İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ve dış saç hücre bütün hücreli yama kelepçe kayıt Doğum sonrası sıçanlarda
Summary
Bu iletişim kuralı İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi postnatal fare pups üzerinden kaydetmek için yöntemler açıklanır. Dış saç hücreleri fonksiyonel gelişimi incelemek için tüm hücreli yama kelepçe dış saç hücreleri izole kayıt deneysel işlemin adım adım açıklanmıştır.
Abstract
Dış saç hücre duyu saç hücreleri memeli koklea içinde iki tür biridir. Onlar kendi cep uzunluğu reseptör alt düzey ses sinyalinin zayıf titreşim yükseltmek için potansiyel ile değiştirin. Morfoloji ve dış saç hücrelerinin (OHCs) elektrofizyolojik özelliği erken postnatal yaşlarda geliştirmek. Dış saç hücre olgunlaşma işitme sisteminin gelişimine katkıda bulunabilir. Ancak, OHCs geliştirme sürecinin de incelenmiştir değil. Bunun nedeni kısmen zorluk işlevlerine elektrofizyolojik bir yaklaşım tarafından ölçmek için olmasıdır. Yukarıdaki sorunu gidermek için basit bir yöntem geliştirmek amacı ile burada biz OHCs işlevinde akut Disosiye koklea postnatal fareler üzerinden çalışmak için adım adım bir protokol tanımlamak. Bu yöntemle, saf ton uyaranlara koklear yanıtı değerlendirmek ve ifade düzey ve OHCs motor protein prestin işlevini inceleyin. Bu yöntem aynı zamanda iç saç hücreleri (IHCs) araştırmak için kullanılabilir.
Introduction
Koklear duyu saç hücreleri iki farklı işlevi memeli işitme için önemlidir: mechanoelectric iletim (MET) ve electromotility1,2. Saç demeti, IHCs (IHCs) ve OHCs dönüştürmek ses titreşim membran olası değişiklikleri içine yanı sıra içinde elektrik sinyallerini innervated sarmal ganglion nöronların bulunan MET kanalları tarafından. OHCs onların hücre membran potansiyeli ile değiştirmek ve düşük seviyeli Ses titreşimi yükseltmek. Electromotility olarak adlandırdığı bu faaliyet OHCs3lateral duvarında bulunan motor protein prestin tarafından türetilmiştir.
Kemirgenler de dahil olmak üzere birçok tür, işitme fonksiyonu erken postnatal dönem4,5‘ te olgunlaşmamış. Hiç aksiyon potansiyeli seda cevaben önce işitme başlangıçlı6,7işitsel korteks tespit edilemedi. Morfoloji gelişimi ve koklea fonksiyonu, yaygın olarak fare, fare ve sıçan4,5,8çalışılmıştır. Mechanotransduction ve electromotility saç hücrelerinin de erken gelişmiştir hayat dönemi5.
Fareler işitme duyarlılığını farklı postnatal yaş değerlendirmek için fare pups içinde kayıt İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (ABR) için bir yöntem geliştirdi. Bütün hücre yama kelepçe OHCs electrophysiologically araştırmak için ideal bir teknolojidir. Ancak, sinir hücreleri ve diğer epitelyal hücreler yıllarındaki yama kelepçe ile karşılaştırıldığında, tüm hücreli sızdırmazlık oranı düşük izole OHCs electromotility incelenmesi sınırlı.
