Beoordeling van antilichaam gebaseerde Drugs gevolgen voor lymfkliertest beenmerg en peritoneale Macrophage activering

Macrofagen zijn ingeboren immune cellen, die meerdere rollen in de immuunrespons op infectie of verwonding spelen. Macrofagen zijn verantwoordelijk voor het initiëren van een immuunrespons op infectie of weefsel schade, stoppen de ontstekingsreactie, en bevordering van de helende reactie¹. Voorbeelden van de best bestudeerde macrofaag activering statussen zijn: 1) macrofagen, behandeld met interferon gamma (IFNγ) en bacteriële lipopolysaccharide (LPS), M (IFNγ + LPS), aangewezen die bijdragen tot de inflammatoire respons; 2) macrofagen gestimuleerd met Interleukine (IL-4), 4 M(IL-4), die geassocieerd met de helende reactie worden; 3) macrofagen gestimuleerd met immuuncomplexen (IC) en LP’s, M (IC + LPS), die de mogelijkheid hebben om het uitschakelen van de ontstekingsreactie^2,3. M (IC + LPS) onderscheiden van M(IL-4) wond genezing van macrofagen, en doen niet uiten het arginase enzym (Arg-1) of de FIZZ1⁴. De beste teller voor deze anti-inflammatoire macrofagen is hun cytokine productie⁵. Macrofagen hebben meerdere rollen bij het handhaven van de gezondheid, maar ook bijdragen tot inflammatoire ziekten en kanker³. Hierdoor zijn de macrofagen een belangrijk therapeutisch doel voor de behandeling van een breed scala van ziekten. Het is belangrijk om te onderzoeken van de effecten van antilichamen op hun activeringsstatus te ontwikkelen macrofaag gebaseerde behandelingen voor ziekte.

Dit document richt zich op het gebruik van lymfkliertest beenmerg afgeleid macrofagen (BMDMs) en peritoneale macrofagen voor het testen van het effect van antilichaam drugs op inflammatoire reacties in vitro en in vivo. Onlangs, zijn er meerdere studies waaruit blijkt van de effecten van antilichamen macrofaag activering^6,7,en⁸. Macrofagen mede geactiveerd met immuuncomplexen, die antilichamen complexvorm met een antigeen, en LP’s, een normaal inflammatoire prikkel, produceren zeer hoge niveaus van anti-inflammatoire cytokine, IL-10, en zeer lage niveaus van de pro-inflammatoire cytokine, interleukine 12 (IL-12)⁹. In toevoeging, infliximab, een monoclonal antilichaam tegen TNFα, te werken, ten dele door de anti-inflammatoire macrofagen via haar fragment crystallizable (Fc) regio⁷inducerende is gebleken. We hebben gemeld dat IVIg + LPS veroorzaken anti-inflammatoire macrofaag-activering dat is vergelijkbaar met M (IC + LPS), waarin mede gestimuleerde macrofagen produceren grote hoeveelheden van IL-10 en lage bedragen van de pro-inflammatoire cytokine subeenheid interleukine 12 of 23 p40) Il-12/23p40), Interleukine-6 (IL-6) en TNF⁸. IVIg is een drug die bestaat uit polyclonal antilichamen, voornamelijk IgG, die uit het bloed van meer dan 1.000 donoren¹⁰heeft zijn gebundeld. Het wordt gebruikt voor de behandeling van een breed scala aan immunologische ziekten, zoals idiopathische trombocytopenische purpura en chronische demyeliniserende polyneuropathie, maar zijn werkingsmechanisme is niet volledig begrepen¹¹. De effecten van antilichaam gebaseerd drugs op macrophage activering kunnen worden geschat aan de hand van de beschreven methoden hierin.

De effecten van specifieke biologics op macrophage activering kunnen worden getest in BMDMs en peritoneale macrofagen. Met deze macrofaag-bronnen kunt beoordeling van primaire cellen. Voorbereidende tests van antilichamen op gekweekte primaire cellen vergt minder tijd en monetaire investeringen dan andere modellen tijdrovend en duur ziekte. Door het injecteren van een geneesmiddel in een gezonde muis in vivo, en isoleren van de cellen en analyseren ze ex vivo, kan men bepalen als studies om te beoordelen of de behandeling met biologics is van invloed op macrophage activering in ziekte modellen zijn gerechtvaardigd.

Met weinig studies die het effect van biologische therapieën op macrophage activering in vitro en in vivo direct testen, bieden onze technieken een voordeel ten opzichte van alternatieve technieken. Huidige technieken betrekken testen biologische drug effecten op gemengde cel populaties in vitro, zoals het effect van infliximab in een gemengde lymfocyt reactie (MLR) of IVIg op menselijke macrofagen in perifere bloed mononucleaire cellen, waar het effect niet kan worden toegeschreven aan een bepaalde cel type^7,12. Met behulp van BMDMs en peritoneale macrofagen is gunstig over het gebruik van cellijnen, zoals RAW264.7 cellen, die niet de pro-inflammatoire cytokine produceren, IL-12, in reactie op LPS^8,13. Testen van het effect van een antilichaam gebaseerde drug op macrophage reacties ex vivo heeft voordelen omdat cytokine reacties kunnen rechtstreeks worden toegeschreven aan macrofagen, in plaats van macrophage reacties afgeleid door het meten van serum cytokine niveaus¹⁴ . BMDMs en peritoneale macrofagen kunnen worden afgeleid en geïsoleerd van genetisch gemodificeerde muizen om te bepalen van de specifieke rol van een proteïne in anti-inflammatoire macrofaag activering. Bijvoorbeeld, hebben we gebruikt Il10 gebrekkige(- / –) BMDMs om aan te tonen dat IVIg-geïnduceerde vermindering van pro-inflammatoire cytokine productie gedeeltelijk afhankelijk van IL-10,^{8 is}. Van een drug werkingsmechanisme kan worden onderzocht gebruikend het westelijke bevlekken, waar de rol van specifieke proteïnen en signalering gebeurtenissen kan worden bepaald. Kwantitatieve polymerase-kettingreactie (qPCR) kunnen worden uitgevoerd op BMDMs of peritoneale macrofagen weer te geven van de patronen van de genexpressie die uit een antilichaam activering voortvloeien. Modellen van de ziekte in muizen kunnen informatie geven over de mogelijke werkzaamheid van antilichaam gebaseerde biologische therapieën in modellen voor ziekten zoals inflammatory bowel disease, reumatoïde artritis en kanker^{15,16, 17}. de hier beschreven technieken zal echter informatie verschaffen over het werkingsmechanisme van deze biologics door te bepalen of ze anti-inflammatoire macrofaag activiteit veroorzaken.