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Behavior

Cosquillas, una técnica para la inducción de afecto positivo al manipular las ratas

Published: May 08, 2018
doi:
10.3791/57190
, , , ,
1Center for the Study of Animal Well-being, Department of Integrative Physiology and Neuroscience,Washington State University, 2Canadian Council on Animal Care, 3Department of Animal Sciences, Center for Animal Welfare Science, College of Agriculture,Purdue University, 4Department of Animal and Aquacultural Sciences, Faculty of Biosciences,Norwegian University of Life Sciences

Summary

Este artículo muestra la aplicación estandarizada de manipulación lúdica, una cosquilleo técnica diseñada para imitar el juego brusco de rata. Esta técnica es eficaz en la reducción de reacciones de miedo a los seres humanos y generando positivos afectan cuando las ratas se manejan para actividades comunes de agricultura y médicos y procedimientos como la inyección de la investigación.

Abstract

Manejo de pequeños animales como las ratas puede provocar varios efectos adversos. Estos incluyen el miedo a los seres humanos, resistencia a la manipulación, lesiones de mayor riesgo para los animales y las manos de sus manejadores, menor bienestar de los animales y menos datos de la investigación válida. Para minimizar los efectos negativos en los resultados experimentales y las relaciones de humanos y animales, animales de investigación a menudo están habituados a manipulados. Sin embargo, los métodos de habituación son altamente variables y a menudo de eficacia limitada. Más potente, es posible para los seres humanos a imitar aspectos de juguetón comportamiento brusco de los animales durante el manejo. Cuando se aplica a las ratas de laboratorio en forma sistemática, esta manipulación lúdica, conocido como cosquillas, constantemente da lugar a respuestas conductuales positivas. Este artículo proporciona una descripción detallada de rata estandarizada cosquilleo técnica. Este método puede contribuir a futuras investigaciones en los Estados afectivos positivos en animales, que sea más fácil manejar las ratas para actividades comunes de cría tales como cambio de jaula o procedimientos médicos y de investigación como la inyección y aplicarse como una fuente de enriquecimiento social. Se concluye que este método puede usarse eficientemente y practicable reducir el temor de las ratas de los seres humanos y mejorar su bienestar, como modelo fiable de Estados afectivos positivos.

Introduction

Manejo de pequeños animales, tales como las ratas domésticas (Rattus norvegicus) mantienen en laboratorios y como mascotas, puede causar aumentos significativos en indicadores conductuales y fisiológicos de estrés1, así como las respuestas aversivas de angustia emocional2. Manipulación de ratas puede desencadenar respuestas basadas en el miedo hacia seres humanos3,4, que pueden dificultar el manejo más aumentan el riesgo de lesión al animal y controlador y limitar la validez de los datos experimentales5.

Para evitar efectos negativos del manejo de resultados experimentales y las relaciones de humanos y animales, es una práctica común para permitir que algunos animales jóvenes recién adquiridos para habituarse a la interacción humana antes de la asignación a los tratamientos experimentales. Durante este período de aclimatación, cuidadores pueden exponer a ratas a una serie de eventos que puede ser altamente variable en forma y duración. Esto puede incluir exposición pasiva a la gente, tocar, elevación, acariciar, sostener, hablando, y ofreciendo comida trata. Aunque las combinaciones de estos procedimientos se han divulgado para reducir el miedo de los seres humanos6, no está claro qué prácticas específicas son más efectivas para el uso de cuidadores de animales ocupados. Hay informes de que las ratas pueden tener respuestas adversas, o por lo menos ninguna respuesta favorable, a algunas de estas técnicas individuales2,7,8,9.

Por el contrario, abundante evidencia apoya la conclusión de que cosquillas, una técnica de manipulación que imita los aspectos del comportamiento brusco juguetón de las ratas, es una forma robusta beneficiosa de contacto social, especialmente para las ratas juveniles10, 11,12,13. Las ratas son mamíferos altamente sociales, que es claro observar el tiempo que pasan jugando juntos como los menores de14 y su fuerte motivación para volver a establecer y mantener contacto social con sus congéneres15,16, 17. Cosquilleo de la rata se basa en el carácter social lúdico de ratas para convertir el manejo en una experiencia positiva. Este concepto fue desarrollado originalmente como un modelo para investigar la base neurobiológica de Estados afectivos positivos evocados por el juego social comportamiento7. Desde entonces, rata cosquillas se ha utilizado en experimentos diferentes 56, 22 de los cuales en comparación con cosquillas a otro manejo técnicas13.

