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Behavior

Cócegas, uma técnica para induzir o efeito positivo ao manusear ratos

Published: May 08, 2018
doi:
10.3791/57190
, , , ,
1Center for the Study of Animal Well-being, Department of Integrative Physiology and Neuroscience,Washington State University, 2Canadian Council on Animal Care, 3Department of Animal Sciences, Center for Animal Welfare Science, College of Agriculture,Purdue University, 4Department of Animal and Aquacultural Sciences, Faculty of Biosciences,Norwegian University of Life Sciences

Summary

Este artigo demonstra a aplicação padronizada de manipulação lúdica, uma técnica de cócegas projetada para imitar o jogo tumultuadas de rato. Esta técnica é eficaz em reduzir o temíveis reações aos seres humanos e gerando positivos afetam quando os ratos são manipulados para atividades comuns de criação e médica e procedimentos tais como a injeção de investigação.

Abstract

Manipulação de pequenos animais como ratos pode levar a vários efeitos adversos. Estes incluem o medo dos seres humanos, resistência ao tratamento, risco de prejuízo maior tanto para os animais e as mãos de seus manipuladores, diminuição da protecção dos animal e menos dados de pesquisa válido. Para minimizar os efeitos negativos nos resultados experimentais e as relações humano-animal, animais de pesquisa são muitas vezes habituados à presença sendo manipulado. No entanto, os métodos de habituação são altamente variáveis e muitas vezes de eficácia limitada. Mais potente, é possível para os seres humanos imitar os aspectos do comportamento de tumultuadas brincalhão dos animais durante a manipulação. Quando aplicado a ratos de laboratório, de forma sistemática, este maneabilidade, referida como cócegas, consistentemente suscita respostas comportamentais positivas. Este artigo fornece uma descrição detalhada de um rato padronizada, técnica de cócegas. Este método pode contribuir para futuras investigações sobre Estados afetivos positivos em animais, tornar mais fácil para lidar com ratos para atividades comuns de criação tais como mudança de gaiola ou procedimentos médicos de investigação tais como a injeção e a ser implementado como uma fonte de enriquecimento social. Conclui-se que este método pode ser usado para eficientemente e praticamente reduzir o temor dos ratos dos seres humanos e melhorar o seu bem-estar, bem como confiável modelo Estados afetivos positivos.

Introduction

Manipulação de animais de pequenos porte, tais como ratos domésticos (Rattus norvegicus) mantidos em laboratórios e como animais de estimação, pode causar aumentos significativos nos indicadores comportamentais e fisiológicos de estresse1, bem como respostas aversive sugestivas de angústia emocional2. Manipulação de ratos pode desencadear respostas baseada no medo para os seres humanos3,4, que podem tornar mais difícil a manipulação adicional, aumentam o risco de ferimento ao animal e manipulador e limitar a validade dos dados experimentais5.

Para evitar os efeitos negativos da manipulação de resultados experimentais e da relação humano-animal, é prática comum para permitir algum tempo para animais jovens recém-adquiridas para se habituar a interação humana antes atribuindo-os a tratamentos experimentais. Durante este período de aclimatação, cuidadores podem expor ratos a uma série de eventos que pode ser altamente variável na forma e duração. Estes podem incluir a exposição passiva a pessoas, tocando, levantamento, acariciando, segurando, falando, e oferecer comida trata. Embora as combinações de tais procedimentos têm sido relatadas para reduzir o medo de seres humanos6, não está claro quais práticas específicas são mais eficazes para uso pelos cuidadores de animais ocupados. Há relatos de que os ratos podem ter respostas adversas, ou pelo menos não há resposta favorável, a algumas destas técnicas individuais2,7,8,9.

Em contraste, abundante evidência suporta a conclusão que fazer cócegas, uma técnica de manipulação que imita os aspectos do comportamento lúdico tumultuado de ratos, é uma forma verdadeiramente benéfica de contato social, especialmente para ratos jovens10, 11,12,13. Ratos são mamíferos altamente sociais, que decorre a observar o tempo eles passam jogando juntos como juvenis14 e sua forte motivação para re-estabelecer e manter o contato social com coespecíficos15,16, 17. Rato fazendo cócegas baseia-se a natureza lúdica e social de ratos para converter a manipulação em uma experiência positiva. Este conceito foi originalmente desenvolvido como um modelo para investigar a base Neurobiológica de Estados afetivos positivos evocada pelo comportamento de jogo social7. Desde então, o rato fazendo cócegas tem sido usado em mais de 56 experimentos diferentes, 22 dos quais comparado cócegas para outro tratamento técnicas13.