Burada OHCs morfolojik ve electrophysiologically Doğum sonrası fareler gelen akut Disosiye koklea içinde araştırmak için bir yordam açıklanmaktadır. Bu yöntem iç saç hücre gelişimi ve işlev düzenleyen moleküler mekanizmaları incelemek için değiştirilebilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Rat 11 gün genç, yanıt olarak ses stimülasyon yok Aksiyon potansiyeli işitsel korteks6,7‘ gözlenen. Bu nedenle, postnatal gün 11 “işitme başlangıçlı”10tanımlanır. İşitme başlangıçlı henüz de incelenmiştir değil önce işitme fonksiyonu geliştirilmesi. Benzer yöntem yetişkin ABR kaydı için kullanarak, biz saf ton veri bloğu fare pups P11 genç dan tarafından ABR’ler elde edildi göstermek (…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser hibe 973 programı (2014CB943002) ve Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (11534013, 31500841) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Anesthetic | |||
| Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | 1.5% in water |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dissection solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| Collagenase IV | Sigma | C5138 | 2 mg/mL in L-15 |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Immunostaining solutions | |||
| PBS | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | PH 7.3 |
| Paraformaldehyde | Sigma | 158127 | 4% in PBS |
| Triton X-100 | Amresco | ZS-0694 | 0.3% in PBS |
| Normal goat serum | Thermo Fisher Scientific | 10000C | 10% in PBS |
| prestin antibody | Santa Cruz | SC-22694 | dil 1:200 |
| Alexa Fluor 488-conjugated antibody | Thermo Fisher Scientific | A-11055 | dil 1:600 |
| Phalloidin-Tetramethylrhodamine B isothiocyanate | Sigma | P1951 | dil 1:200 |
| DAPI | Solarbio | C0060 | dil 1:20 |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Extracellular solution | |||
| Leiboviz's L-15 Medium | Life Technologies | 41300-039 | 1 pack in 1 L water |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Intracellular solution | |||
| CsCl | Sigma | 7647-17-8 | 140 mM |
| MgCl2 | Sigma | 7791-18-6 | 2 mM |
| EGTA | Sigma | 67-42-5 | 10 mM |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | 10 mM |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Osmometer | Gonotec | OSMOMAT 3000 basic | |
| Forcep | WPI | 14095 | Tweezers dumont |
| Micropipette puller | Sutter Instrument | MODLE-P97 | |
| Micro Forge | Narishigen | MF-830 | |
| Mini Operating System | Sutter Instrument | MP-285 | |
| MultiClamp | Axon | 700B | |
| Low-Noise Data Acquisition System | Axon | 1440A | |
| ES1 speaker | Tucker-Davis Technologies | ||
| TDT system 3 | Tucker-Davis Technologies | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Software | |||
| SigGenRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| BioSigRP software | Tucker-Davis Technologies | ||
| jClamp | Scientific Solutions | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal | |||
| SD rat | Experimental Animal Center of Southern Medical University |
References
- He, D. Z., Zheng, J., Kalinec, F., Sacchi Kakehata, S. S. a. n. t. o. s. -., J, Tuning in to the amazing outer hair cell: membrane wizardry with a twist and shout. J Membr Biol. 209, 119-134 (2006).
- Dallos, P. Cochlear amplification, outer hair cells and prestin. Curr Opin Neurobiol. 18, 370-376 (2008).
- Zheng, J., et al. Prestin is the motor protein of cochlear outer hair cells. Nature. 405, 149-155 (2000).
- Abe, T., et al. Developmental expression of the outer hair cell motor prestin in the mouse. J Membr Biol. 215, 49-56 (2007).
- Waguespack, J., Salles, F. T., Kachar, B., Ricci, A. J. Stepwise morphological and functional maturation of mechanotransduction in rat outer hair cells. J Neurosci. 27, 13890-13902 (2007).
- Zhang, L. I., Bao, S., Merzenich, M. M. Persistent and specific influences of early acoustic environments on primary auditory cortex. Nat Neurosci. 4, 1123 (2001).
- De, V. -. S. E., Chang, E. F., Bao, S., Merzenich, M. M. Critical period window for spectral tuning defined in the primary auditory cortex (A1) in the rat. J Neurosci. 27, 180-189 (2007).
- He, D. Z., Evans, B. N., Dallos, P. First appearance and development of electromotility in neonatal gerbil outer hair cells. Hearing Res. 78, 77-90 (1994).
- Hang, J., et al. Synchronized Progression of Prestin Expression and Auditory Brainstem Response during Postnatal Development in Rats. Neural Plast. , 4545826 (2016).
- Ehret, G. Development of absolute auditory thresholds in the house mouse (Mus musculus). J Am Audiol Soc. 1, 179-184 (1976).
- Møller, A. R. . Hearing:anatomy, physiology, and disorders of the auditory system. , (2006).
- He, D. Z., Zheng, J., Edge, R., Dallos, P. Isolation of cochlear inner hair cells. Hearing Res. 145, 156-160 (2000).
- Tang, J., Pecka, J. L., Tan, X., Beisel, K. W., He, D. Z. Z. Engineered Pendrin Protein, an Anion Transporter and Molecular Motor. J Biological Chem. 286, 31014-31021 (2011).
- Fu, M., et al. The Effects of Urethane on Rat Outer Hair Cells. Neural Plast. 2016, 1-11 (2016).