Juego brusco de rata se caracteriza por dos comportamientos claves: “contacto dorsal” y “pin” (figura 1)18,19. Durante el juego brusco, una rata inicia el juego haciendo contacto dorsal con la nuca de la pareja. El receptor responde girando supina y es inmovilizado por la situación del iniciador sobre19. El juego continúa con las ratas turnándose en cada posición, por encima y por debajo de18. Controladores de humanos son capaces de imitar los dos componentes claves del juego brusco por la alternancia entre contacto con la nuca de una rata (contacto de la dorsal) y la superficie ventral (pin) con vigorosos y rápidos movimientos de los dedos similares a los utilizados cuando se hace cosquillas a un niño. Por supuesto, cosquillas no es una copia exacta del juego brusco de rata porque las ratas no pueden prender la mano humana durante el cosquilleo. De hecho, el nivel de compromiso de los individuos en el juego brusco y cosquillas puede variar de20,21. A pesar de esto, parece que cosquillas invoca los mismos mecanismos de recompensa como juego brusco entre sus congéneres. Cosquilleo es solicitado activamente por los animales y puede servir como una recompensa por operante, aprendizaje, aportando evidencia de que ser cosquillas substancialmente es gratificante para ratas jóvenes7,11,12, 13 , 22. A pesar de que las ratas también se han divulgado para aprender una tarea operante a cambio de caricias suaves como la recompensa, más rápido fueron a la mano de una persona con cosquillas compararon con caricias7.

Los pernos utilizados en cosquillas pueden parecer similares a los procedimientos de seguridad común, pero hay evidencia de que las ratas perciben este tipo de manejo diferente. Cuando las ratas son sujetadas repetidamente, como para un procedimiento de inyección, secretan excesiva porfirinas en chromodacryorrhea (“lágrimas rojas”)8. Chromodacryorrhea ocurre en respuesta a estresores agudos y hace que la piel y la piel alrededor de los ojos y la nariz se convierten en manchas de un color rojizo23. Cuando repetidamente presionada y sujetados en la parte trasera como en un alfiler, las ratas mostraron menos atractivo a los seres humanos que cuando cosquillas12. Estos resultados implican que la restricción breve repetida y lanzamientos durante el cosquilleo se perciben diferentemente que la moderación no juguetón. Así, la técnica precisa cosquillas tiene implicaciones importantes para la generación de un estado afectivo positivo en lugar de contribuir a manejar el estrés.

Control el efecto de cosquilleo en el estado afectivo de rata se puede lograr fácilmente por asistir a vocalizaciones de las ratas. Las ratas suelen producen dos categorías de ultrasonidos vocalizaciones (USVs), en alrededor de 22 kHz y 50 kHz, además de vocalizaciones audibles. El USVs 22 kHz ocurren típicamente cuando anticipación eventos aversivos y son acompañados por cerebro elevada actividad colinérgica24. Por lo tanto, se consideran USVs de 22 kHz para indicar un estado afectivo negativo de la ansiedad. El USVs de 50 kHz, especialmente del tipo de frecuencia modulada “trill” (figura 2), se asocia generalmente a situaciones y estímulos y se acompañan de aumento cerebral dopaminérgica actividad24,25. Por consiguiente, se considera expresión de abundantes USVs de 50 kHz para reflejar un estado afectivo positivo24,26,27,28. Finalmente, vocalizaciones audibles son generalmente asociados con y por lo tanto utilizados como marcadores de, dolor físico y el malestar. Por lo tanto, la producción diferencial de estas tres formas de vocalizaciones ofrece un confiable registro de los cambios en el estado afectivo de ratas26. Las ratas producen USVs en alrededor de 22 kHz durante exposición a depredadores, exposición a estímulos dolorosos tales como golpes de pie y lucha entre masculino28. Acariciando también se ha divulgado para obtener múltiples USVs de 22 kHz en ratas ingenuas, deducidas como un indicador de efecto negativo2. En cambio, cuando cosquillas por los seres humanos, como cuando juego brusco con otras ratas, las ratas producen numerosos USVs de 50 kHz. Se deduce que la tasa de 50-kHz USVs proporciona una medida gradual de la respuesta afectiva positiva generada por cosquillas29,30.

Las descripciones existentes de “cómo hacerle cosquillas a una rata” son más bien breves y pueden conducir a resultados variables. Además, principiante “ticklers de rata” puede ser demasiado tentativo en sus intentos de imitar el juego brusco. Las palabras “cosquillean vigorosamente” son más fáciles de entender cuando demostrar visualmente. Por lo tanto, el objetivo de este artículo es proporcionar una descripción detallada y una demostración de cómo imitar las interacciones lúdicas positivas ratas de forma eficaz y coherente que confiablemente provoca respuestas positivas de la mayoría de las ratas cuando se maneja. Este protocolo describe una técnica estandarizada de cosquillas y explica cómo el cosquilleo se puede combinar con procedimientos como retención e inyección para mitigar potencialmente desagradables experiencias afectivas.