Tumultuadas jogar o rato é caracterizada por dois comportamentos chaves: “contato dorsal” e “pin” (Figura 1)18,19. Durante a reprodução de fatos, um rato inicia o jogo, fazendo contato dorsal com a nuca do parceiro. O destinatário responde por rolamento supino e está preso por de pé o iniciador acima de19. O jogo continua com os ratos, revezando-se em cada posição, em cima e abaixo de18. Manipuladores de humanos são capazes de imitar os dois componentes chaves do jogo tumultuado, alternando entre o contato com a nuca de um rato (contato dorsal) e a superfície ventral (pin) usando movimentos vigorosos, rápidos dos dedos similares àqueles usados quando uma criança a fazer cócegas. Claro, fazendo cócegas não é uma cópia exata do jogo tumultuadas rato porque ratos não podem acusar a mão humana durante a fazer cócegas. Com efeito, o nível de envolvimento dos indivíduos em jogo tumultuado e cócegas pode diferir de20,21. Apesar disso, parece que cócegas invoca os mesmos mecanismos de recompensa como jogar turbulento entre coespecíficos. Cócegas é ativamente solicitada pelos animais e podem servir como uma recompensa por operante, aprendizagem, contribuindo a evidência que cócegas é substancialmente gratificante para ratos jovens7,11,12, 13 , 22. mesmo que ratos também têm sido relatados para aprender uma tarefa operante em troca suave acariciando como recompensa, eram mais rápido aproximar a mão de uma pessoa oferecendo cócegas comparado a acariciando7.

Os pinos usados em cócegas podem parecer semelhantes aos procedimentos comuns de contenção, mas há evidências que ratos percebem esses tipos de tratamento diferente. Quando ratos são tolhidos repetidamente, como um procedimento de injeção, segregam porfirinas excessivas, resultando em chromodacryorrhea (“lágrimas vermelhas”)8. Chromodacryorrhea ocorre em resposta a estressores agudos e faz com que a pele e a pele ao redor dos olhos e nariz para se tornar manchado uma cor avermelhada,23. Quando repetidamente baixou e amarrada nas costas como um pino, ratos mostraram menos atração para os seres humanos do que quando fez cócegas12. Estes resultados implicam que os apoios breves repetidos e lançamentos durante a fazer cócegas são percebidos diferentemente do que a contenção não-brincalhão. Assim, a técnica precisa, usada em cócegas tem implicações importantes para a geração de um estado afetivo positivo em oposição contribuindo para lidar com estresse.

O efeito de fazer cócegas no estado afetivo de rato de monitoramento pode ser facilmente realizado por atendente de vocalizações dos ratos. Ratos normalmente produzem duas categorias de vocalizações ultra-sônicas (aéreos), em torno de 22 kHz e 50 kHz, além de vocalizações audíveis. Os USVs de 22 kHz normalmente ocorrem quando antecipar eventos aversive e são acompanhados de elevados cérebro colinérgicos atividade24. Portanto, 22 kHz aéreos são considerados para indicar um estado afetivo negativo da ansiedade. Os USVs de 50 kHz, especialmente do tipo frequência modulada “trinado” (Figura 2), estão geralmente associados a gratificante situações e estímulos e são acompanhados por aumento cerebral dopaminérgico atividade24,25. Nesse sentido, expressão de abundantes 50-kHz aéreos é considerado para refletir um estado afetivo positivo24,26,,27,28. Finalmente, vocalizações audíveis são geralmente associadas e, portanto, utilizadas como marcadores de, dor física e desconforto. Assim, a produção diferencial dessas três formas de vocalizações oferece um registro confiável das alterações no estado afetivo de ratos26. Ratos produzem aéreos no próximo 22 kHz durante a exposição aos predadores, a exposição a estímulos dolorosos como choque de pé e luta entre machos28. Acariciando também tem sido relatado para eliciar várias aéreos de 22 kHz em ratos ingênuos, inferidos como indicando o afeto negativo2. Em contraste, quando cócegas por seres humanos, como quando estavam em jogo tumultuado com outros ratos, ratos produzem numerosos aéreos de 50 kHz. Segue-se que a taxa de 50-kHz aéreos fornece uma medida graduada da resposta afetiva positiva gerada por29,30de cócegas.

Descrições existentes de “como fazer cócegas em um rato” são bastante breves e podem levar a resultados variáveis. Além disso, iniciante “passivas de rato” pode ser excessivamente hesitante em suas tentativas para imitar o jogo tumultuado. As palavras “cócegas vigorosamente” são mais fáceis de entender quando demonstrado visualmente. Portanto, o objetivo deste artigo é fornecer uma descrição detalhada e a demonstração de como imitar positivos interacções lúdica dos ratos de forma coerente e eficaz que confiantemente provoca respostas positivas da maioria dos ratos quando Tratado. Este protocolo descreve uma técnica padronizada de cócegas e explica como fazer cócegas podem ser combinados com procedimentos tais como a contenção e injeção para mitigar potencialmente desagradáveis experiências afetivas.

