تضيق الأجوف فينا أدنى: نموذج موريني تجلط الوريد العميق
Summary
يصف لنا هنا تضيق في الأجوف فينا أقل شأنا كنموذج مورين تجلط الوريد العميق. ويجمل هذا النموذج تقييد تدفق الدم، أحد المشغلات الكبرى تجلط وريدي في البشر.
Abstract
العميق الوريد تجلط الدم (DVT) ولها مضاعفات مدمرة، الانسداد الرئوي، وهي مشكلة صحية خطيرة مع ارتفاع معدل الوفيات. آليات لتكوين خثرة في الأوردة تظل غامضة. انعدام الحركة (مثلاً، بعد عملية جراحية أو الرحلات الطويلة) واحد من العوامل الرئيسية التي تؤدي إلى دفت. الفيزيولوجية المرضية نتيجة للافتقار إلى التنقل من ركود تدفق الدم في الصمامات الوريدية. هنا، هو وصف نموذج الذي يحاكي هذا اضطراب التدفق كعامل تخثر القيادة. في هذا النموذج، يتم إنشاء قيد التدفق الجزئي (تضيق) في الأجوف فينا أدنى (IVC). ويؤدي إغلاق حوالي 90% من التجويف IVC ح 48 تنمية الجلطات هيكلياً مشابهة لتلك الموجودة في البشر. أوجه التشابه: ط) أكثر من حجم خثرة الأحمر، أي، يتكون من خلايا الدم الحمراء وفيبرينوجين، ثانيا) وجود جزء أبيض (خطوط زان)، ثالثا) غير-تجريد أحادي الطبقة غشائي ومستويات البلازما رابعا) مرتفعة د-ديمر، والخامس) إمكانية لمنع تجلط الدم من الهيبارين منخفض الوزن الجزيئي. وتشمل القيود حجم متغير من الجلطات، والحقيقة أن نسبة مئوية معينة من الفئران البرية من نوع (0-35%) قد لا تنتج من خثرة. بالإضافة إلى الملاحظة البصرية والقياس، قد تصور الجلطات بالتكنولوجيات غير الغازية، مثل الموجات فوق الصوتية، مما يسمح بمراقبة ديناميات التنمية خثرة. في نقاط زمنية أقصر (ح 1-6)، يمكن تطبيق الفحص المجهري إينترافيتال لمراقبة مباشرة الأحداث (مثلاً، تجنيد الخلايا لجدار الوعاء الدموي) السابقة لتكوين خثرة. استخدام هذا الأسلوب من عدة فرق العالم جعلت من الممكن الكشف عن الآليات الأساسية لبدء دفت وتحديد الأهداف المحتملة التي قد تكون مفيدة للوقاية منه.
Introduction
تجلط الأوردة العميقة (DVT) هو تطوير الجلطات في الأوردة العميقة، عادة (ولكن ليس فقط) في الساقين. في أدوات العطف مع الانسداد الرئوي (PE؛ عينت معا “الجلطات الوريدية”، إعطاؤهم) فإنه يطور في الأمريكيين 900,000 تقريبا سنوياً ويمثل قضية صحية خطيرة ومشكلة اقتصادية1،2. PE، مضاعفات دفت، يحدث عندما يحصل فصل من موقعة أولية خثرة ويصل إلى الرئتين، مما قد يسبب قصور في التنفس والموت. أن حصيلة إعطاؤهم يتجاوز معدل الوفيات الناجمة عن الإيدز، الحوادث الثدي السرطان وحركة المرور، والجمع بين3.
