コーヒーのベリーの穴あけ器の科学的なモニタリングのためのハワイ プロトコル: コーヒー生態系世界のモデル

注: プロトコルのスペイン語翻訳は、補助ファイル 1として提供されます。 1. コーヒー フィールド内サンプリング ゾーンを定義します。 グローバル ポジショニング システム (GPS) 装置を使用して監視するコーヒー畑の境界を調査します。グローバル情報システム (GIS) にフィールド座標をインポートおよびコーヒー畑のマップを生成します。 「ゾーン」(すなわち、多角形)、それぞれ約 335 m2フィールドを分割します。これらは、フィールド間で体系的なランダム サンプリングのデザインを確保するため使用されます。 2. 電子システムでデータ収集アプリケーションを作成します。 次の連結されたデータベースから成るデータ収集アプリケーションを構築、電子データ収集プラットフォームを使用して:トラップ ゾーン、サイト サービス、気象観測装置、および管理。注: これらのデータベースは、コレクションとデータの組織のプロトコルのすべての以降の手順で使用するされます。 トラップデータベースの ‘サイト名’、’トラップ番号’、’展開日’、’フィールド技術者名’、’展開写真’、および各トラップの GPS 座標へのリンクのフィールドを作成します。 ゾーンデータベースの ‘サイト名’ と ‘ゾーン番号’、リンクと各ゾーンを表示するジオリファレンス サイト マップのフィールドを作成します。 サイト サービスデータベースの ‘サイト名’、’日付’、’フィールド技術者名’、および ‘サイト メモ’ のフィールドを作成します。サイト サービス内では、データベースは次の入れ子になったデータベースを作成します。 レコード トラップ トラップ キャッチの番号 (親トラップデータベース内の関連するトラップ配置レコードにリンクで) と写真へのトラップ サービスを含めるし、カウントをトラップします。 レコード フェノロジー写真ゾーン サービス, ベリー侵入評価 (緑の合計数は果実、緑の果実、 bとレーズンと緑の果実が出没) と親に関連するゾーンのレコードへのリンクゾーンデータベース;このレコードには、サンプリングされた各ツリーの GPS 座標も含まれています。 レコードのサイト名、日付、データのダウンロード、およびバッテリー チェックに気象ステーション サービスが含まれます。 ベリー解剖ラボ技術者名、日付、および CBB 位置 (AB または CD) およびごと切り裂かれたベリーの死亡率カテゴリ (生きている、死んでいる他の原因、またはBeauveria 被害による死者) を記録するが含まれます。 気象台データベースの ‘サイト名’、’駅番号’、’展開日’、’フィールド技術者名’、’展開写真’、および各気象台の GPS 座標へのリンクのフィールドを作成します。 管理データベースのフィールド ‘管理の実践型’、’日付’、’サイト名’ を作成します。 3. 準備し、CBB の動きを監視するためのトラップを配置 各フィールドの CBB の動きを監視するために必要なトラップの数を決定します。注: フィールドごとのトラップ密度に近い小さなフィールド 5 トラップ (~0.5 ha) と大規模なフィールドの 10 トラップ (~ 1 ha)15。 雨水による殺す溶液の希釈を避けるために各トラップ コレクション カップに充填ライン上に排水の穴のシリーズを作る、画鋲を使用して。製造元の指示に従って漏斗のトラップを組み立てます。 プロピレング リコール、水 800 mL 200 mL から成る殺すソリューションの 1 L を準備します。次に、メタノール: エタノールの 3:1 溶液から成る誘引物質の混合物を準備します。誘引剤の 40 mL を注ぎ半透ポリ袋 (2 ミル、3 インチ x 4 インチ)、輸送用コンテナー内の場所。注: 半透性袋 CBB を集めて開いているバイアルよりも実行している、低溶出率16のためルアーを補充するより少なく頻繁な訪問があります。注意: メタノールおよびエタノール可燃性液体、有毒である場合、吸入や摂取、皮膚や眼刺激です。これらの化学物質は、手袋、眼の保護具と防護服を着用しながら部屋を換気処理必要があります。 