Protocol

Todos os experimentos foram realizados em conformidade com os institutos nacionais de saúde guia para o cuidado e uso de animais de laboratório31,32 em instalações credenciado pela AAALAC International e foram aprovados pelo estado de Washington Comité de uso e cuidados animais institucionais da Universidade. O seguinte protocolo pode expor o pessoal a alérgenos de animais de laboratório. Equipamentos de proteção individual devem ser usado como recomendado por prestadores de cuidados de saúde e programa de segurança e saúde ocupacional institucional. O protocolo descreve procedimentos laboratoriais típicas condições de alojamento, mas pode ser adaptado para uso em instalações de maior-Biossegurança (por exemplo, usando um armário de biossegurança, etc.). 1. preparação de equipamentos e instalação Manipulação de caixa Prepare em casa gaiola do animal ou outro compartimento para cócegas, doravante denominada caixa de manipulação. Certifique-se que a caixa de manipulação é grande o suficiente para fornecer espaço para mão do revolvimento e para os ratos para se movimentar enquanto impedindo-os de saltar para fora. Certifique-se que a caixa de manipulação está livre de obstáculos. Assim, se realizando fazendo cócegas na gaiola em casa, remova quaisquer objetos como cabanas, roendo varas e papel amassado. Linha caixa de manipulação do assoalho com fundamento33. Outros tipos de cobertura de piso macio podem ser usados, mas não são tão eficazes no provocando vocalizações 50-kHz13. Coloque a caixa de manipulação sobre uma mesa ou bancada, a uma altura que permita que a mão do manipulador chegar confortavelmente o piso inteiro da caixa de manipulação. Minimize o efeito de novidade por habituating os ratos para a manipulação de caixa antes de fazer cócegas, se necessário. Temporizador: Para indicar o início e fim das 15 lutas s, coloca um dispositivo de temporização perto da caixa de manipulação onde ele pode ser facilmente lido. Alternativamente, um sinal auditivo de tempo podem ser transmitido para o revolvimento através de fones de ouvido. Gravação de vocalização Se vocalizações estão sendo gravadas para quantificar os tipos de vocalização diferente para fins de pesquisa, use um microfone capaz de captar o som de banda larga de 10-120-kHz, conectem a um dispositivo capaz de gravar sons de alta frequência. Suspender ou conectar o microfone na parte superior ou lateral da caixa, baixa o suficiente para claramente detectar as chamadas e evitar confusão com chamadas de ratos em gaiolas nas proximidades, mas fora do alcance físico dos ratos. Se vocalizações só precisam ser monitorados para confirmar a técnica adequada de cócegas, então usar um detector de morcego e configurá-lo na lateral da caixa. Se usando um detector simples, heteródino, defina o dispositivo a 50 kHz. Luvas de laboratório: Use uma mão desencapada ou em fatias finas com luvas quando cócegas. A técnica de cócegas foi desenvolvida usando uma mão nua.  No entanto, uma mão enluvada fina também é eficaz na indução de comportamento lúdico e produção de USV 50-kHz permitindo o manipulador detetar a quantidade de pressão a ser aplicada ao corpo do rato e sentir respostas do rato através da luva. 2. procedimento de cócegas Coloque as luvas de laboratório, se necessário. Traga a gaiola em casa para uma mesa ou bancada. Suavemente, transferi o rato na caixa de manipulação se cócegas não é conduzida na gaiola em casa. Inicie o temporizador e o áudio de gravação se necessário. Para uma aplicação coerente, alternam entre 15 s de contato de mão e 15 s lançamento do contato para um total de 2 min. Esta duração de interação foi encontrada suficiente para aumentar a atração de ratos para humanos11. Para começar a sessão de cócegas com um lançamento de s 15, coloque a mão imóvel dentro de um lado da caixa de manipulação. A presença da mão permite ratos solicitar interação orientando lambe e luz nips (petiscos) em direção a mão, indicando o interesse do rato para interagir22. Quando isso ocorre, mova a mão longe o rato, que pode solicitar perseguindo lúdico da mão pelo rato. Alternativamente, deixe a mão fora da caixa, durante o lançamento de s a 15. Siga o lançamento com 15 s de cócegas, iniciar a interação com um contato dorsal (2-4 s). Com uma mão, vigorosamente toque nuca do rato (superfície dorsal do pescoço) com a ponta dos dedos usando movimentos do dedo rápido como é comumente realizados em humanos fazendo cócegas. Evite o contacto com a garupa como esta área do corpo é alvejada durante encontros agressivos34. Siga o contato dorsal com um alfinete. Coloque o polegar e o dedo médio sob as patas dianteiras do rato; Levante o rato, alto o suficiente para permitir que rapidamente transformar o rato em suas costas, garantindo a cauda não ficar dobrado.Nota: Pode ajudar a empurrar levemente na parte de trás do rato com o dedo mindinho quando transformar o rato em suas costas. Mantenha o rato vagamente, mas com firmeza; ser assertivo, mas não forte. Uma vez que o rato está de costas no chão, segure o corpo vagamente ao mover os dedos rapidamente e vigorosamente, mas com cuidado na barriga, como é comumente usado em humanos fazendo cócegas. Mesmo que a estimulação é rápida e assertiva, mantenha a fixação rápida (s/pino 2-4) para minimizar as respostas negativas. Permitir que o rato para a direita em si e siga rapidamente com um contato dorsal. Continuam a alternar entre pinos e contactos dorsais. Em média, deve haver 4 a 5 pinos/15 s35. Não pegue o rato com ambas as mãos. Durante os 15 s de cócegas, sempre mantenha os dedos em movimento e em contacto com o corpo do rato, mesmo em transições entre pinos e contactos dorsais. Realize três adicionais 15-s cócegas e 15-s lançamentos para um total de 2 min. Se usando uma caixa de manipulação, retorne o rato para sua gaiola em casa. Se utilizar a gaiola em casa, coloque objetos de enriquecimento volta na gaiola. Limpa a manipulação de caixa com toalhas de papel para remover fezes e urina não absorvido pela roupa de cama. Repita com a próximo gaiola de ratos, conforme necessário. 3. fazer cócegas ratos múltiplos simultaneamente Ratos podem ser cócegas como um grupo de36. Se a duração do tratamento não é relevante, alternativo cócegas cada rato por 15 s. A duração da sessão de cócegas pode ser estendida para além de 2 min conforme necessário para que cada rato recebe quatro lutas de contato de mão intercalado por liberação de cócegas. Se a duração do tratamento é relevante para os resultados da investigação, em seguida, use os procedimentos a seguir: Para pares, agradar um rato por 15 s seguido imediatamente por cócegas o segundo rato para os próximos 15 s (i. e., durante o lançamento do primeiro rato), e assim por diante. O revolvimento não tem um período de descanso. Para trigêmeos, use o procedimento descrito em 3.2.1 para agradar dois dos ratos e fazer cócegas a um terceiro, ao mesmo tempo como um dos outros usando a outra mão. Para grupos de 4 ou mais ratos, agradar cada rato ou par de ratos por 15 s. A duração da sessão de cócegas pode ser estendida para além de 2 min, conforme necessário.

