في فيفو حاجز الدم في الدماغ نفاذية مقايسة في الفئران باستخدام المسمى فلوريسسينتلي تتبع

حاجز الدم في الدماغ (BBB) يتألف من خلايا بطانية microvascular (ECs) يدعمه مرتبطة ارتباطاً وثيقا بيريسيتيس (أجهزة الكمبيوتر)، وانشيثيد في الصفيحة القاعدية، وأستروسيتيس (ACs) بتغليف الغشاء الطابق السفلي مع النهاية أقدامهم^{1 ،2}. ECs تتفاعل مع العديد من أنواع الخلايا التي دعم وتنظيم وظيفة الحاجز، رابطة الدول الكاريبية وأجهزة الكمبيوتر، وفي المقام الأول، وأيضا الخلايا العصبية و microglia، كلها معا تشكل وحدة neurovascular (NVU). NVU حاسم بالنسبة لوظيفة BBB، مما يحد من نقل السموم المنقولة بالدم والمسببة للأمراض من الدخول إلى الدماغ. هذه الوظيفة هي نتيجة لضيق مفرق جزيئات مثل كلودين-5، أوككلودين، زونولا أوككلودينس-1، التي موجودة بين ECs وأيضا بسبب عمل الناقلين مثل فبروتين/سكري (ف-gp) efflux تلك الجزيئات التي تدخل البطانة بالعودة إلى سفينة التجويف^1،،من²³. ومع ذلك يسمح بي بي بي لنقل الجزيئات الأساسية مثل المواد الغذائية (السكر، والحديد، والأحماض الأمينية) من الناقلين محددة أعربت المفوضية الأوروبية أغشية البلازما^1،2،3. الغاية هو الاستقطاب طبقة الجماعة الأوروبية فيما يتعلق بتوزيع ناقلات مختلفة بين لومينال (الدم-تواجه) وأبلومينال (أغشية الدماغ المواجه) للسماح نقل محددة واتجاهي الدالة^4،5 . بينما BBB الحماية فيما يتعلق بأحكام تنظم الوسط الجهاز العصبي المركزي، تحديا رئيسيا لإيصال المخدرات الجهاز العصبي المركزي في أمراض مثل باركنسون مع BBB وظيفية. حتى في الأمراض العصبية مع بي بي بي خلل وظيفي، أنه لا يمكن افتراض أن زيادة إيصال المخدرات الدماغ لا سيما والخلل في الحاجز ويمكن أن تشمل الأضرار بأهداف محددة الناقل على سبيل المثال كما هو الحال في مرض الزهايمر (AD). في الإعلان، تعرف العديد من الناقلين بيتا اميلويد مثل LRP1، الغضب، فسباق الجائزة الكبرى لتكون dysregulated واستهداف متعهدي النقل هذه ومن ثم قد يكون من غير المجدي^6،،من⁷⁸. هو ضعف BBB في العديد من الأمراض العصبية مثل السكتة الدماغية، الإعلانية، والتهاب السحايا، التصلب المتعدد، وفي الدماغ الأورام^9،،من¹⁰¹¹. استعادة وظيفة الحاجز جزءا أساسيا من استراتيجية علاجية وهكذا يتم تقييمه الحرجة.

في هذا العمل، لقد قمنا بوصف موضوعي وبروتوكول الكمية لفحص النفاذية في القوارض ونحن تطبيقها بنجاح على عدة خطوط الماوس كلا المرض وراثيا والتجريبية نماذج^{10،12،13 ،14}. ويستند الأسلوب حقنه داخل بسيطة لتتبع الفلورسنت يليه نضح الفئران لإزالة تتبع من حجرة الأوعية الدموية. المخ والأجهزة الأخرى هي نضح الوظيفة التي تم جمعها والنفاذيه بهدف تقييم ومؤشر نفاذية المطلق استناداً إلى قياسات الأسفار من الأنسجة هوموجيناتيس في قارئ لوحة. يتم تصحيح جميع الأسفار الخام القيم للخلفية باستخدام هوموجيناتيس الأنسجة أو المصل من الحيوانات الصورية التي لا تتلقى أي التتبع. وترد نورماليزيشنز وافرة لحجم المصل والمصل الأسفار ووزن الأنسجة، وهكذا تسفر عن مؤشر نفاذية المطلق وقابلة للمقارنة بين تجارب وأنواع الأنسجة. تيسيرا للمقارنة بين المجموعات، ويمكن تحويل قيم الفهرس نفاذية المطلق لنسب سهولة كما كان يؤديها قبل¹². وفي الوقت نفسه، ويمكن الاستفادة العقول هيمي المخزنة والكلى للتصور الراسم بالأسفار مجهرية¹⁰. يمكن أن يكون الفحص المجهري fluorescence الكلاسيكية قيماً في الحصول على الفرق الإقليمية في نفاذية لو مرهقة بسبب اختيار ذاتي من أقسام النسيج والصور لتحليل شبه كمي. الخطوات التفصيلية التي ترد في البروتوكول، ويتم إضافة الملاحظات عند الاقتضاء. وهذا يوفر المعلومات اللازمة لأداء فحص النفاذية في فيفو بنجاح في الفئران التي يمكن تحجيمها إلى غيرها من الحيوانات الصغيرة. يمكن تطبيقها في التحليل لأنواع كثيرة من تتبع السماح للتهمة والحجم على أساس تقييم نفاذية بمزيج من تتبع مع الأطياف fluorescence متميزة.