フィールド全体にランダムに分散させてトラップを配置します。0.5 – 地面の上の 1.5 m のトラップを配置し、通路のクリアします。木のトラップを効果的に保護棒が使えます。将来の識別のため各トラップに永久的なマーカーでサイト名とトラップ番号を書きなさい。 グライコール殺す 100 mL でトラップ コレクション カップを記入し、所定の位置にしっかりとカップをネジします。それぞれ誘引の袋にペーパー クリップを添付し、トラップの中心にバッグをフックにペーパー クリップを使用します。 電子データ収集プラットフォーム搭載モバイル デバイスを使用して、トラップデータベースに移動し、サイト、日付、トラップ番号、およびトラップの写真から成る新しい配置レコードを作成します。注: 各フィールド内のトラップの場所は、GPS を介してモバイル デバイス上に自動的に記録します。 4. サービス トラップ フィールドに到着すると、電子システム内でサイト サービスデータベースに移動し、サイト名、日付、およびフィールド技術者名から成る新しいサイト サービス レコードを作成します。注: 初期トラップ サービスは実施 2 週間トラップの展開後とその後 2 週間ごとです。高解像度のトラップをキャッチした場合データが必要な毎週トラップ サービスを行う可能性があります、私たちは隔週サンプリングがシーズン (図 1) 全体の一般的な動きの傾向をキャプチャするための十分な注意が。 フィールドにトラップを探します。プラスチック製の容器の上に細かいメッシュ手ふるい (メッシュ サイズ 0.8 – 1.0 mm) を置き、ふるいを通してコレクション カップから殺すの溶液を注ぐ。コレクション カップに戻って殺すソリューションを転送し、コレクション カップから CBB のすべてが削除されていることを確認する約液体にシュッと振る。 新しいサイトのサービス レコード内でトラップ サービスのデータベースに移動し、新しいトラップ サービス レコードを作成します。関連するトラップ番号を入力し、バック グラウンドでサイト名とトラップ番号ふるいを撮影します。トラップ サービス記録に写真を保存します。 スプーンや金属のヘラを使用して、70% エタノールでいっぱいバイアルにすべての昆虫をスクープします。ラベル、サイト、日付、およびトラップ番号バイアル。 新鮮な殺すソリューションとトラップの上へネジ コレクション カップを補充します。1 回あたり月は石鹸水でコレクション カップを洗って、すすぎと新鮮な殺すソリューションに置き換え。また誘引・月に 1 回または必要に応じてバッグを交換してください。 5. 植物のフェノロジーのゾーン サイトのサービス レコード内でゾーン サービスデータベースに移動し、新しいゾーンのサービス レコードを作成します。リンク先のゾーンデータベースにあるサイト マップからサンプリング ゾーンを選択します。 サンプリング バイアスを避けるためは木の拠点が表示されますのみランダムに鋳造目下方でゾーン内からツリーを選択します。選択されたツリーの前に立って、胸の高さの周りの側枝をランダムに選択します。ルーラーのカメラの視野から生殖部分 (ノード、蕾、花、果実) のいずれかがブロックされないことを確かめて選択したブランチに定規をクリップします。 ルーラーとターゲット分岐の全体が表示されていることを確認 1 つの写真を撮る。全体のツリーの 2 番目の写真を取る可能な限り写真の中間レベルのキャノピーの多くを取得してください。ゾーンのサービス記録に両方のフェノロジー写真を保存します。 6 緑の果実の被害評価のサービス ゾーン フェノロジー用分岐があると思われる場合 > 30 緑の果実は、少なくとも枝に果実の数をカウントするエンドウ豆サイズ (~0.6 cm) と大きく、カラー (スケール 77 8517の BBCH) で明るい黄色がかった緑に緑。ゾーンのサービスレコードにこの番号を入力します。注: 分岐を行う場合フェノロジー表示する 30 緑の果実の目に見える。選択バイアスを避けるために距離からこれを行います。 またゾーン サービスレコードの枝に CBB で出没する緑の果実の数を入力します。