العوامل الرئيسية التي تسبب دفت إلى جانب يعرف الأسباب، مثل السرطان أو الصدمات النفسية، هو انعدام الحراك 4،5. وهذا قد ينتج عن الجراحة (خاصة العظام)، والشلل، والرحلات الجوية الطويلة أو لأسباب أخرى. تدفق الدم في الأوردة يعتمد على ضخ العضلات وذلك تدفق نتائج التثبيت أطرافهم في ركود الدم في الصمامات الوريدية، الأمر الذي يؤدي إلى تجلط الدم. وغرض الأسلوب الموصوفة هنا أن الخص هذه الدم تدفق التشويه6،7. يحاكي تقييد التدفق الجزئي في الأجوف فينا أدنى (IVC) الشروط التي تم إنشاؤها في الصمامات الوريدية البشرية والنتائج في تكوين خثرة في هيكل مماثل للجلطات البشرية6. جزء كبير من خثرة الأحمر ويتكون من خلايا الدم الحمراء، فيبرينوجين والتأسيس للصفائح الدموية. وقد الجلطات صغيرة “الجزء الأبيض” أثرت في الصفائح الدموية (الشكل 1)، التي تشبه “خطوط زان” الموصوفة في الجلطات الوريدية البشرية. تحتوي كلا الجزأين لخثرة أيضا8من العَدلات، التي هي من بين الخلايا الأولى يعينون في موقع خثرة المستقبل6،9. العَدلات في الجزء الأحمر طرد الفخاخ خارج الخلية العَدلات (شبكات)، بينما يبدو أن العَدلات في الجزء الأبيض خالية من شبكات8. وعلى نحو مماثل إلى دفت البشرية، يرافق تجلط الدم في الفئران مستويات البلازما مرتفعة د-ديمر (الشكل 2). الهيبارين منخفضة الوزن الجزيئي (انوكسابارين)، المستخدمة للوقاية من جلطات الأوردة العميقة في المرضى، كما يمنع تجلط الدم في الفئران. ميزة هامة من هذا الأسلوب غياب9من تعرية بطانية، التي من سمات البشرية دفت10. هذه الميزة يجعل تضيق IVC نموذج دفت ذات صلة سريرياً أكثر مما كان، على سبيل المثال، تنظيم دورات تعريفية تجلط الدم عن طريق كلوريد الحديد، مما يؤدي إلى تعرية بطانية والتي تتكون الجلطات الغالب من الصفائح الدموية11، 12،13. نموذج ركود تام في IVC هو المفضل من قبل عدة فرق14،،من1516. على النقيض من تضيق، الذي يحتفظ فيه تدفق المتبقية في السفينة، وتطبيق ركود تماما يتوقف التدفق ومما يحد من إمكانية الحصول على المواد التي تدار النظامية إلى موقع تجلط الدم. أيضا، أنه يبدو أن الآليات الأساسية تجلط الدم الناجم عن تضيق وركود مختلفة: تضيق النتائج في تطوير التهاب المحلية (تنشيط البطانة، الإفراج عن بلادي ويبيل الهيئة المحتوى، وتوظيف الخلايا المناعية و الصفائح الدموية لجدار الوعاء الدموي) مما تسبب في “إيمونوثرومبوسيس”،من69،17، بينما يبدو ركود للحث على الأحرى تجلط الدم، على وجه الخصوص، على أساس معامل الأنسجة وتجلط الدم الأخرى و الآليات ذات الصلة فيبرينوليسيس18،،من1920. وبالتالي، تعكس النماذج التي تضيق وركود قليلاً عن مختلف جوانب التنمية خثرة وريدية، على الرغم من أن التأكيد قد تتداخل مع آلياتها. الالكتروليتى IVC النموذجي (EIM) دفت،من21إلى22 الحث خثرة أوككلودينج إلا جزئيا جدار الوعاء. ولذلك، أنها ملائمة لاختبار آثار الإدارة المنهجية للعقاقير المختلفة على نمو خثرة. ومع ذلك، يفترض هذا النموذج، الإخلال بسلامة الجدار IVC (إدراج إبرة) وتنظيم دورات تعريفية تجلط الدم بالتيار الكهربائي مما يجعل أهمية هذه الآلية الفيزيولوجية المرضية على الأقل قابلة للطعن.
