פרוטוקולים מקיפה לדוגמה, מח עצם תהליך למדידת מחלה שיורית מדיד, לוקמיה בתאי גזע לוקמיה מיאלואידית חריפה
Summary
גילוי של מחלה שיורית מינימלית או מדיד (MRD) הוא סמן prognostic חשוב זיקוק הערכת סיכונים, חיזוי relapse ב לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML). אלה מקיף הנחיות והמלצות עם שיטות עבודה מומלצות עבור זיהוי עקבי ומדויק וזיהוי של MRD, עשויים לסייע בקבלת החלטות לטיפול יעיל של AML.
Abstract
התגובה לקריטריונים לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) באחרונה הוקמה מחדש, עם בחינה מורפולוגיות מנוצל כדי לקבוע אם חולים השיגו הפוגה מלאה (CR). בערך כמחצית מהמטופלים המבוגרים שנכנסו CR הדרדר בתוך 12 חודשים עקב המוצלח תאים שיורית AML במח העצם. כימות של אלה שנותרו תאים לוקמיה, המכונה מחלה שיורית מינימלית או מדיד (MRD), יכול להיות סמן חזקים לחיזוי של הישנות האלה. יתר על כן, ניתוח רטרוספקטיבי של מספר מחקרים הראו כי הנוכחות של MRD במח העצם של AML חולים בקורלציה עם הישרדות המסכן. לא רק היא מכלל האוכלוסייה לוקמיה, בא לידי ביטוי על ידי תאים מחסה של לוקמיה הקשורים החיסון-פנוטיפ (LAIP), הקשורים עם התוצאה הקלינית, אבל אז הוא subpopulation ילדותי תדירות נמוכה של תאי גזע לוקמיה (ה-LSC), אשר שניהם יכולים להיות פיקוח באמצעות cytometry זרימה MRD או MRD כמו גישות. הזמינות של מבחני רגישות המאפשרים זיהוי של תאים לויקמיה שיורית (גזע) על סמך תכונות מחלות ספציפיות או הקשורים למחלה (סמנים מולקולריים חריגה או חריגה immunophenotypes) יש שיפור דרסטי MRD הערכה ב- AML. עם זאת, בהתחשב הטרוגניות הגלום והמורכבות של AML כמחלה, שיטות דגימה מח עצם וביצוע ניתוח MRD ואת ה-LSC צריך להיות בהרמוניה כאשר הדבר אפשרי. כתב יד זה שנתאר מתודולוגיה מפורט נאותה מח עצם וביופסיה דגימה, תחבורה, לטעום להערכת cytometry זרימה צבע רב אופטימלית, ועיבוד gating אסטרטגיות כדי להעריך MRD ואת ה-LSC כדי לסייע בקבלת החלטות טיפוליות עבור חולים AML.
Introduction
לוקמיה מיאלואידית חריפה (AML) הוא שגידול ממאיר של מח העצם מאופיין על ידי פגמים בתוכנית ההבשלה, עם התפשטות חריגה, הצטברות של תאים מיאלואידים ובתאים, עיכוב של hematopoiesis נורמלי, ולבסוף, מח עצם כישלון . המחלה היא הטרוגנית מאוד ביחס מורפולוגיה, immunophenotype, ציטוגנטיקה, שיבושים מולקולרית וחתימות ביטוי גנים, כמו גם התגובה טיפול, טיפול תוצאה1,2. ניהול הנוכחי כולל אינדוקציה כימותרפיה במטרה להשיג הפוגה מלאה (CR), ואחריו הפוגה שלאחר הטיפול, אשר במידה רבה מונחה על ידי התוצאות של מולקולרית, cytogenetic, immunophenotypic מחקרים והיא מורכבת גם מספר קורסים של כימותרפיה נוספים או השתלת תא גזע (עצמיים או allogeneic)3. למרות המחירים גבוה הפוגה לאחר כימותרפיה אינטנסיבית של עד 90%, הישרדות 5 שנים אצל מבוגרים היא רק כ 30% – 40%, בעיקר עקב ההתפתחות של ההתקפים אשר הם בדרך כלל עמידים בפני כימותרפיה ובכך מאוד קשה לטפל. התוצאה אצל ילדים הוא טוב יותר, למרות בערך שליש גם נסיגה. לכן, גילוי מוקדם של נסיגה מיידית ימלא של צורך רפואי קליניות, להנחות הפוגה שלאחר טיפול4.
