الأحماض الدهنية المشبعة الحث على موت الخلايا المرتبطة السيراميد بلعم
Summary
نحن توضيح طريقة مستقيم إلى الأمام لاشتقاق مورين الضامة الأولية من خلايا نخاع العظام ويرتبط طريقة بسيطة لتحضير الأحماض الدهنية جيش صرب البوسنة. ثم نظهر أن الأحماض الدهنية المشبعة يمكن أن يستحث موت الخلايا بلعم، ومثل موت الخلايا يرتبط إيجابيا مع تراكم مستويات السيراميد الخلوية.
Abstract
أعرب الضامة عالية البروتين ملزمة الأحماض الدهنية البشرة والدهنية الأحماض الدهنية ملزمة البروتين. أنها نشاط امتصاص المشبعة والأحماض الدهنية غير المشبعة، والتي قد تلعب دوراً حاسما في تنظيم وظائفهم المناعية. وأظهرت العديد من الدراسات أن الأحماض الدهنية المختلفة، المشبعة أو غير المشبعة، قد تمتلك تأثيرات مختلفة على نمو الخلايا ووظيفتها. ومع ذلك، تختلف النهج المستخدمة لإعداد الأحماض الدهنية، التي قد تؤدي إلى نتائج غير الفسيولوجية. ألبومين المصل، ناقل طبيعي للأحماض الدهنية في الدم المحيطي الثدييات، يوصي بتشكيل المتقارن معقدة مع ملح الصوديوم للأحماض الدهنية دراسة وظيفة الأحماض الدهنية في خلايا الثدييات، وبالتالي تقليل سمية الصابون الأحماض الدهنية. وهكذا، بسيطة وسريعة نسبيا التدفئة وسونيكاتينج أسلوب تطوير والمقدمة هنا لتشكيل المتقارنة الأحماض الدهنية جيش صرب البوسنة. يمكننا وصف بروتوكول باستخدام الأحماض الدهنية المشبعة، لا سيما دهني الأحماض للحث على موت الخلايا الشديدة في الماوس نخاع العظام المستمدة الضامة. كذلك ندلل على أن موت الخلايا المستحثة بالأحماض الدهنية المشبعة يرتبط ارتباطاً إيجابيا بمستويات السيراميد الخلوية المتراكمة. ويمكن تمديد هذا الأسلوب للدراسات المتعلقة بتأثير الأحماض الدهنية في خلايا الثدييات الأخرى.
Introduction
الأحماض الدهنية تلعب دوراً حاسما في استقلاب الطاقة وفي تركيب غشاء فوسفوليبيدات في أنواع مختلفة من الخلايا. وقد الأحماض الدهنية انخفاض معدلي الذوبان مائي. إعداد مناسبة من الأحماض الدهنية ذات أهمية حاسمة لدراسة الوظائف البيولوجية للأحماض الدهنية في خلايا الثدييات. عندما يتم إعداد الأحماض الدهنية مع الإيثانول، الأحماض الدهنية عديدة قد تظهر آثارها السمية الصابون (المنظفات) على غشاء الخلية، حتى في تركيزات منخفضة نسبيا1. كالناقل الطبيعي، الرئيسية للأحماض الدهنية الحرة في المصل، يعتبر الزلال ناقل جيدة للأحماض الدهنية التسليم في المختبر للأحماض الدهنية الدالة فحوصات2،،من34. ومع ذلك، تفاصيل إعداد المتقارن الأحماض الدهنية والزلال عادة لا تتوفر حتى ولو تم نشر العديد من الأوراق البحثية باستخدام الأحماض الدهنية.
أعرب الضامة عالية البروتين ملزمة الأحماض الدهنية البشرة والدهنية الأحماض الدهنية ملزمة البروتين5،6،،من78. أنها نشاط امتصاص المشبعة والأحماض الدهنية غير المشبعة التي قد تنظم على وظائف المناعة. لدراسة تأثير الأحماض الدهنية في الضامة، والخلايا الأخرى، كانت أساليب مختلفة لإعداد الأحماض الدهنية التطبيقية1،،من79. استخدام الأحماض الدهنية مستعدة على نحو ملائم/مصل الزلال يصرف للتحقيق في تأثير الأحماض الدهنية في الدالة بلعم ذا أهمية حاسمة في الحصول على بيانات ذات مغزى بيولوجيا. يمكن أن توفر دراسات بشأن تأثير الأحماض الدهنية في بلعم الدالة المعرفة الأساسية والأهداف العلاجية المحتملة المتعلقة بالأيض الأحماض الدهنية في أمراض تشترك بلعم.
