Diseksiyon ve fare hipofiz bezi geliştirme koronal dilim hazırlık
Summary
Biz hipofiz bezleri teşrih ve fareler gelişmekte olan hipofiz koronal bölümleri hazırlamak için bir protokol mevcut.
Abstract
Önemli bir endokrin organ homeostazı için gerekli hormonlar salgılayan hipofiz bezi veya hypophysis olduğunu. O oluşmak-in iki bezleri ile ayrı embriyonik kökenleri ve görev — nörohipofiz ve adenohipofiz. Küçük ve narin bir uzun oval şekli ile gelişmekte olan fare hipofiz bezi bulunmaktadır. Koronal bir bölümü adenohipofiz ve nörohipofiz fare hipofiz tek bir dilim içinde görüntülemek için tercih edilir.
Bu iletişim kuralı uygun hipofiz koronal bölümleri fareler gelişmekte olan iyi korunmuş doku mimarileri ile ulaşmak hedeftir. Bu protokol için ayrıntılı olarak incelemek ve hipofiz bezlerinin düzgün üzerinden fare geliştirme işlemek nasıl açıklar. İlk olarak, fare transcardial perfüzyon formaldehit diseksiyon önce tarafından sabitlenir. Daha sonra üç farklı diseksiyon teknikleri sağlam hipofiz bezlerin fareler yaş bağlı olarak elde etmek için uygulanır. Fetal farelerin embriyonik gün (E) 17,5-18,5 ve Yenidoğan Bebeklerin yukarı 4 gün olarak yaşları için ense kemiği, bezi ve trigeminal sinir de dahil olmak üzere tüm sella bölgeleri kesmiştim. Yavrular için bir bütün olarak trigeminal sinir ile bağlı yaşında doğum sonrası gün (P) 5-14, hipofiz bezleri disseke. 3 hafta boyunca fareler için hipofiz bezleri dikkatle ücretsiz çevre dokulardan disseke. Ayrıca nasıl koronal bölümleri tatmin elde etmek için simge çevre dokular kullanarak uygun yönde hipofiz bezleri katıştırmak için görüntüler. Bu yöntemleri fareler gelişmekte olan hipofiz bezlerinin histolojik ve gelişimsel özellikleri analiz yararlıdır.
Introduction
Önemli bir endokrin organ homeostazı1,2için gerekli hormonlar salgılayan hipofiz bezi veya hypophysis olduğunu. Anatomik olarak, hipofiz bezi, nörohipofiz ve adenohipofiz oluşan bir ” iki-in-one” yapısıdır. Bu parçaların farklı embriyonik kökenleri ve işlev farklı var. Nörohipofiz sinirsel ektoderm türetilmiştir ve oksitosin ve Antidiüretik hormon salgılar. Adenohipofiz Rathke’nın çantası kaynaklı ve dahil olmak üzere büyüme hormon, prolaktin, tiroid – uyarıcı hormon, folikül – uyarıcı hormon, Lüteinizan, adrenocorticotropic hormon, hormon serbest bırakmak için sorumludur ve melanosit – uyarıcı hormon3,4,5.
Hipofiz bezi fare kafatası ense kemiği (sella turcica) dorsal yüzeye aittir ve beynin tabanına kırılgan bir SAP tarafından eklenir. Yanal trigeminal sinir tarafından ve anteriorly optik hemisferlerine6,7ile çevrilidir. Bezinin uzun ekseni başı dik bir uzun oval şekil vardır. Dorsal yüzeyi nörohipofiz ve adenohipofiz kolayca, dorsal orta bölge ve yanal ve ventrally ikinci uzanan işgal eski ile demarcated. Postnatal geliştirme sırasında ilk ay sonra doğum8,9hipofiz boyutunu hızla artar. Yine de, fare hipofiz hala çok küçük boyutu 1,9 mg bir ortalama ağırlığı ve uzun eksen çapı ~ 3 mm ile yetişkin10, postnatal gün 21 (P21) 2-2.5 mm ve P0 yalnızca 1-1.5 mm uzun eksen çapı.
Koronal bir bölümü adenohipofiz ve nörohipofiz fare hipofiz tek bir dilim içinde görüntülemek için tercih edilir. Ancak, bazı teknik becerileri fareler son derece küçük boyutu ve farklı anatomi nedeniyle gelişmekte olan hipofiz bezlerinin koronal bölümleri tatmin elde etmek için gereklidir. Video bu makalede, biz nasıl fare hipofiz bezleri teşrih ve hipofiz koronal bölümleri farklı geliştirme aşamalarında hazırlayın göstermek.