Representative Results

Fatores que afetam, ou potencialmente afetando, respostas para fazer cócegas estão resumidas na tabela 1. Resultados positivos de rato cócegas tem sido indicados pelo várias medidas de bem-estar de rato e efeito positivo. Achados comuns incluem o aumento da produção de 50-kHz aéreos, comportamento de aproximação maior e maior facilidade de manuseio. Relatados efeitos de rato a fazer cócegas ao nível celular e genética incluem expressão gênica alteradas no hipotálamo37e aumento da neurogênese no giro denteado do hipocampo38,39. Resultados indicativos de redução generalizada de ansiedade e medo dos seres humanos também são relatados como reduzida latência para abordagem em 9 diferentes experiências13, menos congelando depois medo condicionado40,,41e aumentou as entradas para o centro de uma arena de campo aberto por ratos alojados individualmente36. Para mais informações ver. LaFollette et al, que apresentam uma revisão sistemática da literatura cócegas que identifica 22 relatórios investigando os resultados de rato a fazer cócegas em comparação com outras técnicas de13. Alinham-se exemplos específicos, próximo dos resultados que podem ser obtidos quando a técnica cócegas é emparelhada com moderação e os procedimentos de injeção intra-peritoneal (IP). Ratos Sprague-Dawley (machos; 85-94 dias de idade; n = 48) agradado por 2 min, imediatamente antes e após a injeção de solução salina IP diariamente por 10 dias, especialmente quando combinado com o juvenil cócegas experiência (2 min/dia de 25-45 dias de idade), produziu mais 50-kHz USV só antes (GLM ANOVA, F3, 44 = 9.59, p < 0,0001; Figura 3A) e logo depois (F3, 44 = 8,74, p = 0,0001; Figura 3B) injeção (Tukey-Kramer, p < 0,05) em comparação com ratos expostos a uma mão passiva10. Durante o próprio parto breve da injeção, a produção dos 50-kHz aéreos foi refreada (média ± SE, 15 ± 1.4 aéreos/min) e manipulação de tratamento não teve efeito sobre sua taxa10. Concluiu-se que fazer cócegas, quando aplicado antes e após um processo de injeção, induziram um estado afetivo positivo que moderados a aversão do procedimento, especialmente para aqueles que tinham sido expostos a agradar como juvenis. Para descobrir se cócegas seria eficaz se reduziu para antes ou depois de uma injeção, ao invés de ambos e, então, qual seria melhor, respostas de rato para injeção cócega antes, depois e antes-depois foram comparadas. Taxas de chamadas audíveis e 50 kHz aéreos foram medidas como indicadores de positivas e negativas afetam, respectivamente12. Ratos Sprague-Dawley (machos; 32-41 dias de idade; n = 96) foram ou conteve e deu uma injeção salina diária IP (INJ) ou contido sem receber uma injeção (controle, CON) e expostos a um dos seguintes tratamentos: sem cócegas, os ratos não foram tocou antes e após o procedimento de retenção (TN); agradado por 2 min antes (TB), depois (TA), ou antes e depois de retenção (TBA)12. Em 2 min antes de contenção, ratos de tratamentos que receberam cócegas antes o sistema de retenção (TB, TBA) produziram os aéreos de mais de 50-kHz (GLMM ANOVA, F3,88 = 49.19, p < 0,0001; A Figura 3). TA e TN ratos não houve diferença na taxa de aéreos produzido antes do procedimento de contenção. Durante o procedimento, qualquer rato que recebeu cócegas (TA, TB, TBA) produziu USV de 50-kHz mais do que aqueles que foram não fez cócegas (TN; F3,88 = 50,67, p < 0,0001; Figura 3D). Entre ratos agradados, aqueles que recebem cócegas antes do procedimento (TB, TBA) produziram mais 50-kHz aéreos durante a contenção em comparação com o que fez cócegas depois (TA; p < 0,05). No prazo de 2 min após o procedimento, ratos em todos os grupos agradados (TA, TB, TBA) produziram