Protocol

Todos los experimentos se llevaron a cabo según los institutos nacionales de salud guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio31,32 en instalaciones acreditadas por AAALAC International y fueron aprobados por el estado de Washington Comité de uso y cuidado Animal institucional de la Universidad. El siguiente protocolo puede exponer a personal a alergenos de animales de laboratorio. Se debe usar equipo de protección personal recomendado por los proveedores de programa y cuidado de la salud de seguridad y salud ocupacional institucional. El protocolo describe procedimientos típicos de laboratorio las condiciones de vivienda, pero podría ser adaptado para su uso en instalaciones de bioseguridad más altos (por ejemplo, usar un gabinete de bioseguridad, etcetera.). 1. preparación de equipos y configuración Manejo de caja Preparar otro recinto de jaula casera de un animal o de cosquillas, en adelante llamado la caja de manejo. Asegúrese de que la caja de manejo es lo suficientemente grande para proporcionar espacio para la mano de la cosquillita y para las ratas moverse mientras les impide saltar hacia fuera. Asegúrese de que la caja de control está libre de obstáculos. Por lo tanto, si realizar cosquillas en la jaula de casa, saque todos los objetos tales como chozas, palillos y papel arrugado de la roedura. Línea de la caja de manejo de suelo con ropa de cama33. Otros tipos de cubierta del piso suave se pueden utilizar pero no son tan efectivas en la obtención de 50 kHz vocalizaciones13. Coloque la caja de manejo sobre una mesa o mostrador a una altura que permite que la mano del controlador alcanzar cómodamente el área completa del piso de la caja de manejo. Minimizar el efecto de la novedad por habituar a las ratas a la caja de manejo antes de cosquillas, si es necesario. Temporizador: Para indicar el inicio y final de 15 peleas de s, coloque un dispositivo de cronometraje cerca de la caja de dirección donde puede ser leído fácilmente. Por otra parte, una señal auditiva pueden ser transmitida a la cosquillita a través de auriculares. Grabación de vocalizaciones Si están grabando vocalizaciones para cuantificar tipos de vocalizaciones diferentes para fines de investigación, utilizar un micrófono capaz de captar sonido banda ancha 10-120-kHz, conectado a un dispositivo capaz de grabar sonidos de alta frecuencia. Suspender o fije el micrófono en la parte superior o lateral de la caja, lo suficientemente baja como para detectar las llamadas claramente y evitar la confusión con las llamadas de ratas en jaulas cercanas, pero fuera del alcance físico de las ratas. Si vocalizaciones sólo deben ser monitoreados para confirmar la adecuada técnica de cosquillas, entonces use un detector de murciélagos y configurar en el lado de la caja. Si usando un detector heterodino, simple, configure el dispositivo a 50 kHz. Guantes de laboratorio: utilizar una mano desnuda o enguantada fino al cosquilleo. La técnica de cosquillas se desarrolló con una mano pelada.  Sin embargo, una mano enguantada fino también es eficaz en inducir comportamiento juguetón y 50 kHz USV producción permitiendo el controlador detectar la cantidad de presión aplicada al cuerpo de la rata y sentir las respuestas de la rata por el guante. 