מחלה שיורית לאחר טיפול עשוי לשקף את הסכום של כל האבחון, פוסט-אבחון התנגדות מנגנונים/גורמים; ומכאן המדידה שלו עשוי להיות prognostic פלייבק להדרכת טיפול. האפשרות של defining מחלה שיורית (בעבר נקרא מחלה שיורית מינימלית, המכונה עכשיו מדיד כמו מחלה שיורית או MRD) הרבה מתחת קריטריון מורפולוגי של 5% הפיצוץ תאים משתנה הנוף של הסיכון classification. נכון לעכשיו שתי השיטות המשמשים בעיקר לזיהוי MRD הם לזרום cytometry ומבוססי -מולקולרי המבוסס על, האחרון המוערך על ידי רוורס טרנסקריפטאז PCR (RT-qPCR)5 , או אף בשלב מוקדם מדי, על ידי הדור הבא רצף (הגדרות). מחקרים רבים גם במבוגרים כמו ילדים כבר הוכיחה כי מגוון גישות MRD מספקים מידע prognostic חזק ב- AML הן לאחר אינדוקציה ואיחוד טיפול6,7, הגדרה חדשה של המחלה נטל ( ממונה ההתר מורפולוגי) עכשיו מתגלה8. הדבר מצביע על כי MRD מוערך על ידי זרימה או טכניקות מולקולריות צריך להיות, למעשה כבר נעשים, תקן סטנדרטי בכל ניסוי קליני ב- AML.
כתב יד זה דן ההליך cytometry זרימה מפורט להצטייד איפיון immunophenotypic לשחזור ומדויקים של MRD דגימות מח עצם, כולל מח עצם הדגימה ועיבוד ההליכים שקדמו cytometry זרימה. הזמינות של דגימות מח עצם באיכות טובה-אבחון ומעקב חיוני להצלחה של מדידה זו על פני אתרים קליניים, ניסויים קליניים. למעשה, שיקולים אנליטי מראש אלו הם גם גישות MRD המתודולוגי מולקולרית (PCR ו המיתרים). Immunophenotypic פלואורסנציה MRD, סמנים aberrantly ביטוי בשילוב עם נורמלי מיאלואידית וסמנים קדמון, לזהות לוקמיה-הקשורים immunophenotype (LAIP)9. MRD מודד את התוצאות של גורמים רבים המשפיעים על התגובה לטיפול, כגון עמידות לתרופות לוקמיה מהותי או נרכשות, pharmacodynamics וקינטיקה של טיפול, מעקב המערכת החיסונית תאימות. לכן, MRD הוא אבחון פוסט חזק מאוד prognostic פרמטר המקושר עם התוצאה הקלינית כאשר dichotomized ברמה ניתוק נקבעים על-ידי ניתוח מאפיין הפעלה מקלט (ROC). בשביל עמיתינו AML למבוגרים של HOVON 42 א לומדים, רמת ניתוק מוגדרת ב- 0.1% של כדוריות הדם הלבנות של תאים חיוביים/סה כ LAIP. באמצעות קריטריון זה לקביעת מצב MRD חיובי לעומת שליליים, קבוצה של חולים ניתן לזהות מי יש שכיחות relapse גרוע במידה משמעותית, ללא נסיגה, הכוללת הישרדות6. בנוסף, אנו מתארים את המדידה של תאים הלוקמיה לא בוגר, עמידים בפני התרופה עם תכונות כמו תאי גזע (תאי גזע CD34 + CD38-לוקמיה, או ה-LSC), אשר מציעה מנבא חזק של המטופל התוצאה10. יחד LAIP, ה-LSC ניגש טופס הגישה MRD זרימה cytometric. הגישה LAIP מתאים בערך 90% של החולים, בעוד כ- 80% מהחולים ניתן ליישם את גישת ה-LSC. ביחד מעל 95% מהחולים ניתן להעריך עבור פרמטר אחד או שניהם.