mais 50-kHz aéreos do que aqueles que foram não fez cócegas (TN; F3,88 = 53.64, p < 0,0001; Figura 3E). Além disso, durante o procedimento, ratos cócegas antes de retenção (TB, TBA) produziu menos chamadas audíveis em comparação com ratos que não recebidos cócegas (TN), Considerando que ratos cócegas depois (TA) não diferiram daquelas em outros grupos (F3,88 = 3,67, p= 0,02; Figura 3F). Os resultados demonstram que cócegas ratos antes de restringi-los para uma injeção de IP produziram sinais de maior efeito positivo sobre os períodos antes, durante e após o procedimento do que cócegas somente após contenção12. Cuidadores aplicado um dos seguintes tratamentos manipulação para ratos (machos Sprague-Dawley; n = 32) de 57 a 74 dias de idade: (1) manipulação mínimo uma vez por semana na gaiola mudar; (2) a exposição a uma mão passiva por 2 min diariamente; (3) 2 min de cócegas a cada dia, para imitar social jogar; (4) 2 min diariamente de contenção na traseira do rato, simulando a fixação Leonor por uma dominante11. No minuto seguinte um IP injeção, ratos do Tickled e tratamentos passivos passou mais tempo de criação na parte da frente da gaiola, perto de onde o investigador estava de pé, em comparação com ratos da mínima e tratamentos de retenção (GLM ANOVA, F3, 27 = 5,70, p = 0,004; A Figura 3). Além disso, ratos Tickled proferiu mais de 50 kHz aéreos que ratos no tratamento passivo quando expostos a uma mão familiar ou desconhecida por 3 min em um teste de abordagem humana (Log-transformadas média ± SE chamadas/min, mínima: 0,7 ± 0,26, passivo: 0,6 ± 0,18, cócegas: 1,8 ± 0,30, Moderação: 1,4 ± 0,28; F3,28 = 4.04, p = 0,02). Assim, a simples presença de uma mão passiva assistida por habituação dos ratos para os seres humanos em relação à manipulação mínima, mas fazendo cócegas foi o método mais eficaz para produzir uma resposta positiva para os seres humanos11. Figura 1: romancezinho rato jogar comportamento. (A) contato Dorsal; (B) pino18. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. Figura 2: 50-kHz vocalizações ultra-sônicas da frequência modulada tipo “trinado”. Cinco vocalizações trinado foram produzidas em 1 s por um rato durante a fazer cócegas. As linhas horizontais em 17 – 25- e 70-kHz foram produzidas por equipamentos eletrônicos na sala (ex., computador, microfone, câmera). Figura 3: respostas dos ratos expostos ao experimentais, cócegas, antes ou em combinação com procedimentos como injeções de (IP) intra-peritoneal. Taxa (média ± SE chamadas/min) de 50-kHz aéreos produzido (A) antes e (B) depois de um procedimento de injeção por ratos machos adultos expostos a mínima manipulação (M) ou agradar (T) como juvenis e uma mão passiva (P) ou cócegas (T), imediatamente antes e depois injeção (produzindo quatro combinação de tratamento: M-P, T-P, M-T, T-T); de Cloutier et al 10. taxa de 50-kHz aéreos (média ± SE chamadas/min) produzido (C) antes, (D) durante e (E) depois de contenção (com ou sem uma injeção de IP) uma vez diariamente por 10 dias consecutivos por juvenis ratos machos que receberam sem cócegas (TN) ou fazendo cócegas antes (TB), depois (TA), ou ambos antes e depois (TBA) o procedimento; e (F) a taxa de chamadas sonoros produzido durante a contenção; de Cloutier et al 12. (G) duração (média ± SE s) de criação nas proximidades do pesquisador durante o 1 min após a injeção do IP por ratos machos expostos ao mínimo, passivo, cócegas ou retenção manipulação pelos cuidadores; de Cloutier et al 11. barras com diferentes letras (a, b, c) indicam diferenças nas comparações emparelhadas (Tukey-Kramer, p < 0,05). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. Fator de Efeito Referências Intrínseco Idade Nenhuma diferença no 50-kHz vocalizações ultra-sônicas (aéreos) ratos idades entre 24-44 e 89-92 dias de idade 18, 29, 42 Diminuir em 50 kHz aéreos para ratos de 71 dias de idade para 148 dias de idade 29 17 machos dia velho fez muitos mais 50-kHz aéreos de 7-9 mês machos velhos 43 Ratos, cócegas como juvenis e adultos mostraram os resultados mais positivos em comparação com ratos apenas cócegas como juvenis ou adultos. 10 Sexo Ratos machos produziram mais 50-kHz aéreos aos 44 e 71 dias de idade, mas as fêmeas produziram mais 50-kHz aéreos aos 148 dias de idade 29 Ratos machos produziram mais 50-kHz aéreos que as fêmeas com 44 e 58 dias. 43 Sem diferenças de sexo em USVs de 50 kHz em 96 ratos jovens de Long-Evans ou 52 ratos Wistar jovens 42, 44 Ratos Wistar juvenil feminino produzido mais 22 kHz aéreos que os machos 44 Diferenças individuais entre Ratos que proferiu mais 50-kHz aéreos mostrou tempo de diminuição da abordagem para auto administrou cócegas, aumentaram o viés de apreciação positiva após fazer cócegas e aumentaram a proliferação celular hippocampal após fazer cócegas 27, 37, 45 Ratos mais brincalhão produziram mais aéreos de 50 kHz 43 Estirpe Provas não relatada, mas anedótica sugerem ratos de diferentes estirpes e criadores diferem em sua resposta a fazer cócegas. Linhas de rato divergiram quando selecionado com alta vs. baixa taxa de aéreos de 50 KHz, em resposta a fazer cócegas. 22, 26, 42, 46 Experiência anterior de cócegas Aumento da produção de 50-kHz ultra-sônico aéreos 12 Extrínseco Roupa de cama Ratos produziram mais 50-kHz aéreos quando cócegas na cama familiar vs sem fundamento 33 Stress Fazendo cócegas ratos 1 hora, mas não de 23 horas, após estresse de retenção reduzida produção de aéreos de 50 kHz 47, 48 Temporização Fazendo cócegas ratos antes de injeção foi mais eficaz em aumentar a 50 KHz aéreos que cócegas após injeção 12 Sexo de manipulador Nenhum efeito encontrado Panksepp, J. 2014, dados não publicados Familiaridade de rato com manipulador Ratos produziram mais de 50 kHz aéreos e passaram mais tempo perto de um familiar, em comparação com um desconhecido revolvimento 11 Manipulador de cócegas experiência / vigor de cócegas pelo manipulador Produção afetada dos 50-kHz aéreos mas não preferência e abordagem do comportamento 2011 Cloutier, S., dados não publicados Duração dos pinos pelo manipulador / frequência de alternância entre contatos dorsais e pinos Menor frequência de nibbles (interpretado como jogar solicitação) foi direcionada para uma mão de imposição de s de 15 pinos (retenção) do que uma mão dando cócegas com múltiplos contatos dorsais e pinos por 15 s 11 Odorantes (por exemplo, perfume, shampoo, creme de barbear) usado pelo manipulador Não informou Tamanho do grupo social Moradia individual aumentou respostas positivas para fazer cócegas em relação ao alojamento em grupo na maioria dos experimentos. Fazendo cócegas ratos alojados em grupo com os companheiros de gaiola em gaiola casa reduziram essa diferença 7, 22, 27, 36 Intensidade da luz Fazendo cócegas em 1000 lux reduziram 50-kHz aéreos em comparação com 25 lux. 43 Ruído Não informou Gaiola de limpeza antes de fazer cócegas Produção induzida de 22 kHz aéreos em alguns ratos. 12 Hora do dia Nenhum efeito sobre a produção de USVs 50-kHz quando realizada no início ou no final do período de luz. Ratos no início/fim do luz vs períodos médio do período claro ou escuro não tem sido comparado a fazer cócegas 2011 Cloutier, S., dados não publicados Tabela 1: Lista de fatores que afetam, ou potencialmente afetando, as respostas dos ratos para fazer cócegas, uma técnica de manipulação lúdica se destina a imitar o jogo tumultuadas de rato.