2. procedimiento de cosquillas Colóquese los guantes de laboratorio, si es necesario. Traer la casa jaula una mesa o Banco de trabajo. Transferir suavemente la rata en la caja de manejo si cosquillas no se realizaron en la casa jaula. Iniciar el temporizador y el audio de grabación si es necesario. Para uso constante, se alternan entre los 15 s del contacto de las manos y 15 lanzamiento de s de contacto para un total de 2 minutos. Esta duración de la interacción se ha encontrado suficiente para aumentar la atracción de ratas a los seres humanos11. Para comenzar la sesión de cosquillas con un lanzamiento de s 15, coloque la mano inmóvil dentro de un lado de la caja de manejo. La presencia de la mano permite ratas solicitar interacción dirigiendo lame y luz pellizcos (nibbles) hacia la mano, indicando el interés de la rata para interactuar22. Cuando esto ocurra, mueva la mano de la rata, que puede solicitar persiguiendo juguetón de la mano de la rata. Por otra parte, dejar la mano fuera de la caja durante el lanzamiento de s 15. Seguir el lanzamiento con 15 s de cosquillas, iniciar la interacción con un contacto de la dorsal (s 2-4). Vigorosamente con una sola mano, toque nuca la rata (superficie dorsal del cuello) con los dedos mediante movimientos de dedo rápido como comúnmente realizados en humanos cosquillas. Evite el contacto con la grupa como es concentrada en esta zona del cuerpo durante encuentros agresivos34. Seguir el contacto dorsal con un alfiler. Coloque el pulgar y el dedo en las patas delanteras de la rata; Levante la rata, lo suficientemente alta como para permitir rápidamente girando la rata en su parte posterior asegurando la cola no conseguir doblada.Nota: Puede ayudar a presionar ligeramente en la parte posterior de la rata con el dedo meñique al dar vuelta a la rata en su parte posterior. Mantenga la rata libremente, pero con firmeza; ser asertivo pero no contundente. Una vez que la rata está de espaldas en el piso, mantenga el cuerpo libremente mientras moviendo los dedos rápidamente y vigorosamente pero suavemente en el vientre, como se utiliza comúnmente en la humano cosquillas. A pesar de que el estímulo es rápida y asertiva, mantener la fijación enérgica (2-4 s/perno) para reducir al mínimo las respuestas negativas. Permitir que la rata a sí mismo a la derecha y seguir rápidamente con un contacto de la dorsal. Seguir para alternar entre clavijas y contactos del dorsales. En promedio, debe ser 4 a 5 pines/15 s35. No recoja la rata con ambas manos. Durante 15 s de cosquillas, mantenga siempre los dedos en movimiento y en contacto con el cuerpo de la rata, incluso en las transiciones entre clavijas y contactos del dorsales. Realizar tres cosquillas adicionales del 15-s y 15 s comunicados por un total de 2 minutos. Si utiliza una caja de manejo, devuelva la rata a su jaula casera. Si utiliza la jaula casera, coloque objetos de enriquecimiento en la jaula. Limpie la caja de manipulación con toallas de papel para eliminar las heces y la orina no absorbido por la ropa de cama. Repita con la siguiente jaula de ratas, según sea necesario. 3. cosquillas simultáneamente múltiples ratas Las ratas pueden ser cosquillas como un grupo36. Si la duración del tratamiento no es relevante, alternas cosquilleo cada rata por 15 s. La duración de la sesión de cosquillas puede ampliarse más allá de 2 minutos según sea necesario para que cada rata recibe cuatro peleas de cosquillas contacto de mano intercalada por lanzamiento. Si la duración del tratamiento es relevante para los resultados de investigación, utilice los siguientes procedimientos: Para parejas, cosquillas una rata de 15 s seguido inmediatamente por cosquillas la segunda rata para el proximo 15 s (es decir., durante el lanzamiento de la primera rata), y así sucesivamente. La cosquillita no tiene un período de descanso. Para trillizos, utilice el procedimiento descrito en 3.2.1 para dos de las ratas cosquillas y cosquillas en la tercera parte a la vez como uno de los otros con la otra mano. Para grupos de 4 o más ratas, cosquillear a cada rat o par de ratas por 15 s. La duración de la sesión de cosquillas puede ampliarse más allá de 2 minutos según sea necesario.