Protocol
Representative Results
Discussion
إعداد الأحماض الدهنية الحل السليم ذات أهمية حاسمة لدراسة الوظيفة البيولوجية للأحماض الدهنية. تحييد الأحماض الدهنية يزيد ذوبانه في محلول مائي. ومع ذلك، أملاح الصوديوم للأحماض الدهنية، وخاصة الأحماض الدهنية المشبعة، لا تزال منخفضة القابلية للذوبان في الماء أو في برنامج تلفزيوني كما لاحظ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
بتأييد هذا العمل جزئيا بأموال بدء جامعة لويزفيل، ويمنح المعهد الوطني للسرطان (بيثيسدا، ماريلاند) R01CA177679، R01CA180986.
Materials
| CPX Ultrasonic Bath | Bransonic | Model 2800 | |
| Sodium palmitate (PA) | Nu-Chek Prep, Inc. | S-1109 | M.W. 278 |
| Sodium stearate (SA) | Nu-Chek Prep, Inc. | S-1111 | M.W. 306 |
| Bovine serum albumin (BSA), fatty acid-free | Fisher Scientific | 9048-46-8 | |
| Mouse macrophage colony stimulating factor (mM-CSF) | Cell Signaling Technology, Inc. | 5228 | |
| RPMI 1640 | VWR International | 71002-878 | |
| Annexin V, Alexa Fluor 488 conjugate | Fisher Scientific | A13201 | |
| 7-AAD | BD Biosciences | 559925 | |
| Monoclonal anti-ceramide antibody (mouse IgM) | Sigma | C8104-50TST | Clone: MID 15B4 |
| Goat Anti-Mouse IgM Antibody, µ chain, FITC conjugate | Sigma | AP128F | |
| Fixation buffer | Biolegend | 420801 | |
| Permeabilization buffer | Ebioscience | 4307693 | |
| Red Blood Cell Lysis Buffer | Sigma | 11814389001 | |
| Annexin V Binding Buffer | BD Biosciences | 556454 | |
| L929 cells | ATCC | CCL-1 | |
| Corning Cell Lifter | Fisher Scientific | 07-200-364 | |
| Note: M.W. is for molecular weight. |
References
- Martins de Lima, T., Cury-Boaventura, M. F., Giannocco, G., Nunes, M. T., Curi, R. Comparative toxicity of fatty acids on a macrophage cell line (J774). Clin Sci (Lond). 111 (5), 307-317 (2006).
- Simard, J. R., Zunszain, P. A., Hamilton, J. A., Curry, S. Location of high and low affinity fatty acid binding sites on human serum albumin revealed by NMR drug-competition analysis. J Mol Biol. 361 (2), 336-351 (2006).
- Penn, A. H., Dubick, M. A., Torres Filho, I. P. Fatty Acid Saturation of Albumin Used in Resuscitation Fluids Modulates Cell Damage in Shock: In Vitro Results Using a Novel Technique to Measure Fatty Acid Binding Capacity. Shock. , (2017).
- Vusse, G. J. Albumin as fatty acid transporter. Drug Metab Pharmacokinet. 24 (4), 300-307 (2009).
- Zhang, Y., et al. Adipose Fatty Acid Binding Protein Promotes Saturated Fatty Acid-Induced Macrophage Cell Death through Enhancing Ceramide Production. J Immunol. 198 (2), 798-807 (2017).
- Zhang, Y., et al. Epidermal Fatty Acid binding protein promotes skin inflammation induced by high-fat diet. Immunity. 42 (5), 953-964 (2015).
- Wen, H., et al. Fatty acid-induced NLRP3-ASC inflammasome activation interferes with insulin signaling. Nat Immunol. 12 (5), 408-415 (2011).
- Zhang, Y., et al. Fatty acid-binding protein E-FABP restricts tumor growth by promoting IFN-beta responses in tumor-associated macrophages. Cancer Res. 74 (11), 2986-2998 (2014).
- Ulloth, J. E., Casiano, C. A., De Leon, M. Palmitic and stearic fatty acids induce caspase-dependent and -independent cell death in nerve growth factor differentiated PC12 cells. J Neurochem. 84 (4), 655-668 (2003).
- Weischenfeldt, J., Porse, B. Bone Marrow-Derived Macrophages (BMM): Isolation and Applications. CSH Protoc. , (2008).
- Dansen, T. B., et al. High-affinity binding of very-long-chain fatty acyl-CoA esters to the peroxisomal non-specific lipid-transfer protein (sterol carrier protein-2). Biochem J. 339 (Pt 1), 193-199 (1999).
- Ulloth, J. E., et al. Characterization of methyl-beta-cyclodextrin toxicity in NGF-differentiated PC12 cell death. Neurotoxicology. 28 (3), 613-621 (2007).