Discussion

Este protocolo descreve uma técnica para rato cócegas, uma técnica de manipulação lúdica, imitando o comportamento de jogo tumultuadas de rato que é eficaz em gerando vocalizações indicativas de efeito positivo e comportamento de abordagem a aumentar quando os ratos são manipulados para criação ou médicas comuns e procedimentos tais como a injeção de IP de pesquisa.

Jogo social, uma forma tipicamente positiva de contato social, tem sido proposto para auxiliar na calibração de reações emocionais a assustadora situações42,43e gerar a resiliência para ansiedade e depressão44. Por rato imitando social jogar, fazer cócegas parecem ter igualmente efeitos benéficos7. Assim, para a aplicação de cócegas, para ser bem sucedido em induzir Estados afetivos positivos, é importante ter em mente que a mão destina-se a agir como “o parceiro de jogo” durante as cócegas. A mão é atraente porque simula os comportamentos que ratos esperam e desfrutar de outro rato durante a reprodução de fatos. Daí, levantando e segurando o rato com ambas as mãos não está imitando o jogo de rato e não podem ter o mesmo efeito. Na verdade, ratos de laboratório vão aprender a evitar restrições não-lúdico, no qual um manipulador prende-los com uma mão e acaricia-los com a outra mão45. Durante rato cócegas, também é importante mover a mão com confiança e assertivamente, sendo animado e brincalhão. Manter a fixação rápida (2-4 s/pino) deve minimizar respostas negativas, porque em jogo tumultuado entre ratos, repetiu fixação leva a colocação em circulação de 22 kHz USVs18.

Apesar de ratos jovens são mais brincalhão e mostram respostas mais fortes para fazer cócegas de ratos adultos18, fazendo cócegas na idade adulta também tem benefícios10. Fazendo cócegas ratos quando jovem também foi encontrada para ter benefícios mais tarde na vida36, sugerindo que os ratos experimentam um prolongado efeito positivo na sua reação emocional a presença humana. Diferenças do sexo em resposta a cócegas são inconsistentes, com relatos de nenhuma diferença do sexo em ratos jovens46,47, machos juvenis, produzindo mais de 50 kHz vocalizações e vocalizações de 22 kHz menos do que as fêmeas juvenis29 ,,48,39e fêmeas mais velhas, produzindo mais de 50 kHz vocalizações do que os machos de mesma idade29, semelhante aos achados por jogo social49.

A eficácia da técnica cócegas pode ser avaliada usando a vocalização e padrões de movimento do rato. Ratos vão mordiscar e lamber os dedos do manipulador durante os períodos de 15-s de lançamento cócegas11a seguir. Nibbles são mordidas leves, não prejudiciais que têm sido descritas como comportamento de jogo-solicitação em ratos jovens22. Quando o manipulador move a mão ao redor da caixa de manipulação, o rato vai seguir e persegui-lo. Ratos, especialmente os jovens, também vão correr, correr ao redor da caixa entre as séries de cócegas e aumentam de forma distinta em atividade após um ataque de cócegas, semelhante à atividade de execução que caracteriza o jogo tumultuado. Se o rato permanece imóvel durante lançamentos, ajuste da técnica cócegas, como a redução de duração de pin ou dando menos pinos, provavelmente é necessária. É melhor dar os pinos de curta duração para a primeira sessão de cócegas. Duração e número de pinos podem ser aumentadas porque os ratos se habitua a fazer cócegas. Ratos proferem 50-kHz aéreos, incluindo trinados, durante cócegas e entre as séries de cócegas. Um aumento gradual no número de trinados produzidos durante os lançamentos de 15-s pode ser visto durante as duas primeiras semanas de cócegas diário antes de estabilizar-47. Diferenças individuais permitem que ratos agradados ser dividida em alta e baixa os chamadores que diferencialmente respondem ao estresse, ansiedade e anedonia46,,47,50.

Rato fazendo cócegas tem sido usado com sucesso para induzir efeito positivo como avaliados com base na produção de 50-kHz aéreos durante13a fazer cócegas. Recentemente foi implementado como uma técnica para reduzir o medo dos seres humanos em ratos e atenuar sua aversão de médicos e procedimentos de investigação tais como a injeção. A evidência sugere que, quando fornecido por apenas 2 min diário por animal, cócegas é um método prático e eficaz para reduzir a evasão fiscal em matéria de humanos11. Considerando que ratos jovens vão jogar juntos para cerca de 60 min diariamente51,52,53, cócegas por 2 min diariamente é prático mas presumivelmente muito breves para replicar os efeitos de jogo social entre ratos. Proprietários de rato de estimação, que geralmente têm mais tempo para lidar com os ratos que cuidadores de laboratório, podem fornecer ratos com cócegas adicionais, enquanto os ratos continuam a responder positivamente. Com base em Burgdorf et al 44 , 45, o primeiro 15 min de jogo tumultuado parece ser o mais positivo para os ratos. Por sua vez, pode ser mais eficaz fazer cócegas ratos, por períodos de até 15 min, especialmente se por algum motivo justificado não pode ser mantidos em um grupo social. No entanto, baseado na peça como “formação para o inesperado”38, uma técnica mais variada do que o método descrito aqui pode ser necessária para manter a jovialidade de mais sessões de cócegas. Sessões adicionais de cócegas cada dia também podem ser benéficas, enquanto outras atividades biologicamente importantes tais como o sono e a alimentação não são prejudicadas. Bem como contribuir para melhorar o bem-estar de laboratório e ratos de estimação, a técnica de cócegas padronizada descrita pode ser usada em contínua pesquisa vista compreender os efeitos do jogo social e seus componentes no comportamental, social e o cérebro desenvolvimento.

