное и первичных фолликулов регулируется взаимодействием фолликулов6,7. Таким образом мы выступали анализ динамики фолликула в мыши тканей яичника и расследование связанных регулирующих механизмов, с помощью яичников культур тканей8,9,10.
Здесь мы представляем два методы модели яичников культуры ткани. Первый используется для анализа развития фолликула путем измерения фолликулярной областей, а вторая используется для изучения механизм регулирования во время раннего развития фолликула от изначального вторичных фолликулов сцену с трансгенных мышей. Для анализа развития фолликула мы главным образом используется яичников 4 – неделя старый самок мышей, потому что они позволяют легко визуализации фолликулов. Чтобы побудить периодических овуляции и модели в естественных условиях развития фолликула, мы воспроизводится LH всплеск и наблюдаемых овуляции, атрезии фолликулов и секрецию эстрадиола в условиях культуры ткани. Образы культивировали яичников были захвачены, и отслеживания изменений в области фолликулярной были проанализированы процессы развития фолликула. Однако в светлых местах микроскопии анализа, неясным различие между изначальным и начале первичных фолликулов. Таким образом, мы разработали метод для обнаружения малых фолликулов и различие между изначального, первичной, и вторичных фолликулов в культивированный яичников тканей с помощью Oogenesin1 (Oog1) pro3. 9 и яичников трансгенных мышей R26-H2B-mCherry дней 0 и 4 после рождения11. Oog1 выражение, обнаруживаемая в яйцеклеток после вступления в мейоз и постепенно увеличивается с развития фолликула, позволяя наблюдения за переход от изначального первичных фолликулов с помощью промежуток времени изображения культивировали завязи ткани11 ,12. Хотя Морфологические методы были использованы для изучения факторов, которые активируют изначальное спящих фолликулов13,14,,1516, является развитие физиологической фолликулов в яичниках трудно обнаружить, и воздействия различных факторов остаются uncharacterized. Нынешние методы культуры были разработаны для устранения этого недостатка в реальном времени анализ целевых факторов.
В настоящем исследовании мы отслеживаются фолликулярной развития методом покадровой изображений и охарактеризовал процесс развития фолликула. Наши новые методы предлагают беспрецедентный инструмент для изучения физиологии яичников.
В этом исследовании мы разработали две новые методы для изучения развития фолликулов в яичниках мыши. Первый метод предполагает культуры тканей нарезанный яичников взрослых мышей, следуют анализ развития фолликула, а вторая включает в себя использование покадровой imaging для визуализа?…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим д-р Naojiro Minami (Университет Киото) за предоставление Oog1pro3.9 мышей. Это исследование было поддержано Nitto фонда и JSP-страницы (KAKENHI # JP15H06275).
Follicle stimulating hormone from human pituitary | SIGMA | F4021 | |
Lutenizing hormone from equine pituitary | SIGMA | L9773 | |
Penicillin-streptomycin solution | Wako Pure Chemical Industries | 168-23191 | |
MEM a, GlutaMax, no nucleotides | Thermo Fisher | 32561037 | |
Glass bottom dish | MatTek | P35G-0-10-C | 35mm dish, No. 0 coverslip, 10mm glass diameter |
Millicell cell culture insert | Merck Millipore | PICM0RG50 | Diameter: 315 mm, pore size: 0.4 mm, material: hydrophilic PTTE |
3.5cm cell culture dishes | greiner bio-one | 627160 | |
50ml / centrifuge tube with triple seal cap | IWAKI | 2345-050 | |
Low-profile disposable blades 819 | Leica | 14035838925 | |
LSM 710 | Carl Zeiss | Confocal microscope | |
CellVoyager, CV1000 | Yokogawa Electric Corporation | Time-lapse imaging | |
BZ-X700 | KEYENCE | Time-lapse imaging |