Protocol
Representative Results
Discussion
ويرد هنا، على بروتوكول لتضيق IVC، الذي يحاكي تشويه تدفق الدم، عامل المسبّب رئيسي دفت،. تضيق IVC يدفع تنمية الجلطات في 65-100% فئران C57BL/6 ضمن ح 48 و 25-50% من الفئران داخل 2-6 ح6،،من823 (بريل، بيانات غير منشورة، عام 2016). قيداً رئيسيا للأسلوب هو التغير في خثرة حجم24 (الشكل 4)، الذي يتم الاحتفال به بعد (ح 6) قصيرة الأجل وطويلة الأجل (ح 48) IVC تضيق. الأسباب الكامنة وراء هذا التغير (نظراً لأن نفس الشروط، مثل الفاصلة، التخدير إلخ، تستخدم) تظل غامضة ولكن يمكن للمرء أن يتكهن التشريحية أن الاختلافات بين الفئران (مثلاً، عرض IVC وعدد وموقع كل من الجانب والخلف فروع) تكمن وراء هذه الظاهرة. التغير في حجم خثرة يجعل انتشار تجلط الدم (% من الفئران مع خثرة) النتائج الرئيسية. يمكن مقارنة انتشار الجلطة باستخدام جدول للطوارئ واختبار فيشر الضبط. واحدة من التجارب كان استثناء عند خثرة انخفاض حجم مع انتشار الجلطة نفسها بعد أن لوحظ حقن الأجسام المضادة التي تحول دون بودوبلانين 7.
هذا الأسلوب مفيد بشكل خاص عند بدء تجلط وريدي يتم دراستها. أنها تسمح للتحقيق في الأحداث المبكرة في جدار السفينة، مثل تجنيد الخلايا، مما يؤدي في نهاية المطاف إلى تجلط الدم. يمكن تقييم آثار thrombotic برو أو مكافحة المخدرات باستخدام هذا النموذج مع انتشار تجلط الدم يجري قراءات الأولية. تضيق ح 48 ينطبق على تكشف النمط الظاهري لمكافحة الخثاريه، بينما يمكن أن تضيق ح 6 إذا كان المتوقع النمط الظاهري بروثرومبوتيك. يمكن أيضا إجراء التحليل النسيجي خثرة والمحيطة IVC الجدار.
يبقى السؤال عما إذا كانت فروع الجانب ينبغي أن تكون متصلة أو ترك البراءات مفتوحة. وقد أظهرت مجموعة واحدة أن ربط الفروع الجانبية لا يزيد حجم خثرة والموقع من جانب فرع أقرب من 1.5 ملم إلى موقع ربط IVC يخل بشكل كبير خثرة التنمية25. إغلاق فروع جانبية قد حمل إصابة غشائي في نفوسهم وأيضا زيادة وقت الجراحة26. في أيدينا، عدم إغلاق فرع الجانب إلى حد كبير يقلل من انتشار تجلط الدم (وصولاً إلى 10-30% بعد تضيق ح 48؛ بريل، غير منشورة) و لذلك نحن اضطر جميع فروع الجانب المرئي.
ومن الناحية المثالية، ينبغي أن تستخدم عناصر تحكم ليتيرماتي الفئران، حتى على نفس الخلفية ولكن من مصادر مختلفة، قد يؤدي إلى انتشار الجلطة مختلفة قليلاً. إذا كان هو دراسة تأثير دفت نفسها على أية معلمات (على سبيل المثال، الكيمياء الحيوية)، ينبغي استخدام الحيوانات تعمل بالشام. تعمل الشام الفئران الخضوع لنفس الإجراء ولكن حرف مزدوج حول IVC يتم إغلاق فضفاضة وبقي هناك دون إنتاج تضيق.
الخطأ الأكثر شيوعاً (خطوة حاسمة) في هذا البروتوكول هو محاولة لفصل الشريان الاورطي و IVC عدم التحديد في الزاوية بين السفن ولكن أقل قليلاً، الذي عادة ما ينتج النزيف. عند حدوث نزيف الانتعاش الجيد للماوس يصبح من غير المحتمل وينصح بالتوقف عن التجربة و euthanize الحيوان. عادة، الفئران استرداد جيدا، والتحرك داخل القفص ولا تفقد الوزن إلى حد كبير. ونحن نوصي باستخدام الفئران أعلاه 20 غرام لكل من الذكور والإناث وإبقاء الحيوانات (خاصة الذكور) في أقفاص فردية بعد الجراحة حتى نهاية التجربة لتجنب القتال والإصابة. وقد أفيد في نموذج (كهربائياً) آخر من دفت أن الفئران الذكور تنتج الجلطات أكبر من الإناث27. لم يكشف تحليل للبيانات المتوفرة لدينا عن اختلاف كبير في انتشار تجلط الدم بين الفئران الذكور والإناث (بريل، غير منشورة). ولذلك، الباحثون مدعوون إلى القيام بتجارب باستخدام نموذج IVC تضيق على الفئران من كلا الجنسين.