לבסוף, פרסום זה מספק תיאור מפורט מבצעית כדי להעריך MRD מאת cytometry זרימה. זה כולל: 1) משלים ו/או סטנדרטיזציה של תהליכי דגימה מח עצם, הדרכה תחבורה 2) מדגם 3) תיאור מפורט של זיהוי תאים לוקמיה עם FACS באמצעות מספר לוחות נוגדן כולל גישות צינור תא בודד כדי לאפיין את ה-LSC, 4) ההקמה של FACS מכונות למדידות מתוקננת, 5) תוכניות אנליטי עבור MRD מדידות ו- 6) תוכניות אנליטי לצורך זיהוי ה-LSC.
אנו שואפים להראות לכל ההיבטים של ההליך כולל את הכנת הדוגמא מאז לעיתים רחוקות הנדונה עוד זה נושא חשוב עבור האיכות של התוצאה הסופית. שאיבת מח עצם ביופסיה קליניים הליכים המשמשים להערכת התאים hematopoietic בתוך מח העצם בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. אלה מבוצעות יחד עם ספירת דם (CBC) דם. השיטה אופטימלית עבור שאיבת מח עצם חיונית אבחנה מדויקת ומעקב למדידה MRD. בנוסף, וביופסיה מח העצם מוצלח צריך להכיל מספיק תאים כדי לבצע את LAIP ה-LSC זרימה וניתוח (לפחות 10 מיליון תאים קיימא). כאן, אנו מתארים את שיטת ביצוע שאיבת מח עצם ולספק הנחיות, אשר אמור לגרום נאותה תא הדגימה (והגבלת הפוטנציאל של hemodilution) צריך אבחון מדויק ומחקר נוסף. שיקולים אנליטי מראש אלו הם גם גישות MRD המתודולוגי מולקולרית (PCR ו המיתרים). כל דגימות עבור immunophenotyping תעובד מעדיפים בתוך 24 שעות של אוסף. אמנם לא recommendable, מח עצם ודגימות דם היקפיים ניתן עדיין לעבד ולעדכן ניתח כאשר המשכתי עד 72 שעות בטמפרטורת החדר. בנוסף, כל handlings עם החומר צריכה להתבצע בתנאים סטריליים, על מנת לאפשר הקפאה קריוגנית של תאים סטרילי להערכת המחקר/איכות מאוחר יותר ועוד.
Protocol
Representative Results
Discussion
בשפע הנתונים אינם זמינים זה להראות הוכחות חיוביות MRD להיות קשור עם הישרדות עניים, ולכן הערכת MRD עשוי לשפר את התוצאה החולה על-ידי מתן מידע prognostic נוסף שעליו קליניים יכולים לקבל החלטות. לפיכך, עקבית המתואמת שיטה להערכת חיסונית-פנוטיפי של MRD חיונית בסופו של דבר לשפר את הטיפול המטופל. זה גם חשוב בעת השוואת מחקרים קליניים על פני אתרים קליניים שונים, אולי בסופו של דבר לעזרה קלינית החלטה משמש נקודת קצה של קליניים עבור ההישרדות פונדקאית ו… הרעיון כי הנחיות מוצק הם מוצדקת למדידות MRD מדויקים ועקביים הובילה פעולה מתואמת של אירופה לוקמיה רשת (ELN) עיצוב עדכני להנחיות. מסמך מקיף זה יהיה שפורסם מאוחר-2017, וישמש כלי עבור רבים בקבוצות לימוד, מעבדות לנוע קדימה.
שלבים קריטיים בתוך פרוטוקול
היבט חשוב, ולא להתעלם לעתים קרובות של MRD ניתוח הוא ההשפעה של איכות מדגם על קביעה מדויקת של MRD. זה ברור יותר כאשר החומר צריך להיות מועבר אל מוסדות אחרים בניסויים קליניים העולמית, נתן את השיקולים מבצעיים נוספים צריכים להילקח בחשבון על הגדרה זו. כדי להפחית את הסיכון של ערבוב לחולה מידע מהירה ומדויקת של המינהל נאותה דגימות היא קריטית. שוב, בשלב זה של התחבורה הטפסים הנכונים ו/או לייבא לתוך בית החולים אלקטרוניים מערכות עם הקצאות ברורה של ניתוח המבוקש נדרש. וציין הבמה ב הטיפול של MRD הדגימה היא קריטית גם מאז זה עשוי להיות רלוונטי עבור החלטות קליניות (למשל אחרי הקורס השני של טיפול) ואם צריך ולכן להגדיר בבירור. השימוש מעושה נתונים (כמו למשל 1 בינואר בכל שנה הלידה) מגביר את הסיכון של ערבוב חולים או ניתוחים. אם נדרש על פי חוק, צריך לשמש דרך תשוחררנה חלופית של הזדהות.