Representative Results

Factores que afectan o podrían afectar, respuestas a cosquillas se resumen en la tabla 1. Los resultados positivos de rata cosquillas se han indicado por múltiples medidas de bienestar de rata y efecto positivo. Resultados comunes incluyen aumento de la producción de 50-kHz USVs, conducta de mayor acercamiento y mayor facilidad de manejo. Reportado efectos de rata cosquilleo a nivel genético y celular incluyen expresión génica alterada en el hipotálamo de37y aumenta la neurogénesis en el giro dentado del hipocampo38,39. Resultados de reducción de ansiedad generalizada y el miedo de los seres humanos también divulgan tales como reducida latencia al enfoque en 9 diferentes experimentos13, menos congelación después miedo acondicionado40,41y aumentó las entradas en el centro de un escenario de campo abierto por ratas alojados individualmente36. Para más información vea LaFollette et al., que presentan una revisión sistemática de la literatura cosquillas que identifica 22 informes de investigación de los resultados de rata cosquillas en comparación con otras técnicas13. Se describen ejemplos siguientes, específicos de los resultados que pueden obtenerse cuando la técnica cosquillas se empareja con moderación y procedimientos de inyección intra peritoneales (IP). Ratas Sprague-Dawley (85-94 días de edad, machos; n = 48) cosquillas por 2 minutos inmediatamente antes y después de la inyección de solución salina IP diariamente durante 10 días, especialmente cuando se combina con el cosquilleo juvenil experiencia (2 min/día de 25-45 días de edad), producido a USV de 50 kHz más antes (GLM ANOVA, F3, 44 = 9.59, p < 0.0001; Figura 3A) y sólo después (F3, 44 = 8.74, p = 0,0001; Figura 3B) inyección (Tukey-Kramer, p < 0.05) en comparación con las ratas expuestas a una mano pasiva10. Durante la breve entrega real de la inyección, producción de 50 kHz USVs fue frenado (promedio ± SE, 15 ± 1.4 USVs/min) y tratamiento tratamiento no tuvo efecto sobre la tasa de10. Se concluyó que cosquillas, cuando se aplica antes y después de un procedimiento de inyección, inducida por un estado afectivo positivo que moderó la aversión del procedimiento, especialmente para aquellos que habían sido expuestos a cosquillas como juveniles. Para averiguar si cosquillas sería eficaz si redujo a antes o después de una inyección en lugar de ambos y si es así, cual sería mejor, se compararon las respuestas de la rata a cosquillas antes, después y antes y después de la inyección. Tasas de 50-kHz USVs y llamadas audibles se midieron como indicadores de positivos y negativos afectan, respectivamente12. Ratas Sprague-Dawley (varones, 32-41 días de edad; n = 96) fueron ya sea refrenado y dado un diario inyección de solución salina IP (INJ) o restringida sin recibir una inyección (control, CON) y expuesto a uno de los siguientes tratamientos: no cosquillas, las ratas no eran tocado antes y después del procedimiento de retención (TN); cosquillas por 2 min antes (TB), después (TA), o antes y después (TBA) alojamiento12. En lo 2 min antes de moderación, las ratas de los tratamientos que recibieron cosquillas antes de la restricción (TB, TBA) produjeron el USVs de más de 50 kHz (GLMM ANOVA, F3,88 = 49.19, p < 0.0001; Figura 3). Las ratas TA y TN no difirió de la tasa de USVs producido antes del procedimiento de retención. Durante el procedimiento, cualquier rata que recibió cosquillas (TA, TB, TBA) producido USV de 50 kHz más que los que fueron no cosquillas (TN; F3,88 = 50.67, p < 0.0001; Figura 3D). Entre ratas cosquillas, quienes reciben cosquillas antes del procedimiento (TB, TBA) producen USVs de 50 kHz más durante la moderación en comparación con las cosquillas luego (TA; p < 0.05). En el período de 2 min después del procedimiento, las ratas en todos los grupos de cosquillas (TA, TB, TBA) producen USVs de 50 kHz más que los que fueron no cosquillas (TN; F3,88 = 53.64, p < 0.0001; Figura 3E). Además, durante el procedimiento, las ratas cosquillas antes de alojamiento (TB, TBA) produjo menos audibles llamadas en comparación con ratas que no recibidas cosquillas (TN), mientras que las ratas luego cosquillas (TA) no difirieron de los de los otros grupos (F3,88 = 3.67, p= 0,02; Figura 3F). Los resultados demuestran que cosquillas las ratas antes de restricción para una inyección IP producción signos de mayor efecto positivo en los períodos antes, durante y después del procedimiento que cosquillas sólo después de sujeción12. Cuidan uno de los siguientes tratamientos de manejo aplicado a las ratas (Sprague-Dawley machos; n = 32) de 57 a 74 días de edad: (1) manipulación mínima una vez que cambian de una semana en la jaula; (2) exposición a una mano pasiva por 2 min diariamente; (3) 2 min de cosquilleo cada día, para imitar social jugar; (4) 2 min todos los días de restricción en parte posterior de la rata, simulando clavos correspondida por un dominante11. En el minuto siguiente un IP inyección, las ratas de los tratamientos pasivos y Tickled pasó más tiempo de crianza en la mitad delantera de la jaula, cerca de donde estaba el investigador, en comparación con las ratas de la mínima y los tratamientos de restricción (GLM ANOVA, F3, 27 = 5.70, p = 0.004; Figura 3). Además, las ratas Tickled pronunció USVs de 50 kHz más que ratas en el tratamiento pasivo cuando se expone a una familiar o desconocida mano durante 3 minutos en una prueba de enfoque humano (registro-transformada media ± SE llama/min, mínima: 0,7 ± 0.26, pasiva: 0.6 ± 0.18, cosquillas: 1,8 ± 0,30 Moderación: 1,4 ± 0,28; F3,28 = 4.04, p = 0,02). Así, la simple presencia de una mano pasiva asistida por habituación de ratas a los seres humanos en relación con la manipulación mínima, pero cosquillas era el método más eficaz para producir una respuesta positiva a los seres humanos11. Figura 1: vaivenes de rata juega comportamiento. Contacto Dorsal (A); (B) perno18. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. Figura 2: vocalizaciones ultrasónicas 50-kHz de la frecuencia modulan tipo “trill”. Vocalizaciones de trill cinco se produjeron en 1 s por una rata durante el cosquilleo. Las líneas horizontales en el 17, 25 y 70 kHz fueron producidas por los equipos electrónicos en la habitación (e.g., computadora, micrófono, cámara). Figura 3: respuestas de ratas expuestas a cosquillas antes de, o en combinación con procedimientos experimentales como inyecciones intra peritoneales de (IP). Velocidad (media ± SE llama/min) de 50 kHz USVs producido (A) antes y (B) después de un procedimiento de inyección de ratas macho adultas expuestas a un mínimo manejo (M) o cosquilleo (T) como menores de edad y una mano pasiva (P) o cosquilleo (T) inmediatamente antes y después inyección (rendimiento cuatro combinación de tratamiento: M-P, T-P, C-M-T, T-T); de Cloutier et al. 10. tasa de 50-kHz USVs (media ± SE llama/min) producen (C) antes, (D) durante y (E) después de la restricción (con o sin una inyección IP) una vez diariamente por 10 días consecutivos por juveniles ratas macho que no recibieron cosquillas (TN) o cosquillas antes (TB), después (TA), o ambos antes y después (TBA) el procedimiento; y (F) la tasa de llamadas audibles producida durante la moderación; de Cloutier et al. 12. (G) duración (media ± SE s) de crianza cerca el investigador durante 1 min después de una inyección de IP por ratas macho expuestas a mínimo, pasiva, cosquillas o restricción por cuidadores; de Cloutier et al. 11. barras con letras diferentes (a, b, c) indican diferencias en las comparaciones pares (Tukey-Kramer, p < 0.05). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. Factor de Efecto Referencias Intrínseca Edad Ninguna diferencia en 50 kHz ultrasonidos vocalizaciones (USVs) entre ratas 24-44 y 89-92 días 18, 29, 42 Disminuir en 50-kHz USVs para las ratas de 71 días de edad a 148 días 29 17 varones días hizo muchos USVs de 50 kHz más 7-9 meses machos viejos 43 Cosquillas como juveniles y adultos de ratas mostraron los resultados más positivos en comparación con las ratas sólo cosquillas como juveniles o adultos. 10 Sexo Ratas macho producción más USVs de 50 kHz a 44 y 71 días de edad, pero las hembras producen más USVs de 50 kHz a 148 días de edad 29 Ratas macho producen USVs de 50 kHz más que las hembras a los 44 y 58 días. 43 Sin diferencias de sexo en 50 kHz USVs 96 juveniles ratas Long-Evans gratis o ratas de Wistar juveniles 52 42, 44 Ratas de Wistar hembra juveniles producen más USVs de 22 kHz que los machos 44 Diferencias interindividuales Ratas que pronunció USVs de 50 kHz más demostradas tiempo enfoque disminuido a autoadministrables cosquilleo creciente sesgo positivo juicio después de cosquillas y creciente proliferación celular hipocampal después de cosquillas 27, 37, 45 Las ratas más juguetón producen USVs de 50 kHz más 43 Cepa No divulgados, pero anecdóticos indican las ratas de diferentes cepas y criadores difieren en su respuesta a cosquillas. Las líneas de ratas divergieron cuando según alta vs baja tasa de USVs de 50 KHz en respuesta a cosquillas. 22, 26, 42, 46 Experiencia previa de cosquillas Aumento de la producción de 50 kHz ultrasónicas USVs 12 Extrínseco Ropa de cama Las ratas producen USVs de 50 kHz más cuando no cosquillas en el lecho familiar vs ropa de cama 33 Estrés Cosquilleo ratas 1 hora, pero no de 23 horas, después de esfuerzo de moderación redujo 50-kHz USVs producción 47, 48 Tiempo Cosquillas a las ratas antes de la inyección fue más eficaz en el aumento de 50 KHz USVs de cosquilleo después de la inyección 12 Sexo del controlador de No hay efecto Panksepp, J. 2014, datos no publicados Familiaridad de rata con controlador Las ratas producen USVs de 50 kHz más y pasaron más tiempo cerca de un familiar en comparación con un desconocido tickler 11 Controlador de cosquillas experiencia / vigor de cosquillas por controlador Producción afectada de 50 kHz USVs pero no preferencia y enfoque el comportamiento 2011 Cloutier, S., datos no publicados Duración de pines controlador / frecuencia de alternancia entre dorsales contactos y clavijas Menor frecuencia de mordiscos (interpretadas como solicitud del juego) fue dirigida a una mano imponiendo 15-s pins (restricción) de una mano dando cosquillas con múltiples contactos dorsales y pernos por 15 s 11 Olores (por ejemplo, perfume, champú, crema de afeitar) utilizado por el controlador No reportado Tamaño de grupo social Vivienda individual mayor respuestas positivas a cosquillas comparado con el alojamiento en grupo en la mayoría de los experimentos. Cosquilleo ratas alojados en grupo con sus compañeros de jaula en jaula casa redujo esta diferencia 7, 22, 27, 36 Intensidad de la luz Cosquilleo en 1000 lux reducido 50-kHz USVs comparados con 25 lux. 43 Ruido No reportado Jaula de limpieza antes de cosquillas Producción inducida de 22 kHz USVs en algunas ratas 12 Hora del día Ningún efecto sobre la producción de USVs 50-kHz cuando se realiza al principio o al final del período de luz. Cosquillas de las ratas al final y principio de las luz vs períodos medio del periodo claro u oscuro no se ha comparado 2011 Cloutier, S., datos no publicados Tabla 1: Lista de los factores que afectan o podrían afectar, la respuesta de las ratas a cosquillas, una técnica de manejo lúdico pensada para imitar el juego brusco de rata.