出没する果実が中心のディスクに通常ある小さい穴を有するCBB は、穴に表示されないことがあります。 目に見える緑の出没するベリーの数を入力b菌の白します。菌は、CBB の見られるかもしれない周囲の入口の穴および/または。注: さらにアッセイは、これは特別な関心の場合、菌種を識別するために必要かもしれない。 枝にレーズン (乾燥果実) の数を入力します。経営 (例えば、ストリップ ピック) と CBB の侵入の間の関係を理解するこの情報を使用できます。 分岐から 3 つの出没する緑の果実を収集します。これらはラボに戻って撮影してベリー内 CBB の位置を評価するために解剖。注: 緑の損傷評価のため使用されているブランチがある場合、ゾーン内の他の枝から出没する果実を取得することが < 3 緑の果実が出没します。 プラスチック製コンテナーとサイトと日付ラベルに出没する緑の果実を配置します。彼らは研究室に戻って運ぶことができるまでクーラーは氷の上にコンテナーを格納します。注: 理想的には、果実が切り裂かれる CBB の最大の生存を確保するためのコレクションの 1-3 日以内。 果実 (必要に応じて) 14 ° C の演習での格納 (s. Fortna ・ r ・ ホリングスワース、パーソナル通信) いいえ、死亡率にはほとんどの 3 日前まで。 フェノロジーの手順を繰り返し、各サンプリング ゾーンに損傷評価をベリーします。注: 約 25 支店は大規模農場のサンプリングする必要があります (~ 1 ha)、小規模農家の 〜 15 枝をサンプリングして (~0.5 ha)。解剖、各サンプリング日には、75 の緑の出没する果実を大規模な農場および小さい農場から 45 から収集すべき。今年のいくつかの部分の中には、この果実の数を収集できない場合があります。この場合、大規模農場のための 50 の緑の果実の最小値を収集しよう (~ 1 ha) と小規模農家のための 30 の緑の果実 (~0.5 ha)。 7. 各トラップの CBB の数をカウントします。 プラスチック容器に粗いメッシュ手ふるい (メッシュ サイズ ~1.5 mm) を置き、ふるいにコレクション バイアルからカブトムシを空にします。使用洗浄ボトルは、バイアルからすべての内容を取得する水で満たされました。 ふるいは、可能な限りふるいを通して、多くの小さな昆虫を強制することで内容をスプレー洗浄ボトルを使用します。これは大きい虫や塵などサンプルでは、小さな甲虫から分離することを許可し、CBB の容積の見積もりの誤りを制限します。大きな虫や塵などを破棄、ふるいをすすいでください。 第二のプラスチック容器に細かいメッシュ手ふるい (メッシュ サイズ ~1.0 mm) を配置し、細かいメッシュ手ふるいに最初のコンテナーの内容を注ぐ。 場合は複数百 CBB、7.6 の手順に進んでください。百 CBB のいくつかよりも小さい場合は、余分な水分を除去する紙タオルの上に細かいメッシュのふるいを配置します。ふるいを裏返しし、透明なプラスチックの蓋の上にすべての内容をタップします。固まって、乾燥するまで座ることができます、絵筆でカブトムシを広げます。 百 CBB のいくつかよりも小さい場合は、細い絵筆や似たような実装を使用して、いくつかカブトムシ幅、行にカブトムシをラインアップ、光学顕微鏡下でカウントを開始します。カブトムシの合計数をカウントし、「CBB」と”その他”カテゴリに分割します。 百 CBB の複数が存在する場合は、金属へらを使用して 10 mL のシリンジに細かいメッシュのふるいから CBB を転送します。注射器にエジェクタ列を置き、カブトムシを粉砕しないように注意しながら、わずかな抵抗を感じるまで軽く押します。注射器で体積の値を記録します。 上記で説明したプロトコルを使用して容積のサンプルからカウント 200 カブトムシ。次方程式を使用して、サンプルの他のカブトムシ対 CBB の数を決定します。 推定 CBB カウントを使用します。サンプル (# CBB ÷ 200) = x ∂ の合計の CBB 見積もり x (mL 注射器で測定)。注: ここで ∂ = 昆虫/mL の数。∂ の見積もりが地域毎に行われることをお勧めハワイ島 1033 という値を測定しました。 