انهيار خياطة الجروح و/أو المواد الغذائية الأساسية قد لا يمكن استبعاد تجارب طويلة خاصة في (في الأسبوع وأطول). وهكذا، ينبغي التحقق من الفئران على الأقل مرتين في يوم على وجه التحديد لسلامة خياطة وينبغي إيلاء اهتمام خاص لظهور آثار الدم على الفراش القفص.
تجدر الإشارة إلى أنه، مثل أي نموذج حيوانية أخرى، قد تضيق IVC حدودها من حيث الترجمة إلى البشر. على سبيل المثال، لا تملك إيفكس مورين الصمامات، بينما يطور دفت البشرية داخل الصمامات الوريدية. أيضا، أن البشر لديهم اتجاه العمود الفقري عمودي مع المضخة العضلية يجري إليه هامة تسارع تدفق دم في الأوردة. وفي المقابل، لدى الفئران الاتجاه الأفقي في اتجاه العمود الفقري مع أي دور لضخ العضلات في دعم الدم العائد إلى القلب. ينبغي النظر في هذه القيود عند ترجمة البيانات الماوس إلى الأمراض التي تصيب البشر.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
كان يؤيد هذا العمل من مؤسسة القلب البريطانية (جزء من الغرام/13/60/30406) وجامعة برمنغهام.
Materials
| C57BL/6 mice | Charles River | 8 – 10 weeks old, bothe genders | |
| Scissors | WPI | 15922 | |
| Scissors | WPI | 14003 | |
| Dumont 5/45 forceps | FST | 11251-35 | |
| 7-0 Prolene suture | Ethicon | W8725 | |
| 6-0 Vicryl suture | Ethicon | W9981 | |
| Cotton buds | Spar | ||
| Millswabs sterile | Millpledge veterinary | 611950 | |
| Drapes | Kruuse | 141765 | |
| Glucose Saline-Aqupharm3 | Animal Care | XVD589 | |
| Clear H20 HydroGel 98% sterile water | Clearh2o | ||
| Buprenorphine | National Veterinary Supplies | ||
| Isoflurane vaporizer | General Anaesthetic Services | ||
| IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid | National Veterinary Supplies | ||
| Sterilizer Steri350 | Inotech | ||
| Microscope Olympus SZX10 | Olympus |
References
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).
- Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009). Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).
- House of Commons Health Care Committee. The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients. The House of Commons. , (2005).
- Kuipers, S., et al. Travel and venous thrombosis: a systematic review. J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).
- Lopez, J. A., Chen, J. Pathophysiology of venous thrombosis. Thromb Res. 123, 30-34 (2009).
- Brill, A., et al. von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models. Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).
- Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis. Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).
- Brill, A., et al. Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).
- von Bruhl, M. L., et al. Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo. J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).
- Sevitt, S. The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins. J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).
- Witsch, T., et al. A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis. J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).
- Shaya, S. A., et al. Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism. J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).
- Ni, H., et al. Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen. J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).
- Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis. J Vis Exp. (52), (2011).
- Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
- Siefert, S. A., et al. Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice. J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).
- Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis. J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).
- Day, S. M., et al. Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall. Blood. 105 (1), 192-198 (2005).
- Diaz, J. A., et al. Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis. J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).
- Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).
- Diaz, J. A., et al. Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis. J Vis Exp. (53), e2737 (2011).
- Diaz, J. A., et al. The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse. Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).
- Brill, A., et al. Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).
- Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
- Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
- Geddings, J., et al. Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH. J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).
- Alvarado, C. M., et al. Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis. Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).