Discussion

Este protocolo describe una técnica para rata cosquillas, una técnica de manipulación lúdica imitando el comportamiento de juego brusco de rata que es eficaz en generar vocalizaciones indicativos de afecto positivo y el aumento de comportamiento de enfoque cuando las ratas se manejan para común cría o médicas y procedimientos tales como la inyección del IP de investigación.

Juego social, una forma generalmente positiva de contacto social, se ha propuesto ayudar en la calibración de las reacciones emocionales a aterradoras situaciones42,43, y generar resistencia a la ansiedad y la depresión44. Por mímica rata social del juego, cosquillas parece tener igualmente efectos beneficiosos7. Así, para que la aplicación de cosquillas tener éxito en inducir estados afectivos positivos, es importante tener en cuenta que la mano está destinada a actuar como “el compañero de juego” durante el cosquilleo. La mano es atractiva porque simula los comportamientos que las ratas esperaran y disfrutan de otra rata durante juego brusco. Por lo tanto, levantando y sosteniendo la rata con las dos manos es imitando el juego de la rata y no tenga el mismo efecto. De hecho, las ratas de laboratorio aprenderán a evitar restricciones no lúdico en el que un controlador sostiene con una mano y acaricia con la otra mano45. Durante rata cosquillas, también es importante mover la mano con confianza y firmeza, siendo animado y juguetón. Manteniendo la fijación enérgica (2-4 s/perno) debe minimizar respuestas negativas porque en juego brusco entre ratas, repetido fijación conduce a la puesta en circulación de 22 kHz USVs18.

A pesar de las ratas juveniles son más juguetones y muestran las respuestas más fuertes a cosquillas a ratas adultas18, cosquilleo en la edad adulta también tiene beneficios10. Cosquilleo ratas cuando joven también se ha encontrado para tener beneficios más adelante en vida36, lo que sugiere que las ratas experimentan un prolongado efecto positivo sobre su reacción emocional a la presencia humana. Diferencias del sexo en respuesta a cosquillas son inconsistentes, con informes de ningunas diferencias de sexo en ratas juveniles46,47, juveniles machos producen vocalizaciones de 50 kHz más y menos vocalizaciones de 22 kHz que hembras juveniles29 ,48,39y las hembras mayores producen más 50 kHz vocalizaciones de los machos de la misma edad29, similar a los resultados del juego social49.

Puede evaluarse la efectividad de la técnica de cosquillas con vocalización y patrones de movimiento de la rata. Ratas a mordisquear y lamer los dedos del controlador durante los períodos de 15 s del lanzamiento después de cosquillas11. Nibbles son mordeduras ligeras, no perjudicial que se han descrito como comportamiento de solicitud de reproducción en ratas jóvenes22. Cuando el controlador mueve la mano alrededor de la caja de manejo, la rata siga y perseguirla. Ratas, especialmente más jóvenes, también ejecutar, corretean alrededor de la caja entre peleas de cosquillas y muestran un aumento distinto en actividad después de una pelea de cosquillas, similar a la actividad corriente que caracteriza el juego brusco. Si la rata permanece inmóvil durante lanzamientos, ajuste de la técnica de cosquillas, como la reducción de duración de pin o dando menos pins, es probablemente necesaria. Es mejor dar a pernos de corta duración para la primera sesión de cosquillas. Pueden aumentar la duración y número de pernos como las ratas que se acostumbre a hacer cosquillas. Las ratas pronunciar USVs de 50 kHz, como trinos, en cosquillas y entre peleas de cosquillas. Un aumento gradual en el número de trinos producidos durante los lanzamientos del 15-s puede verse en las dos primeras semanas de diario cosquillas antes de estabilizarse47. Diferencias individuales permiten ratas cosquillas se divide en alta y baja llamadas que responden diferencialmente al estrés, la ansiedad y la anhedonia46,47,50.

Rata cosquillas se ha utilizado con éxito para inducir efectos positivos como producción basada en cuotas de 50 kHz USVs durante el cosquilleo13. Recientemente se ha implementado como una técnica para reducir el miedo de seres humanos en las ratas y mitigar su aversión de médica y procedimientos de investigación como la inyección. Evidencia sugiere que, cuando se disponga de sólo 2 minutos diarios por animal, cosquillas es un método efectivo y práctico para reducir la evitación de los seres humanos11. Teniendo en cuenta que ratas juveniles se juegan unos 60 minutos diario51,52,53, cosquilleo por 2 min todos los días es práctica pero probablemente demasiado breves para replicar los efectos totales de juego social entre las ratas. Los dueños de la rata del animal doméstico, que generalmente tienen más tiempo para el manejo de sus ratas que cuidadores de laboratorio, pueden proporcionar las ratas con más cosquillas como las ratas siguen respondiendo positivamente. Basado en Burgdorf et al. 44 , 45, los primeros 15 minutos de juego brusco parece ser el más positivo para las ratas. A su vez, puede ser más eficaz para que les acaricien las ratas por periodos de hasta 15 minutos, sobre todo si por un motivo justificado no se puede mantener en un grupo social. Sin embargo, basada en la obra como «formación para lo inesperado»38, una técnica más variada que el método descrito aquí puede ser necesario para mantener la alegría de más sesiones de cosquillas. Sesiones de cosquillas adicionales cada día pueden ser beneficiosas como otras actividades biológicamente importantes como el sueño y la alimentación no se deterioran. Así como contribuir a mejorar el bienestar de las ratas del animal doméstico y laboratorio, la técnica descrita de cosquillas estandarizada puede ser utilizada en continua investigación orientada a comprender los efectos de juego social y sus componentes de comportamiento, social y el cerebro desarrollo.

