Biblioteca de péptido superpuestas a epitopos Qa-1 en una proteína

QA-1 pertenece a un grupo de 1b complejo mayor de histocompatibilidad no clásicas moléculas (MHC-Ib) en ratones. Su homólogo humano es HLA-E. Pruebas anteriores se ha demostrado que moléculas de Qa-1 funciones biológicas importantes. En primer lugar, las moléculas Qa-1 juegan un papel importante en la topografía de las células para la integridad estructural y funcional. En este sentido, Qa-1 moléculas han desarrollado varias estrategias para controlar la función normal de una célula. Una estrategia de este tipo permite Qa-1 moléculas para formar complejos con un péptido líder procesados (epitope), es decir, el control de calidad-1 determinante modificador (Qdm) que se procesa de moléculas clásicas de MHC-Ia en el retículo endoplásmico¹. Estos complejos de control de calidad-1/Qdm luego mostrar en la superficie de una célula y enlazar a inhibitorio NKG2A receptores en las células NK para inhibir NK matando a actividad². Si se pierde la expresión de moléculas MHC-Ia, una célula (por ejemplo, un maligno) se vuelve sensible a NK matando a². La otra estrategia permite Qa-1 moléculas formar nuevos complejos de Qa-1/epítopos en la superficie de una célula que es deficiente en grifo (transportador asociado con el procesamiento de antígeno)³ o ERAAP (aminopeptidasa de retículo endoplasmático asociada a procesamiento de antígeno)⁴ (ambas deficiencias a menudo ocurren en las células malignas). La célula que expresa estos nuevos complejos de control de calidad-1/del epítopo puede reconocida y eliminada por la específica del epítopo CD8 restringidas de 1 Qa⁺ T las células. En segundo lugar, las moléculas de Qa-1 inducen regulación inmune⁵. En este sentido, Qa-1/epitopo complejos han demostrado estimular CD8⁺ las células reguladoras T (Treg) que son importantes para la prevención de daño inmune-mediado de uno mismo-tejidos^{6,7,8 ,9,10}. En tercer lugar, CD8 restringidas de 1 Qa⁺ Treg células se ha demostrado que limitar las respuestas inmunes contra infección viral¹¹.

Por lo tanto, el aumento específico de específicos del epítopo CD8 de Qa-1-restrictred⁺ T las células es una estrategia potencialmente prometedora para la eliminación de células anormales, para la mejora de la regulación inmune y para el control de la magnitud de respuesta inmune inducida por virus. Mientras que no se ha determinado si el aumento de específicos del epítopo CD8 restringidas de 1 Qa⁺ T las células pueden mejorar la vigilancia inmune y limitan la respuesta inmune inducida por virus, nuestros laboratorios y otros han demostrado claramente que inmunización con epitopos Qa-1 puede aumentar la función de CD8 restringidas de 1 Qa⁺ Treg células específicos para patógenos autoinmunes CD4⁺ T las células, hasta el eficiente control de CD4⁺ enfermedades autoinmunes mediada por células T en un modelos de variedad de animales tales como encefalomielitis alérgica experimental (un modelo animal de la esclerosis múltiple humana)^6,10, artritis inducida por colágeno (un modelo animal de artritis reumatoide humana)⁷, y diabetes no obesos (un modelo animal de diabetes del tipo 1 humano)⁸. Además, hemos descubierto que la inmunización con un Qa-1 de tejidos específicos del epítopo conduce al control específico de la inflamación mediada inmune en ese tejido a través del aumento de CD8⁺ Treg células¹². Los éxitos anteriores de los estudios preclínicos indican la necesidad de una evaluación completa de las Qa-1 epitopo vacunas para el tratamiento de enfermedades inmune-mediadas tejidos específicos y potencialmente para el tratamiento de otras enfermedades asociadas con deficiencias en el grifo y ERAAP.

En consecuencia, existe una demanda para una tecnología que puede confiablemente y rápidamente analizar epitopos Qa-1 en una proteína. En este sentido, se ha descrito un número limitado de epitopos biológicamente importantes de Qa-1. La mayoría de estos epitopos Qa-1 se identificaron casualmente durante el estudio de CD8⁺ T respuestas a bacterias¹³, las células deficientes en grifo³, las células deficientes en ERAAP⁴y las células que causan EAE^{6, de la célula 9}. Por lo tanto, una técnica de alto rendimiento es deseable para la identificación de los epitopos de Qa-1 biológicamente importante en una proteína definida. A continuación, describimos una estrategia de biblioteca péptido (LPO) superpuestas que epitopos de Qa-1 funcionales en una proteína CD8 Qa-1-resrticted⁺ T cell líneas específicas para el grupo de la OLP (OLP_pool) de una proteína.