Incorporare i periciti un tallone di cellule endoteliali Assay di germogliatura

L’angiogenesi è vitale per l’embriogenesi appropriato e la guarigione della ferita, e svolge anche ruoli chiave nelle numerose malattie compreso la malattia dell’arteria coronaria e¹ progressione di cancro. ^{2 , 3} avere una migliore comprensione di come l’angiogenesi si verifica durante lo sviluppo normale, e come esso viene riattivato in contesti patologici, è fondamentale per lo sviluppo del romanzo, terapeutica efficace. Fedele in vitro modelli che ricapitolano le tappe importanti e tipi cellulari coinvolti nell’angiogenesi in vivo sono necessari per permettere ai ricercatori di meglio caratterizzare i meccanismi molecolari che guidano angiogenesi e fare nuove scoperte in regolazione endoteliale.

Nakatsu e Hughes hanno ottimizzato un saggio di perlina germogliatura che hanno dimostrato subisce delle numerose fasi note di germogliatura angiogenesi. ^{4 , 5} lo scopo del metodo qui presentato è di costruire, con il dosaggio ottimizzato da Nakatsu e Hughes incorporando perictyes in test, in modo che i ruoli di paracrine e juxtracrine delle cellule murale in germinazione delle cellule endoteliali possono essere incorporati in l’angiogenesi nuovi studi. I periciti sono cellule murale che sono definite dal loro ruolo come cellule che mantengono stretto contatto fisico con le cellule endoteliali a causa del loro essere incorporato nella membrana basale vascolare. ⁶ cellule endoteliali e periciti impegnano in complesso cross-talk tramite vie tra cui tacca di segnalazione segnalazione, Ang-Tie2, PDGFRβ, TGFRβ e molti altri. ^{7 , 8} modelli di Mouse carenti in queste vie di segnalazione dimostrano Pericita scarsa copertura di sviluppare il sistema vascolare nell’embriogenesi, che conduce al povero rimodellamento vascolare e sistema vascolare disfunzionale. ⁷ inoltre, il ruolo dei pericytes nell’angiogenesi patologica è importante ma spesso sottovalutato. Ad esempio, una caratteristica unica del sistema vascolare del tumore è che i vasi sono più immaturi, che perde e disfunzionale dovuto Pericita scarsa copertura. ⁹ è stato proposto che la presenza o l’assenza dei pericytes drammaticamente urta il fenotipo dei vasi sanguigni del tumore ed è un importante mediatore delle risposte alle terapie antitumorali e antiangiogenici. ⁹ così, compreso il ruolo dei pericytes in saggi in vitro è la chiave per catturare più completamente i meccanismi importanti di regolazione endoteliale.

Anche se ci sono molti saggi in vitro ed ex vivo attualmente impiegati per studiare l’angiogenesi, ci sono lacune di considerare in ciascuno. Alcuni, come proliferazione endoteliale e saggi di migrazione endoteliale, sono eccessivamente semplificati e concentrarsi su una funzione endoteliale in un ambiente isolato sulla plastica di coltura del tessuto. ¹⁰ altri saggi si verificano in un altro 3 dimensionale (3D), come l’analisi di formazione del tubo di Matrigel,¹⁰ ma queste analisi sono ancora molto semplificate e concentrano maggiormente sulla capacità delle cellule endoteliali per migrare e formare de novo vascolare strutture, al contrario di germinazione dal sistema vascolare pre-esistenti. Inoltre, nessuno di questi saggi incorporare tipi cellulari murale. Ci sono ex vivo modelli come l’analisi dell’aorta di anello che incorporano i periciti presenti nell’organo ospitante, ma la manipolazione genetica di questi modelli è molto più impegnativo a causa della necessità di generare modelli murini transgenici o knockout della percorsi di interesse. Il tallone di germogliatura dosaggio è ideale perché modella germogliare endoteliale, proliferazione, migrazione e formazione anche l’anastomosi e lumen in una matrice 3D. ⁴ il dosaggio consente fedelmente meccanicistico valutazione delle molte diverse fasi di germinazione, pur consentendo per diretta modificazione genetica delle cellule endoteliali o pericytes in un ambiente più controllato. I coaguli di fibrina contenente microsfere di germogliatura possono essere facilmente risolto, macchiati e ripreso in diverse fasi di germinazione; questi germogli possono anche essere inseriti in una camera di imaging dal vivo per eseguire la formazione immagine in tempo reale di germogliatura. La metodologia presentata qui è ideale per studiare i meccanismi di base dell’angiogenesi attraverso in phenotyping profondità e analisi approfondita delle vie attivate durante l’angiogenesi.