Overlappende Peptide bibliotheek Qa-1 Epitopes in een proteïne in kaart

QA-1 behoort tot een groep van niet-klassieke grote histocompatibility complex 1b (MHC-Ib) moleculen in muizen. De menselijke homolog is HLA-E. Vorige bewijs heeft aangetoond dat QA–1 moleculen belangrijke biologische functies hebben. Ten eerste, QA–1 moleculen spelen een belangrijke rol in de landmeetkunde cellen voor structurele en functionele integriteit. In dit verband QA–1 moleculen geëvolueerd verschillende strategieën voor het controleren van de normale functie van een cel. Een dergelijke strategie kunt QA–1 moleculen naar formulier complexen met een verwerkte leider peptide (epitope), dat wil zeggen de Qa-1 determinant modifier (Qdm) dat is verwerkt uit klassieke MHC-Ia moleculen in het endoplasmatisch reticulum-¹. Deze QA–1/Qdm complexen later weer op het oppervlak van een cel en een binding met remmende NKG2A receptoren op NK-cellen voor de remming van de NK activiteit²doden. Als de expressie van MHC-Ia moleculen verbroken wordt, wordt een cel (bijvoorbeeld een kwaadaardige cel) gevoelig voor NK doden². De andere strategie mogelijk maakt QA–1 moleculen te vormen nieuwe QA–1/epitoop complexen op het oppervlak van een cel dat tekortschiet in TAP (vervoerder gekoppeld aan antigeen processing)³ en/of ERAAP (endoplasmatisch reticulum aminopeptidase gekoppeld in⁴ van het antigeen processing) (beide tekortkomingen vaak voorkomen in kwaadaardige cellen). De cel die deze nieuwe QA–1/epitoop complexen uitdrukt kan vervolgens worden herkend en uitgeschakeld door de epitoop-specifieke Qa-1-beperkte CD8⁺ T cellen. Ten tweede, QA–1 moleculen induceren immuunregulatie⁵. In dit verband QA–1/epitoop complexen is aangetoond dat het stimuleren van CD8⁺ regulatoire T (Walter) cellen die belangrijk voor de preventie van immuun-gemedieerde schade van zelf-weefsels^{6,7,8 zijn ,9,10}. Ten derde, Qa-1-beperkte CD8⁺ Treg cellen is aangetoond dat het beperken van de immuunrespons tegen virale infectie¹¹.

Dus, de vergroting van het specifieke van epitoop-specifieke QA–1-restrictred CD8⁺ T cellen is een potentieel veelbelovende strategie voor het wegwerken van abnormale cellen, voor de verhoging van de immuunregulatie, en voor de controle van de omvang van virus-geïnduceerde immuunreacties. Terwijl het is niet vastgesteld of vergroting van epitoop-specifieke Qa-1-beperkte CD8⁺ T cellen kunnen vergroten immuun toezicht en virus-geïnduceerde immuunreacties beperken, onze laboratoria en anderen hebben duidelijk aangetoond dat immunisatie met QA–1 epitopes kan vergroten de functie van Qa-1-beperkte CD8⁺ Treg specifieke cellen voor pathogene auto-immune CD4⁺ T cellen, wat leidt tot efficiënte controle van CD4⁺ T-cel-gemedieerde auto-immune ziekten in een scala aan dierlijke modellen zoals experimentele allergische encefalomyelitis (een dierlijk model van menselijke multiple sclerose)^6,10, collageen-geïnduceerde artritis (een dierlijk model van menselijke reumatoïde artritis)⁷, en nietzwaarlijvige diabetes (een dierlijk model van menselijke type 1 diabetes)⁸. Daarnaast hebben we ontdekt dat immunisatie met een epitoop weefsel-specifieke QA–1 tot een specifiek besturingselement van immuun-gemedieerde ontsteking in dat weefsel door vergroting van CD8 leidt⁺ Treg cellen¹². De bovenstaande successen van preklinische studies geven een behoefte aan een volledige beoordeling van QA–1 epitoop immunisatie voor de behandeling van weefsel-specifieke immuun-gemedieerde aandoeningen en potentieel voor de therapie van andere ziekten in verband met tekortkomingen in de kraan en ERAAP.

Dienovereenkomstig, is er een vraag voor een technologie die betrouwbaar en snel QA–1 epitopes in een eiwit analyseren kan. In dit verband is een beperkt aantal biologisch belangrijke QA–1 epitopes beschreven. De meeste van deze epitopen QA–1 per werden vastgesteld tijdens de studie van CD8⁺ T cel reacties op bacteriën¹³, tekort aan TAP³cellen, tekort aan ERAAP⁴cellen en cellen die EAE^{6veroorzaken, 9}. Daarom is een hoge doorvoer techniek wenselijk voor de identificatie van biologisch belangrijke QA–1 epitopes in een bepaald eiwit. In het volgende, beschrijven we een overlappende peptide (OLP) bibliotheek strategie die kaarten van functionele QA–1 epitopes in een proteïne met behulp van CD8 QA–1-resrticted⁺ T cel lijnen specifiek voor de OLP zwembad (OLP_pool) van een eiwit.