Protocol
Representative Results
Discussion
Fare pituitaries geliştirmek için bu küçük ve kırılgan özellikleri ve benzersiz anatomik özellikleri6,8nedeniyle uygun koronal bölümler elde etmek teknik olarak zor oldu. Bazı araştırma grupları böylece embriyonik ve neonatal hipofiz11,12morfolojisi çözümlemek için orta-sagittal bölümleri seçti. Yine de hipofiz orta-sagittal bölümünü de anterior, orta gösterilen yeteneğine sah…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser hibe Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (31201086, 31470759 ve 31671219) ve Şangay doğal Bilim Vakfı (12ZR1436900) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Tools/Equipment | |||
| Surgical scissors-straight | JinZhong | J21010 | can be purchased from other vendors |
| Fine scissors-strainght | JinZhong | WA1010 | can be purchased from other vendors |
| Blunt forceps | JinZhong | JD1020 | can be purchased from other vendors |
| Fine forceps | Dumont | RS-5015 | for isolation of the pituitary |
| 26G (0.45mm) needle | HongDa | for transcardial perfusion | |
| Syringe (1 mL) | BD | 300841 | can be purchased from other vendors |
| Syringe (10 mL) | BD | can be purchased from other vendors | |
| 35mm dish | Corning | 430165 | can be purchased from other vendors |
| Lens cleaning paper | ShuangQuan | can be purchased from other vendors | |
| Anatomical microscope | OLYMPUS | SZX-ILLB2-200 | can be purchased from other vendors |
| Embedding cassette | Thermo Fisher | 22-272423 | can be purchased from other vendors |
| Tissue embedding console system | KEDEE | KD-BM11 | can be purchased from other vendors |
| Microtome | Thermo Fisher | HM315R | can be purchased from other vendors |
| Superfrost-Plus slides | Thermo Fisher | 22-037-246 | can be purchased from other vendors |
| Cover glass | Thermo Fisher | 12-543 | can be purchased from other vendors |
| Fluorescence microscope | OLYMPUS | BH2-RFCA | can be purchased from other vendors |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Urethane | BBI | EB0448 | |
| NaCl | Sigma | S9625 | for PBS |
| KCl | Sigma | P9541 | for PBS |
| Na2HPO4.12H2O | Sigma | 71650 | for PBS |
| K2HPO4 | Sigma | P2222 | for PBS |
| NaNO2 | Sigma | 237213 | |
| Heparin Sodium Injection | SPH | H31022051 | for perfusion saline |
| Paraformaldehyde (PFA) | Sigma | P6148 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Xylene | SCR | 10023418 | |
| Paraffin | Thermo Fisher | 8330 | |
| Hematoxylin | Sigma | H9627 | for H&E staining |
| Eosin Y | Sigma | E4009 | for H&E staining |
| rabbit anti growth hormone (GH) | National Hormone | for immunostaining | |
| antibody | Pituitary Program | ||
| Rabbit anti-mouse GFAP antibody | Sigma | G9269 | for immunostaining |
| Goat anti-rabbit IgG, HRP | Jackson | 111-035-003 | for immunostaining |
| TSA system | NEN Life Science Products | NEL700 | for immunostaining |
| Streptavidin, Alexa Fluor 594 | Thermo Fisher | S32356 | for immunostaining |
| Anti-FITC Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher | A11090 | for immunostaining |
References
- Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
- Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
- Zhu, X., Gleiberman, A. S., Rosenfeld, M. G. Molecular physiology of pituitary development: signaling and transcriptional networks. Physiol Rev. 87 (3), 933-963 (2007).
- Bancalari, R. E., Gregory, L. C., McCabe, M. J., Dattani, M. T. Pituitary gland development: an update. Endocr Dev. 23, 1-15 (2012).
- Kelberman, D., Rizzoti, K., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C., Dattani, M. T. Genetic regulation of pituitary gland development in human and mouse. Endocr Rev. 30 (7), 790-829 (2009).
- Peker, S., Kurtkaya-Yapicier, O., Kilic, T., Pamir, M. N. Microsurgical anatomy of the lateral walls of the pituitary fossa. Acta Neurochir (Wien). 147 (6), 641-648 (2005).
- Wolpert, S. M., Molitch, M. E., Goldman, J. A., Wood, J. B. Size, shape, and appearance of the normal female pituitary gland. AJR Am J Roentgenol. 143 (2), 377-381 (1984).
- Carbajo-Perez, E., Watanabe, Y. G. Cellular proliferation in the anterior pituitary of the rat during the postnatal period. Cell Tissue Res. 261 (2), 333-338 (1990).
- Nantie, L. B., Himes, A. D., Getz, D. R., Raetzman, L. T. Notch signaling in postnatal pituitary expansion: proliferation, progenitors, and cell specification. Mol Endocrinol. 28 (5), 731-744 (2014).
- Tzou, S. C., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis. J Vis Exp. (46), (2010).
- Budry, L., et al. Related pituitary cell lineages develop into interdigitated 3D cell networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (30), 12515-12520 (2011).
- Wilson, D. B., Wyatt, D. P. Histopathology of the pituitary gland in neonatal little (lit) mutant mice. Histol Histopathol. 7 (3), 451-455 (1992).
- Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device. J Neurosci Methods. 12 (2), 141-149 (1984).
- Cao, D., et al. ZBTB20 is required for anterior pituitary development and lactotrope specification. Nat Commun. 7, 11121 (2016).