Cuando el cosquilleo fue realizado alrededor de la inyección, especialmente cuando se combina con experiencia previa en cosquillas (finales 40-50 días), mayores 50-kHz USV tasas antes y después de la inyección y redujo las tasas de llamada audible durante la inyección10 . Así cosquillas parece haber mitigado los efectos adversos de las inyecciones de IP, especialmente en ratas acostumbradas a cosquillas juveniles10. Aunque cosquillas no impidió que molestia asociada con la inyección como la producción en base a cuotas de llamadas audibles, aumentó 50-kHz USVs en comparación con el control, antes, durante y después del procedimiento de sujeción12. Según datos USV de 50 kHz, el momento más eficaz para la aplicación de cosquillas fue justo antes de y no después del procedimiento de sujeción12. Las ratas cosquillas antes de la inyección tenía un remanente efecto ese positivo elevado afectan durante el procedimiento12. Cosquillas, por lo tanto pueden minimizar potenciales efectos negativos de los procedimientos médicos rutinarios en rata bienestar y comportamiento. Más investigación es necesaria determinar cómo la técnica podría combinarse efectivamente con otras técnicas de inyección y otros procedimientos médicos/experimental.

En general, hemos demostrado que rata cosquillas resultados en resultados positivos tales como aumentaron de la producción de USV de 50 kHz y el comportamiento de enfoque, así como disminución de la evitación de los seres humanos y resistencia al manejo. Recomendamos rata cosquillas como método viable para mejorar el bienestar de la rata y el modelado de Estados afectivos positivos.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Sylvie Cloutier, Megan LaFollette, Brianna Gaskill y Ruth Newberry desean dedicar este artículo a la memoria de Jaak Panksepp, nuestro querido autor, quien falleció durante las etapas finales de terminar este manuscrito. Recordamos Jaak con cariño como “el padre de rata cosquillas” – sus ideas sobre las emociones animales forman la inspiración fundamental de este trabajo. Este material está parcialmente basado en trabajo apoyado por Washington estado Universidad veterinaria verano becario, un premio de mejora de Bienestar Animal del Instituto de Bienestar Animal y una “subvención para laboratorio Ciencia Animal” del americano Asociación para la ciencia de animales de laboratorio. Publicación de este artículo fue patrocinado por Petco Animal Supplies, Inc. Nos gustaría agradecer Carol Dowell y de la Universidad de Purdue laboratorio Animal programa por permitirnos cosquillear a sus ratas para la sesión.

Materials

Table or workbench No specific brand is recommended.
Handling box (rat home cage or another enclosure) No specific brand is recommended.
Bedding or or other type of soft cover No specific brand is recommended.
Gloves (thin laboratory gloves) Optional.
Timing device Deltaworks Interval Timer:Timing for HIIT Training, Workouts
https://itunes.apple.com/us/app/interval-timer-timing-for-hiit-training-workouts/id406473568?mt=8		 Optional. Any timer will do, although it is convenient to use an interval timer if you are tickling multiple rats.
Ultrasonic microphone such as a bat detector or USB microphone Magenta Electronics LTD Bat4 Bat Detector
https://www.magenta2000.co.uk/acatalog/Bat_Detector_Bat4.html		 Optional. The Magenta bat detector is relatively inexpensive and easy to use, but can only detect vocalizations at one range at a time.
Dodotronic Ultramic 200K
http://www.dodotronic.com/ultramics/?v=7516fd43adaa		 Optional. This microphone has worked well in our experiments. There are many other options for ultrasonic microphones.
Bioacoustic software CIBRA SeaWave
http://www-3.unipv.it/cibra/seawave.html		 Optional. Free software with limited recording capabilities.
CIBRA SeaPro
http://www-3.unipv.it/cibra/seapro.html		 Optional. This software has extensive recording capabilities, and has worked well in our studies. There are many other software packages that work with bioacoustic microphones.
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Cloutier, S., LaFollette, M. R., Gaskill, B. N., Panksepp, J., Newberry, R. C. Tickling, a Technique for Inducing Positive Affect When Handling Rats. J. Vis. Exp. (135), e57190, doi:10.3791/57190 (2018).
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