マウス脂肪組織の採取と RNA 解析のための処理

肥満はタイプ 2 の糖尿病¹などの合併症につながることが世界的に流行です。食餌誘導性肥満と遺伝子組み換え動物モデルは、肥満とその関連する合併症で研究に頻繁に使用されます。通常、白色脂肪組織は余分なエネルギーのための収納スペースとして知られている、脂質の構成は主にエネルギーに変える褐色脂肪組織熱^2,3間。脂肪組織は動的と拡大し、食品の摂取量、身体活動など多くの要因によって縮小します。したがって、これらの変更に貢献の要因を決定する適切な脂肪組織の採取と処理が必要な^{4 です}。

白色脂肪組織の間で、皮下脂肪および内臓脂肪質のターミナルを解剖学的局在など異なるプロパティを持つ機能^2、5それを一般に認められます。その結果、矛盾する結果や大規模な変動を避けるためには、注意を脂肪パッドを収集するときこれらの異なる脂肪質のターミナル間の交差汚染を避けるために取られる必要があります。

また、白いマウス脂肪組織からタンパク質や RNA を隔離するときの 3 つの主要な課題があります。まず、肥満マウスの脂肪パッドを収集別の白い脂肪質のターミナルを隔てる境界線は常に明確で心⁶腎臓など他の臓器とは対照的ではない、簡単な作業ではありません。第二に、RNA または蛋白質の分離の間に、脂肪の高い脂質含量のため、脂質の層の上に浮かぶし、サンプルに直接アクセスできなくなります。第三に、褐色脂肪組織や他の組織ではなく白色脂肪組織は RNA および蛋白質含量がかなり低いとこれは若いマウスを使用する場合の大きな懸念材料は、投与されたマウスは通常の (N) 食事あり、マウスが期待される低脂肪塊 (すなわちKO モデル、薬物による治療は運動トレーニングなど)。^7,8。

したがって、脂肪組織からの RNA を隔離する適切な方法を選択することは重要です。フェノール/クロロホルム抽出する別の方法は、商業キットです。彼らは通常列⁹の RNA の浄化に続いて、初期のフェノール抽出手順に基づいています。しかし、これらのキット通常より高価なと RNA の品質は、変数かもしれない低い収率のサンプルを与えるより時間がかかる。ただし、フェノールのソリューション/クロロホルム抽出ここで説明する最も大きな利点の 1 つは単一のサンプル¹⁰からの蛋白質、DNA、RNA を分離する可能性です。マウス脂肪パッドは、通常小さい (無駄のないマウス モデル) を中心に少量の RNA および蛋白質を与えるので、これらのプロトコルは、小さなサンプル 1 つ得ることができるデータを最大化します。

本稿の目的は、白い 3 つのマウス脂肪組織拠点と同様の RNA の隔離の質と量から適切なサンプル収集を確保する方法を詳しく説明するようです。このプロトコルに従うことによって得られる RNA は、リアルタイム PCR の試金を実行する使用できます。このプロトコルは培養された主な脂肪細胞からの RNA の隔離のためのものではありません。