私たちは深部静脈血栓症のマウスモデルとして下大静脈狭窄をここで記述します。このモデルは、人間の静脈血栓症の主要なトリガーの 1 つ、血流制限を繰り返します。
深い静脈の血栓症 (DVT) とその壊滅的な合併症、肺塞栓症、高い死亡率に深刻な健康問題があります。静脈血栓形成のメカニズムは曖昧のまま。(例えば手術や長距離飛行後) 流動性の欠如は、深部静脈血栓症につながる主な要因の 1 つです。流動性の欠如の病態生理学的結果は、静脈弁の血流停滞です。ここでは、モデル、血栓症運転要因としてこのような流れの妨害を模倣するを説明します。このモデルでは、流量制限 (狭窄) 下大静脈 (IVC) が作成されます。48 h の IVC 内腔の約 90% の閉鎖血栓人間のそれらに構造的に類似の開発で起因します。類似: i) 血栓検索ボリュームのほとんどは赤、すなわち、iii) 裸内皮化単分子膜、iv) 血中 D ダイマー レベル、および v) 可能性を防ぐために赤血球とフィブリン、ii) 白い部分 (ザーンの行) の存在から成ります低分子ヘパリンによる血栓症です。制限には血栓と実際の変数のサイズが含まれている野生型マウスの一定割合 (0 – 35%) 血栓をもたらさないことがあります。目視および計測のほか血栓は血栓性の動態は、超音波検査などの非侵襲的技術によって視覚化が可能します。イベント (例えば血管壁細胞の募集) を直接観察に適用可能性があります短い時間ポイント (1-6 h)、生体顕微鏡血栓形成の前します。世界中の複数のチームによるこのメソッドの使用は、深部静脈血栓症発生の基本的なメカニズムを明らかにし、その予防のために有益かもしれない潜在的なターゲットを識別する可能になりました。
深部静脈血栓症 (DVT) 深部静脈血栓症の開発は、通常 (しかしだけでなく) の足。肺塞栓症と組み合わせて (PE; 一緒に静脈血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症として示される) それは年間約 90万人で開発し、深刻な健康問題と経済問題を抱えて1,2を表します。PE、深部静脈血栓症の合併症は、血栓が元の場所から戸建を取得し、呼吸不全と死を引き起こすことができる肺に達するときに発生します。静脈血栓塞栓症による死者数は、エイズ、乳房癌や交通事故、結合された3から死亡率を超えています。
以外にも深部静脈血栓症を引き起こす主要な要因の理由を知られている癌や外傷など、移動4、5の欠如です。手術 (特に整形外科)、麻痺、長距離路線やその他の理由からこれがあります。静脈の血流は筋ポンプに依存し、したがって血液の停滞で手足固定結果フロー静脈弁の血栓症に 。記載方法の目的は、このような血液流れ歪み6,7を要約することです。下大静脈 (IVC) の流量制限人間血栓6の構造のような人間の静脈弁の血栓の形成の結果作成された条件を模倣しています。血栓の大部分は赤く、赤い血球、フィブリン、血小板の結合で構成されています。血栓は、小さな「ザンのライン」を人間静脈血栓で説明に似ている (図 1)、血小板の濃縮「白い部分」を持っています。血栓の両方の部分含むも好中球8、将来血栓6,9サイトで募集する最初の細胞の間であります。赤い部分の好中球は、白い部分に好中球網8は欠けているように見えるに対し好中球細胞外トラップ (網) を放出します。同様に人間の深部静脈血栓症にマウスでの血栓症は血中 D ダイマー レベル (図 2) を伴います。低分子量ヘパリン (エノキサパリン) 患者における深部静脈血栓症予防のため使用はまたマウスの血栓症を防ぐ。この方法の重要な利点は、人間の深部静脈血栓症10の特徴である内皮侵食9の不在です。この機能により、下大静脈狭窄、血栓症の誘導などよりも深部静脈血栓症のより臨床的に関連するモデル塩化第二鉄、内皮細胞の侵食を誘導して血栓が血小板11,の主に成っている12,13。下大静脈完全な停滞のモデルは、いくつかのチーム14,,1516が優先されます。狭窄、容器、維持は残差流と対照をなしてうっ滞のアプリケーションは流れが完全に停止し、こうして血栓症サイトに全身投与物質のアクセシビリティを制限します。また、狭窄やうっ滞による血栓症のメカニズムが異なっているようだ: 狭窄により局所炎症の開発 (内皮、Weibel Palade 本体のコンテンツのリリース、免疫細胞の活性化と血管壁への血小板) うっ滞ではなく血栓症を誘発するようであるに対し”immunothrombosis”6,9,17の原因に基づいて、特に、組織因子とその他の凝固、線溶機構18,19,20。したがって、狭窄症、うっ血のモデルは、その機構は確かに重なる可能性がありますが、静脈血栓開発のわずかに異なる側面を反映してください。DVT21,22の電解 IVC モデル (EIM) は、血管壁を部分的にのみ遮蔽血栓を誘導します。したがって、さまざまな薬物の全身投与の血栓の成長に及ぼす影響をテストするために便利です。ただし、このモデルには、この機構の病態生理学的関連性の少なくとも議論の余地を作って電流による下大静脈壁の保全 (針の挿入) の中断と血栓症の誘導が想定しています。