כל דגימות עבור immunophenotyping תעובד מעדיפים בתוך 24 שעות של אוסף. אמנם לא recommendable, מח עצם ודגימות דם היקפיים ניתן עדיין לעבד ולעדכן ניתח כאשר המשכתי עד 72 שעות בטמפרטורת החדר. בנוסף, כל handlings עם החומר הטוב ביותר ניתן לבצע בתנאים סטריליים, אז הקפאה קריוגנית נוסף של תאים ב- biobanks (מקומי) עודנה רלוונטית: מחקרים קליניים רבים יש ניתוחים נוספים להמשיך לחקור תאים לוקמיה לכבד לתכונות מולקולרית, חיסונית-פנוטיפי ו פונקציונלי שיש לבצע בשלב מאוחר יותר. עם זאת הפרטים של biobanking אינם בתוך הטווח של כתב היד הזה.
באמצעות MRD ככלי אבחון מרמז שהוא צריך מעבדה מוכר, לא רק עבור cytometry זרימה, אלא גם לגבי בקרת איכות של MRD ההערכה. זה עשוי לדרוש חלוקת דוגמאות למעבדות ייחוס ספציפית או (מחדש) ניתוח זרימת קבצים עם המדידות MRD צוותים הפניה.
מאמר זה מתאר את הפעולות החשובות ביותר מאוסף מח עצם וביופסיה להגדרה של MRD בדגימות קליניות – דרישת צוות שלם של מומחים עם משימות מסוימות, אחריות, ועם תכופים תקשורת אפקטיבי אפיון וניתוח. מאז כל פעילות היא גורם מכריע ההליך, מומלץ שיהיה קול לוגיסטיים כולל פרוטוקולים בכל מעבדה, גיבוי כוח אדם אשר הוכשרו במיוחד עבור הפעילות. בנוסף, מאז יש כמה מדרגות סובייקטיבי יחסית בחלק מההליכים (במיוחד LAIP ואת ה-LSC aberrant סמן זיהוי), זה חיוני כדי יש דיונים על התוצאה הסופית על ידי הצוות, ויש הדו ח הסופי מורשה על ידי צוות מפקחים. המאמצים הנוכחיים במרדף אחר פיתוח תוכנה מחשב אשר יסייעו לתקנן את הניתוח MRD (LAIP וה-LSC).
השינוי ופתרון בעיות
בכל מעבדה יכולה לקבל סידרה של נוגדנים יכול לשמש כדי להגדיר את subpopulations שונים למרות שיש עמוד השדרה מתוקננת של סמנים הוא חיוני עבור תוצאות דומות, כפי שמתואר ההנחיות משוכללת ELN MRD מדידות מסמך התייחס לעיל. הממאירות של הסמנים שבחרת יש כמה בעיות זה יכול להקשות על הניתוח של התוצאות צריכים להילקח בחשבון.
מגבלות של הטכניקה
הזיהוי של הביטוי LAIP סמן סוטה ה-LSC קודם מוערך באבחון, מעקב לאורך זמן (במהלך ואחרי הטיפול) עבור אפיון מדויק של פנוטיפ MRD. בעוד מעל 95% מהחולים ניתן להעריך באמצעות LAIP או ה-LSC (או שניהם), עדיין חלק מהחולים יש LAIPs לא מוגדר או לא CD34 + CD38-LSCs או להציג עם תקיעות שלילי CD34, או שיש אבחון חסרים. במקרים אלה, היא עדיין כדאי לנסות ולמדוד MRD עם פאנל של נוגדנים רחב כמו מספר התאים הזמינים מאפשר ולאחר מכן בחר את הכי אמין (ויתור ההבחנה הכי חזק של תאים לוקמיה) LAIP. בהתחשב בעובדה כי שיעור החולים אשר בסופו של דבר נסיגה לא דומים לגמרי immunophenotype את האבחנה, בשל הטרוגניות המחלה AML, מדידת פאנל רחב של נוגדנים-MRD מומלץ בכל מקרה. אלה משמרות immunophenotypic כוללים פיצוץ התאים LSCs הוכחו להתרחש במהלך טיפול16 , המחלה measureable עשויה להתבסס על אוכלוסיות אלה צפויים כביכול. בשלב זה, אולם, לא נקבע אם כל immunophenotypic תת אוכלוסיות יוביל התדרדרות המחלה, לכן לא מקובל לדווח MRD המותאמים-טיפול המבוסס על תאים אלה בניסויים קליניים. חשוב לציין כי הסיכון של חסר ה-LSC בשל האוכלוסייה משמרות הוא מופחת על ידי הגישה שפופרת אחת שבה הם הסימנים המכונן החשוב ביותר aberrancy של cytometry זרימה אחד (PE) ערוץ14.
