ここで喀痰誘発の手法について述べる。このプロトコルは、喀痰処理差分セル数を数えるために、喀痰培養上清を収集するために、さらなる分析のための細胞にも説明します。
喀痰誘発と処理の手法はコレクション、喘息、慢性閉塞性肺疾患 (COPD) のような様々 な呼吸器疾患における興味深いである気道からの細胞の分析を許可する認められた非侵襲的な方法慢性の咳、または特発性肺線維症。この手法はよく容認、安全かつ非侵襲的、技術的に困難、時間のかかるは、訓練を受けたスタッフが必要ですので、臨床研究サービスおよび専門センターに現在限定は。喀痰誘発の解析成功率は約 80% です。
ここでは、喀痰の誘導および実験室の処理について述べる.サルブタ モールと高張または等張生理食塩水の吸入による喀痰。処理全体痰テクニックを使用します。ジチオトレイトール (DTT) は、喀痰の孟を許可する使用されます。喀痰処理の主な目的は、気道の内腔内にあるセル型を研究する差分セル数を取得することです。追加の分析は、喀痰培養上清中の炎症性プロセスや免疫機構に調査を進めることがありますの喀痰細胞も実行可能性があります。喀痰培養上清中メディエーターを勉強し、フローサイトメトリー、ゲノミクス、プロテオミクスなどの喀痰細胞の解析の大きいスペクトルを実行するがあります。
最後に、健常者、喘息、COPD 患者の喀痰分析の代表の結果が掲載されています。
気道炎症を調べるにいくつかの方法を使用: 直接測定 (気管支生検、気管支肺胞洗浄など) と間接法 (症状評価のような血液サンプルの分析および肺機能検査)1。直接テクニック確実に気道炎症を評価するという利点がありますが、侵襲と不可能で大規模な患者の不快感のため、リスク発生1。間接法としては不十分な気道炎症1の直接の評価と相関する彼ら。
喀痰コレクション気道からサンプル細胞に別の方法、気道炎症の直接の評価を可能です。それにもかかわらず、自発的に痰の生産質の悪いサンプルにつながる可能性があります、すべて患者2は不可能します。この問題は、喀痰生産2を誘発する超音波噴霧高張生理食塩水を使用してによって克服されています。このメソッドは、ニューモシスチス ・ カリニ肺炎3の診断用ひと免疫不全ウイルス (HIV) に感染した患者に使われた当初、健常者と喘息患者 1992年4に適応されました。喀痰誘発は等張生理食塩水5を使用してもより深刻な患者で可能であります。一般的に忍容されている生理食塩水の吸入は hyperresponsive 航空5患者の気管支けいれんを引き起こす可能性があります。したがって、手順1の前に短時間作用の β 作動薬を管理することをお勧めします。さらに、我々 は以前超音波ネブライザーで食塩にサルブタ モールを追加することでこのリスク6さらに減少したことを示しています。喀痰誘発の利点は、それは非侵襲的な2 、5のとき適切な安全予防措置です。
喀痰サンプルの処理の 2 つの方法は文献で現在使用されて: 全体痰法とプラグの選択7。当研究室全体痰法が行われます。喀痰処理の主な目的は、炎症気道内腔に存在の種類を研究する差分セル数を取得することです。ただし、多くの追加解析は喀痰培養上清中8で仲介人を研究することによって、または喀痰細胞の詳細な調査を実行することによってさらに炎症性プロセスおよび免疫のメカニズムを調査することも (など、流れ cytometry9セル文化10、ゲノム10、プロテオミクス10、免疫細胞化学7の in situハイブリダイゼーション7、等)
喀痰誘発と分析の手法は、現在は技術的に困難な時間のかかる、1訓練を受けたスタッフが必要ですのでサービス、臨床専門センターを研究に限定されます。気道の炎症は、喘息、慢性閉塞性肺疾患 (COPD)、慢性の咳、または特発性肺線維症11のような様々 な呼吸器疾患のためこの方法で調査されるかもしれない。
誘発喀痰法は、気道のコンパートメントを勉強する役に立つツールです。この手法のいくつかの用途があります。最初に、それは免疫細胞と様々 な呼吸器疾患に関与するメカニズムについての知識が向上します。たとえば、この方法は、患者の大規模コホートで気道炎症の調査を許可している、喘息患者の約半分が、気道の異常好酸球性炎症15,によって特徴付けられることが示されています。16,17, COPD 患者は通常発生した喀痰中の好中球を展示中は、18 をカウントします。この手法は、特発性肺線維症患者における気道炎症のより良い評価してこの病19に貢献するかもしれない証拠調停にも貢献しています。第二に、誘発喀痰法は治療への反応を予測する役に立つかもしれません。たとえば、喀痰中好酸球の割合が異常の存在はステロイド反応性11,18の予測マーカーに示されています。喘息や COPD、11 現在臨床ガイドラインに従って治療を調整するよりも増悪の減少に効果的であることが示された喀痰中好酸球の割合を正規化するコルチコステロイドの投与量を調整 ,20,21。第三に、喀痰分析はターゲットを絞った治療法の開発に役立つことがあります。たとえば、COPD と気管支喘息患者の喀痰中好中球の異常な数の存在は、antineutrophilic 治療11の開発につながっています。第四に、技術は、診断で役割を果たす可能性があります。たとえば、喀痰中好酸球の存在は非喘息好酸球性気管支炎11の診断をする必要です。