ここでは、血流歪み、深部静脈血栓症の主要なトリガー因子を模倣した下大静脈狭窄のプロトコルが表示されます。48 時間以内 c57bl/6 マウスの 65-100%、25-50 %2-6 h6,8,23内でマウスの血栓症、下大静脈狭窄を誘導する (ブリル、未発表データ、2016)。メソッドの主要な制限は、血栓のサイズ24 (図 4)、短期 (6 h) と長期 (48 h) 下大静脈狭窄後観察の変動です。そのような変動の理由 (ことを考えると、スペーサーなど、条件の同じ麻酔等が使用される) あいまいなままですが、1 つはその解剖学的推測可能性がありますマウス (例えば、幅下大静脈、数、サイドとバックの両方の位置の間の変化枝) この現象の根底にあります。血栓サイズの可変性は主な結果血栓症有病率 (血栓マウスの %) をなります。血栓症の有病率は、分割表とフィッシャーの正確確率検定を使用して比較できます。例外は、ポドプラニン抑制抗体の注射が7が観察された後に減らされた血栓が同じ血栓症有病率とサイズ実験の 1 つでした。
このメソッドは、静脈血栓症の開始を検討するときに便利です。それは血栓症に最終的につながる細胞の募集など、血管壁の初期イベントを調査することができます。薬のプロまたは反 thrombotic 効果は、プライマリの読み出しをされている血栓症有病率とこのモデルを使用して評価できます。48 h の狭窄は、するプロトロンビンの表現型が予想される場合、6 h 狭窄を使用できるに対し、抗血栓性の表現型を明らかにするのに適用されます。血栓と周囲の下大静脈壁の組織学的解析を行うもできます。
結紮または特許左サイドの枝かどうかすべき質問は開いたままになります。1 つのグループは、側枝の結紮は血栓のサイズを増加せず、側枝下大静脈結紮サイトに 1.5 mm 厚よりも近くの場所は劇的に血栓開発25を損なうことを示しています。側枝の閉鎖可能性がありますそれらの血管内皮細胞障害を誘発しても手術26の時間を増やします。私たちの手で側枝の閉鎖の欠如大幅に減少 (48 h 狭窄後 10-30% に血栓症の有病率ブリル、未発表)、したがって我々 はすべての目に見える側面枝を縛る。
理想的には、マウス、同じ背景にも、さまざまなソースから可能性がありますがあるわずかに異なる血栓症有病率としては、濾胞を使用ください。(たとえば、生化学的な) 任意のパラメーターに DVT 自体の影響を検討すると、偽手術動物が使わなければなりません。Sham 群は、同じ手術を受けるが、下大静脈を結紮が緩く閉じられ、狭窄を生じることがなく残っています。
このプロトコルの最も頻繁な間違い (重要なステップ) 大動脈、それは出血の結果は正確に若干低くはなりますが、船舶間の角度で下大静脈を分離する努力であります。大量の出血が発生すると、マウスの良い回復なりそう、実験を停止し、動物を安楽死させるをお勧め。通常、マウスも回復、ケージ内を移動し、重量を大幅に失うことはありません。男性と女性の両方の 20 グラム以上のマウスを使用してお勧めし、戦闘および傷害を避けるために実験終了時まで手術後個々 のケージに動物 (特に男性) を維持します。それは、雄マウスが女性27より大きい血栓を作り出す深部静脈血栓症の別の (電解) モデルで報告されています。我々 のデータの分析は雌雄マウス (ブリル、未発表) の血栓症有病率の相当な違いを発表していません。したがって、研究者は、男女両方のマウスで下大静脈狭窄症モデルを用いて実験を行うよう奨励されます。
縫合やステープルを解き明かすことが否定できない特に長い実験 (週そして長い)。このように、マウスは縫合の整合性のために特別 1 日少なくとも 2 回チェックする必要があり、血のトレース、床敷の外観に特別な注意を与えられるべき。
その他の動物のモデルのような下大静脈狭窄は人間への翻訳の面で限界があることに留意。たとえば、人間の深部静脈血栓症は静脈弁内部に生じるに対し、マウス IVCs にはバルブはありません。また、人間は、静脈の血流の重要なメカニズム加速されて筋肉ポンプと脊髄縦書きをあります。対照的に、マウス脊髄横向きには役割の心臓に血液を返すを支える筋肉ポンプがあります。ひと疾患へのマウスのデータを変換するとき、これらの制限を考慮する必要があります。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、英国心臓財団 (PG/13/60/30406) およびバーミンガムの大学によって支えられました。
C57BL/6 mice | Charles River | 8 – 10 weeks old, bothe genders | |
Scissors | WPI | 15922 | |
Scissors | WPI | 14003 | |
Dumont 5/45 forceps | FST | 11251-35 | |
7-0 Prolene suture | Ethicon | W8725 | |
6-0 Vicryl suture | Ethicon | W9981 | |
Cotton buds | Spar | ||
Millswabs sterile | Millpledge veterinary | 611950 | |
Drapes | Kruuse | 141765 | |
Glucose Saline-Aqupharm3 | Animal Care | XVD589 | |
Clear H20 HydroGel 98% sterile water | Clearh2o | ||
Buprenorphine | National Veterinary Supplies | ||
Isoflurane vaporizer | General Anaesthetic Services | ||
IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid | National Veterinary Supplies | ||
Sterilizer Steri350 | Inotech | ||
Microscope Olympus SZX10 | Olympus |