משמעות לגבי שיטות קיימות
השיטה המתוארת ב פרוטוקול זה מסתמך על ההגדרה של LAIPs אחד או יותר, אילו תאים עוקבים במהלך הטיפול. החיסרון של שיטה זו הוא כי לאחרונה הוכח כי LAIP עשויים להשתנות במהלך הטיפול. בדרך זו שכמה אוכלוסיות הקרובה עם סמנים aberrant שונים עשויים לפספס. כדי לעקוף את זה, זה יהיה הכי טוב למדוד את כל הסמנים aberrant במקום רק לאלה שנמצאו אבחון. ואז זה יהיה דומה לגישה “שונה מן הרגיל” המשמש מעבדות מספר17.
יישומים עתידיים
לאחרונה, MRD קיבלה תשומת לב נוספת עבור עיצוב חדשניים של ניסיון קליני. בעידן של אפשרויות טיפול מיוחדים, טיפול תרופתי ממוקד, השימוש של MRD כאמצעי התוצאה יהיה להפחית את הזמן הדרוש ליצירת היעילות הקלינית של טיפולים חדשניים, בסופו של דבר המאפשר היכרות מהירה יותר של צורך דחוף טיפולית אפשרויות למרפאה. המשמעות של לוגיסטיקה המתאים וביצוע מעשי של הערכה MRD harmonized מכריעים להצלחת הטיפול העתידי AML כמו ה-FDA בודקת כעת את הכדאיות של שימוש MRD נקודת קצה של הפונדקאית במקום ההישרדות מודד18.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה היא נתמכה על ידי החברה לסרטן הולנדי (2013 הפאק הלאומי-6371) וקרן Egbers עבור VONK. אנו מודים קבוצת העבודה AML הולנדי-MRD בזכות שיתוף הפעולה ועל דיונים פוריים שיפור מתמשך, סטנדרטיזציה של AML-MRD.
Materials
| BD Biosciences | 120995496,060996589 and 013729 | FACS Canto II | |
| BD Biosciences | 555360 | CD7 FITC | |
| DAKO | F076701 | CD2 FITC | |
| Sanquin | M1613 | CD36 FITC | |
| BD Biosciences | 332778 | CD15 FITC | |
| BD Biosciences | 335039 | CD45RA FITC | |
| BD Biosciences | 345810 | CD56 PE | |
| BD Biosciences | 337899 | CD22 PE | |
| BD Biosciences | 345785 | CD14 PE | |
| Miltenyi Biotec | 130-080-801 | CD133 PE | |
| BD Biosciences | 562566 | Clec12a PE | |
| BD Biosciences | 565568 | Tim-3 PE | |
| BD Biosciences | 332774 | CD7 PE | |
| BD Biosciences | 333142 | CD11b PE | |
| BD Biosciences | 337899 | CD22 PE | |
| BD Biosciences | 345810 | CD56 PE | |
| BD Biosciences | 347222 | CD34 PERCP-CY5.5 | |
| BD Biosciences | 558714 | CD123 PERCP-CY5.5 | |
| Beckman Coulter | B49221 | CD117 PE-CY7 | |
| BD Biosciences | 562854 | CD33 BV421 | |
| BD Biosciences | 345791 | CD19 APC | |
| BD Biosciences | 333143 | CD11b APC | |
| BD Biosciences | 345800 | CD33 APC | |
| BD Biosciences | 345807 | CD38 APC | |
| BD Biosciences | 641411 | HLA-DR APC-H7 | |
| BD Biosciences | 560532 | CD44 APC-H7 | |
| BD Biosciences | 562596 | CD13 BV421 | |
| BD Biosciences | 348811 | CD34 PE-CY7 | |
| Beckman Coulter | A96416 | CD45 Krome Orange | |
| BD Biosciences | 655873 | CD45 HV500c | |
| BD Biosciences | 655051 | CST beads | |
| BD Biosciences | 555899 | Pharm lysing solution | |
| BD Biosciences | 644204 | Multicolor CompBeads | |
| BD Biosciences | 655051 | CST beads | |
| BD Biosciences | FACSDiva software | ||
| Cytognos | Infinicyt | ||
| Spherotech | Euroflow RCP-30-5a | ||
| Sigma-Aldrich | Tuerk solution | ||
| Spherotech | BCP-100-5 | Blank Calibration Particles Beads | |
| HSA | |||
| Azide | |||
| ddH2O |
References
- Döhner, H., et al. Diagnosis and management of AML in adults: 2017 ELN recommendations from an international expert panel. Blood. 129 (4), 424-447 (2017).