その他のカウントの使用を推定します。サンプル =「その他」のカブトムシの見積もりの合計 (# その他 ÷ 200) x ∂ x (mL 注射器で測定)。 トラップ数を完了すると、トラップ サービスの関連するレコードに移動し、CBB と他のカブトムシの数を入力します。 8. スコア フェノロジー写真 データ収集アプリケーションからコーヒー フェノロジー写真をエクスポートします。写真を開き、接続されている定規で枝を探します。この分岐に対して次をスコアします。 ノード (枝に葉の点) の数を獲得します。 ピンの頭、オープン花ろうそくの成熟した芽未熟な蕾の有無をスコアします。 エンドウ豆サイズの緑の果実、未熟な緑の果実、成熟した緑の果実、ベリー色の壊れ目を示す、完全に熟した果実とレーズンの数を獲得します。 9. CBB の位置を決定する果実を解剖します。 コールド ストレージから出没する緑の果実を取るし、ベリーの郭清を進める前に 10-15 分のための部屋の温度に温めることができます。この回復時間は、CBB は生存または死んだとして正確に評価されることができますので、重要です。注: 出没する果実の郭清は決定する大人の CBB の位置をことができます。AB は、女性ベリーへの侵入を開始している、変更されていないことを示します。 位置に達する胚乳。位置の CD は、胚乳13に入っている女性を示します。 メスまたは類似の実装を使用して、するベリーからスライス中心のディスクに並列カブトムシ位置の予備評価として。次に、中央の円盤に垂直な浅いスライスのシリーズを作るし、CBB が AB と CD かを決定するための入口の穴の周りに配置。 「生きている」、「 Beauveria 被害で死んだ」、「他の原因」による死者、「ビートル行方不明」AB と CD のカテゴリに分割します。大人が生きているか死んでいるかは明らかでない場合、顕微鏡を使用してズームインし、足の動きを見る。 場所は、水やアルコールで皿に個人をカウントします。これは、数えられた研究室にエスケープから大人のカブトムシを防ぎ何を追跡するために役立ちます。 サイトの解剖を完了すると、関連するサイトのサービス レコードのベリー解離データベースに移動し、各カテゴリの CBB の合計数を入力します。 コンテナー内解剖サンプルを置き、処分前に 72 時間を凍結します。 10. サービス マニュアルの気象観測所 注: 隔週サービス、またはデータをダウンロードし、すべてのセンサーが正しく機能していることを確認するため毎月、気象台マニュアル データのダウンロードを必要とする場合があります。CBB の生物学を理解するために考慮すべき重要な天候変数は、降雨量、湿度、空気と土壌温度、日射、光合成有効放射 (PAR)、土壌水分と風の速度/方向を含めることができます。 フィールドで手動の気象観測所を探します。電子システムに関連するサイトのサービスレコードを開き気象ステーション サービスのデータベースに移動します。サービス関連の気象ステーションの配置レコードにリンクされているレコード新しい気象ステーションを作成します。 データロガー、データ ダウンロードのためのラップトップを直接接続するのにには、防水のシャトルを使用します。気象台の記録データがダウンロードされたことをサービスに、メモしておきます。 データは、負荷を分散されている、一度手動で起動 (降雨 logger を再起動する必要はありません)、適切な設定を確保して太陽と温度/湿度ロガーが再。バッテリー レベルをチェックし、必要に応じて交換します。これが行われている電子システム内で書き留めます。 研究室に戻った後、完全な天候のステッチに最新のデータを追加し、メタデータ レコードを更新します。 11. 記録管理の実践 注: 管理の実践に関する情報は CBB の活動および人口のサイズのパターンを理解する使えます。関連する経営慣行があります (に限定されない): 雑草管理b菌、pyrethins や剪定、他の殺虫剤をスプレーを噴霧, ストリップは、ピッキング、桜ピッキング、地面等からレーズンを削除します。 管理データベースでサイト名、日付および実施管理実践の種類と新しい管理台帳を作成します。