差動細胞数を取得するには、ほか喀痰を誘導する手法は、喀痰培養上清または喀痰細胞を研究することによって多くの追加解析のパフォーマンスもことができます。喀痰培養上清中のメディエーター8,19,22の分析と好酸球22サンプルの遊走活性の評価があります。喀痰細胞から RNA を抽出してマイクロ Rna を使用できるまたは遺伝子発現解析19,23 。喀痰細胞は、とりわけ、診療とセルを並べ替えできる流れ cytometry9,23で分析できます。さらに、喀痰細胞培養10日をすることができ、その伝達物質産生体外測定24をすることができます。それはここでは注目に値する、調停内容がわかること喀痰の培養上清から異なります。確かに、居住者の気道からの分泌物、喀痰細胞培養モデル24に反して、プラズマ滲出喀痰培養上清中メディエーターを影響可能性があります。最後に、免疫細胞化学およびその場で交配も行える喀痰細胞7を使用します。
誘発喀痰法には、いくつかの制限があります。誘導は、医療監督の下で行う必要があります。また、患者に徹底した指示を与えるオペレーターのために不可欠です。他の制限には呼吸努力が必要な協力と患者の健康状態が含まれます。子供でこの技術の可能性について成功と256 歳以上のお子様に安全なだったいくつかの研究を報告しています。上の子のデータ <25, 6 歳に欠けているが、それは喀痰誘発がそれらの子供14で行うことは困難である可能性。技術は、それが技術的に困難な時間のかかる、それは訓練を受けたスタッフ1を必要とするので、サービス、専門センターを研究に制限されています。別の制限は、喀痰誘発と分析の手法は、常に成功すると、読みやすい cytospin26常に得られないことを意味ないです。ただし、成功率は約 80% 患者4,26,27,28,29の異なるコホートでは通常。喀痰細胞数30,31に影響を与えるようだった時代のマッチングについての患者の別のコホートを比較するとき最後に、注意が必要です。同様に、ジェンダーとタバコの習慣などの他のパラメーターは、彼らはまた、喀痰細胞数29,32妨げる可能性があるに一致しなければなりません。患者照合が不可能な年齢、性別、喫煙の有無を考慮する別の方法これらの特性の統計的分析を調整することです。
誘発喀痰法気道生検、気管支肺胞洗浄などから細胞を集めることができる他の技術と比較して単純な安定、安全、再現性、費用効率、および非侵襲的であることの利点があります。これらの利点は大規模で、時間をかけて、繰り返し実行する誘発喀痰法の許可し、気道サンプリングに最適な代替は。Bronchosorption は、気道メディエーター33を査定するために粘膜内層流体のコレクションを許可する別の手法です。このテクニック (必要とする気管支鏡検査) は誘発喀痰検査法よりも、唾液で汚染を回避し、気管支肺胞洗浄33より仲介人の高い濃度を得ることの利点があります。
重要なステップには、プロトコルでは注意が必要。最初に、これらの 2 つのパラメーターが結果に影響を与える標準化された34,35になっているために、生理食塩水の濃度および、誘導時間をに関する注意を取られなければなりません。第二に、DTT の孟は処理の重要なステップです。PBS と比較してより喀痰細胞7スライド、cytopsin、品質が向上し、再現可能なセルの数2を持つことが不可欠ですを分散させる DTT を示した。ただし、粘液溶解剤は、生化学成分の測定を妨げる可能性があります。実験をスパイクは、新しい生化学的化合物36を測定するときに、実行する必要があります。最後に、プロシージャのもう一つの重要なステップは信頼性と解釈できる結果を確保するための訓練を受けた技術者が行う必要があるステップを数えるセルです。
全体の痰ではなく喀痰プラグ (粘性や密度の高いパーツ) を使用して別の方法は文献7に説明されています。両方の技術の長所と短所があります。全体喀痰手法によりより迅速な処理7が、頻繁にサンプルを希釈し、cytospins2,7の質を減らすことができます唾液で汚染されています。プラグ選択手法でサンプルが cytospin スライド7流体相のメディエーターの投与のためのより良い品質の多いことを意味する唾液の汚染は低減されます。処理はしかし長く7と選択したプラグは、サンプル全体の37の代表できない場合があります。またすべてのサンプルを含むプラグ、制限することができますは注目に値するです。両方のメソッドは、検証と再現と両方これらのメソッドから取得した差分のセル数が異なる14,38だという証拠がないです。
将来は、誘発喀痰検査法を臨床ツールとして使用して、調査、診断、および炎症性呼吸器疾患のすべての種類の管理のためのバイオ マーカーを提供する可能性があります。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、リエージュ大学病院 (チュー リエージュ) によって支えられました。我々 はビデオ生産のための「瞬間プロダクション」を認めます。我々 はまた、セドリック フランソワ、映画に登場した患者を認めます。
Spirometer – Spirobank | MIR France | ||
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