Quando cócegas foi realizada em torno da injeção, particularmente quando combinado com a experiência anterior de cócegas (terminando 40-50 dias antes), aumentou taxas de 50-kHz USV antes e após a injeção e reduzidas taxas de chamada audíveis durante injeção10 . Assim, fazendo cócegas parecem ter atenuado os efeitos adversos das injeções de IP, especialmente em ratos acostumados a agradar como juvenis10. Apesar de fazer cócegas não impediu o desconforto associado com a injeção como avaliados com base na produção de chamadas audíveis, aumentou 50-kHz aéreos comparados com a condição de controle, antes, durante e após o procedimento de retenção12. De acordo com dados do USV de 50 kHz, o ponto de tempo mais eficaz para aplicar cócegas foi antes e não após o procedimento de retenção12. A cócega ratos antes da injeção de um reporte efeito positivo que elevado afetam durante o procedimento de12. Cócegas, portanto, podem minimizar potenciais efeitos negativos da rotineiro procedimentos médicos no rato bem-estar e comportamento. Mais pesquisa é necessária para determinar como a técnica pode ser emparelhada eficazmente com outras técnicas de injeção e outros procedimentos médicos/experimental.

Em geral, temos demonstrado que resultados cócegas de rato em resultados positivos tais como aumentaram da produção dos 50-kHz USV e comportamento de abordagem, bem como diminuição da evasão dos seres humanos e resistência ao manuseio. Recomendamos que o rato agradar como um método viável para melhorar o bem-estar de rato e Estados afetivos positivos de modelagem.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Sylvie Cloutier, Megan LaFollette, Brianna Gaskill e Ruth Newberry gostaria de dedicar este artigo à memória de Jaak Panksepp, nosso amado co-autor, que faleceu durante os estágios finais de completar este manuscrito. Lembramos de Jaak carinhosamente como o “pai do rato cócegas” – seus insights sobre emoções animais formam a inspiração fundamental para este trabalho. Este material é parcialmente baseado em trabalho apoiado por um Washington estado Universidade veterinária verão Research Fellowship, um prêmio de aprimoramento de bem-estar Animal do Instituto de bem-estar Animal e um “Grant para Laboratory Animal Science” do americano Associação para a ciência de animais de laboratório. A publicação deste artigo foi patrocinada pela Petco Animal Supplies, Inc. Gostaríamos de agradecer a Carol Dowell e da Universidade de Purdue programa de Animal de laboratório nos permitir fazer cócegas seus ratos para as filmagens.

Materials

Table or workbench No specific brand is recommended.
Handling box (rat home cage or another enclosure) No specific brand is recommended.
Bedding or or other type of soft cover No specific brand is recommended.
Gloves (thin laboratory gloves) Optional.
Timing device Deltaworks Interval Timer:Timing for HIIT Training, Workouts
https://itunes.apple.com/us/app/interval-timer-timing-for-hiit-training-workouts/id406473568?mt=8		 Optional. Any timer will do, although it is convenient to use an interval timer if you are tickling multiple rats.
Ultrasonic microphone such as a bat detector or USB microphone Magenta Electronics LTD Bat4 Bat Detector
https://www.magenta2000.co.uk/acatalog/Bat_Detector_Bat4.html		 Optional. The Magenta bat detector is relatively inexpensive and easy to use, but can only detect vocalizations at one range at a time.
Dodotronic Ultramic 200K
http://www.dodotronic.com/ultramics/?v=7516fd43adaa		 Optional. This microphone has worked well in our experiments. There are many other options for ultrasonic microphones.
Bioacoustic software CIBRA SeaWave
http://www-3.unipv.it/cibra/seawave.html		 Optional. Free software with limited recording capabilities.
CIBRA SeaPro
http://www-3.unipv.it/cibra/seapro.html		 Optional. This software has extensive recording capabilities, and has worked well in our studies. There are many other software packages that work with bioacoustic microphones.
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Cloutier, S., LaFollette, M. R., Gaskill, B. N., Panksepp, J., Newberry, R. C. Tickling, a Technique for Inducing Positive Affect When Handling Rats. J. Vis. Exp. (135), e57190, doi:10.3791/57190 (2018).
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