- Zwaan, C. M., et al. Collaborative Efforts Driving Progress in Pediatric Acute Myeloid Leukemia. J Clin Oncol. 33 (27), 2949-2962 (2015).
- Cornelissen, J. J., et al. The European LeukemiaNet AML Working Party consensus statement on allogeneic HSCT for patients with AML in remission: an integrated-risk adapted approach. Nat Rev Clin Oncol. 9 (10), 579-590 (2012).
- Grimwade, D., Freeman, S. D. Defining minimal residual disease in acute myeloid leukemia: which platforms are ready for "prime time"?. Hematology. 2014 (1), 222-233 (2014).
- Krönke, J., et al. Monitoring of minimal residual disease in NPM1-mutated acute myeloid leukemia: a study from the German-Austrian acute myeloid leukemia study group. J Clin Oncol. 29 (19), 2709-2716 (2011).
- Terwijn, M., et al. High prognostic impact of flow cytometric minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia: data from the HOVON/SAKK AML 42A study. J Clin Oncol. 31 (31), 3889-3897 (2013).
- van der Velden, V. H. J., et al. Clinical significance of flowcytometric minimal residual disease detection in pediatric acute myeloid leukemia patients treated according to the DCOG ANLL97/MRC AML12 protocol. Leukemia. 24 (9), 1599-1606 (2010).
- Ossenkoppele, G., Schuurhuis, G. J. MRD in AML: time for redefinition of CR?. Blood. 121 (12), 2166-2168 (2013).
- Feller, N., et al. MRD parameters using immunophenotypic detection methods are highly reliable in predicting survival in acute myeloid leukaemia. Leukemia. 18 (8), 1380-1390 (2004).
- Terwijn, M., et al. Leukemic stem cell frequency: a strong biomarker for clinical outcome in acute myeloid leukemia. PLoS One. 9 (9), e107587 (2014).
- Kalina, T., et al. EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols. Leukemia. 26 (9), 1986-2010 (2012).
- Paietta, E. Assessing minimal residual disease (MRD) in leukemia: a changing definition and concept?. Bone Marrow Transplant. 29 (6), 459-465 (2002).
- Loken, M. R., et al. Residual disease detected by multidimensional flow cytometry signifies high relapse risk in patients with de novo acute myeloid leukemia: a report from Children’s Oncology Group. Blood. 120 (8), 1581-1588 (2012).
- Zeijlemaker, W., et al. A simple one-tube assay for immunophenotypical quantification of leukemic stem cells in acute myeloid leukemia. Leukemia. 30 (2), 439-446 (2015).
- . Guidance for Collection, Transport and Submission of Specimens for Ebola Virus Testing Available from: https://www.cdc.gov/vhf/ebola/healthcare-us/laboratories/specimens.html (2017)
- Bachas, C., et al. The role of minor subpopulations within the leukemic blast compartment of AML patients at initial diagnosis in the development of relapse. Leukemia. 26 (6), 1313-1320 (2012).
- Ravandi, F., et al. Persistence of minimal residual disease assessed by multiparameter flow cytometry is highly prognostic in younger patients with acute myeloid leukemia. Cancer. 123 (3), 426-435 (2017).
- Hourigan, C. S., et al. Measurable residual disease testing in acute myeloid leukaemia. Leukemia. 31 (7), 1482-1490 (2017).
