تشريح وإعداد شريحة الاكليلية وضع الغدة النخامية الماوس
Summary
نقدم بروتوكولا لتشريح الغدد النخامية وإعداد أقسام الاكليلية الغدة النخامية من الفئران البلدان النامية.
Abstract
الغدة النخامية أو النخامية جهاز الغدد الصماء هام إفراز الهرمونات الضرورية للتوازن. يتكون من الغدد اثنين مع أصول الجنينية منفصلة والوظائف – في نيوروهيبوفيسيس وفي أدينوهيبوفيسيس. الغدة النخامية الماوس نامية صغيرة وحساسة بشكل بيضاوي ممدود. مقطع الاكليلية هو المفضل لعرض كل من أدينوهيبوفيسيس ونيوروهيبوفيسيس في شريحة واحدة من الغدة النخامية الماوس.
والهدف من هذا البروتوكول تحقيق الأقسام الاكليلية الغدة النخامية سليمة مع أبنية الأنسجة المحفوظة جيدا من البلدان النامية الفئران. ونحن في هذا البروتوكول، تصف بالتفصيل كيفية تشريح ومعالجة الغدد النخامية بشكل صحيح من البلدان النامية الفئران. أولاً، يحدد نضح ترانسكارديال الفورمالدهايد قبل تشريح الفئران. ثم يتم تطبيق ثلاث تقنيات تشريح مختلفة للحصول على الغدد النخامية سليمة تبعاً لعمر الفئران. للفئران الجنينية سن 17.5 يوما الجنينية (ه)-18.5 وحديثي الولادة تصل إلى 4 أيام، هي تشريح لمنطقتي سيلا كامل بما في ذلك عظم وتدي والغدة تريجيمينال الأعصاب. الجراء هي تشريح عمره يوما بعد الولادة (ع) 5-14، الغدد النخامية متصلة مع الأعصاب تريجيمينال ككل. للفئران القديمة أكثر من 3 أسابيع، يتم تشريح الغدد النخامية بعناية مجانية من الأنسجة المحيطة بها. ونحن أيضا عرض كيفية تضمين الغدد النخامية في اتجاه سليم باستخدام الأنسجة المحيطة بها كمعالم للحصول على إشباع المقاطع الاكليلية. هذه الأساليب مفيدة في تحليل الملامح النسيجي واﻹنمائية الغدد النخامية في وضع الفئران.
Introduction
الغدة النخامية أو النخامية جهاز الغدد الصماء هام إفراز الهرمونات الضرورية للتوازن1،2. تشريحيا، الغدة النخامية بنية ” اثنين في واحد ” تتكون من نيوروهيبوفيسيس وأدينوهيبوفيسيس. هذه الأجزاء لها أصول جنينية مختلفة والدالة بطريقة مختلفة جداً. مشتق من الأديم الظاهر العصبي neurohypophysis وتفرز الاكسيتوسين والهرمون المضاد. Adenohypophysis تنبع من الحقيبة راثكي وهي المسؤولة عن الإفراج عن الهرمونات بما فيها هرمون النمو، البرولاكتين، – الغدة الدرقية الهرمون، جريب – الهرمون، والهرمون، وهرمون ﻫﺭﻣﻭﻧ، و الصباغية – الهرمون3،،من45.
الغدة النخامية تقع على سطح عظم وتدي (السرج) الجمجمة الماوس الظهرية وإرفاق الكلمة الدماغ بساق هشة. ويحاط جانبياً بالاعصاب تريجيمينال والأسفل6،chiasm البصرية7. الغدة بشكل بيضاوي ممدود مع محورها طويل عمودي إلى رئيس. على سطحه الظهرية، في نيوروهيبوفيسيس وفي أدينوهيبوفيسيس يمكن بسهولة أن ترسيمها، مع السابقة تحتل منطقة وسطى الظهرية وتوسيع هذه الأخيرة أفقياً وبطنيا. خلال التنمية اللاحقة للولادة، وزيادة حجم الغدة النخامية سريعاً في الشهر الأول بعد الولادة8،9. ومع ذلك، لا تزال الغدة النخامية الماوس صغيرة جداً في الحجم مع متوسط وزن 1.9 ملغ وقطر منذ فترة طويلة-محور ~ 3 مم في البالغين10، قطر منذ فترة طويلة-المحور 2-2.5 ملم في يوم الولادة 21 (P21)، و 1-1، 5 ملم فقط في P0.
مقطع الاكليلية هو المفضل لعرض كل من أدينوهيبوفيسيس ونيوروهيبوفيسيس في شريحة واحدة من الغدة النخامية الماوس. بيد بعض المهارات التقنية المطلوبة للحصول على إرضاء المقاطع الاكليلية الغدد النخامية من الفئران نظراً للحجم الصغير استثنائية والتشريح متميزة البلدان النامية. في هذه المقالة الفيديو، نظهر كيفية تشريح الغدد النخامية الماوس وإعداد أقسام الاكليلية الغدة النخامية في مراحل مختلفة من التنمية.
Protocol
Representative Results
Discussion
لوضع بيتويتاريس مورين، كان من الصعب من الناحية الفنية للحصول على أقسام الاكليلية السليمة نظراً لخصائصها صغيرة وهشة والخصائص التشريحية الفريدة6،8. ومن ثم اختيار بعض المجموعات البحثية أبواب منتصف السهمي لتحليل مورفولوجية الجنينية والوليدية الغدة النخامية<…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل المنح “الوطنية الطبيعية مؤسسة العلوم الصينية” (31201086 و 31470759 و 31671219) و “شنغهاي مؤسسة العلوم الطبيعية” (12ZR1436900).
Materials
| Tools/Equipment | |||
| Surgical scissors-straight | JinZhong | J21010 | can be purchased from other vendors |
| Fine scissors-strainght | JinZhong | WA1010 | can be purchased from other vendors |
| Blunt forceps | JinZhong | JD1020 | can be purchased from other vendors |
| Fine forceps | Dumont | RS-5015 | for isolation of the pituitary |
| 26G (0.45mm) needle | HongDa | for transcardial perfusion | |
| Syringe (1 mL) | BD | 300841 | can be purchased from other vendors |
| Syringe (10 mL) | BD | can be purchased from other vendors | |
| 35mm dish | Corning | 430165 | can be purchased from other vendors |
| Lens cleaning paper | ShuangQuan | can be purchased from other vendors | |
| Anatomical microscope | OLYMPUS | SZX-ILLB2-200 | can be purchased from other vendors |
| Embedding cassette | Thermo Fisher | 22-272423 | can be purchased from other vendors |
| Tissue embedding console system | KEDEE | KD-BM11 | can be purchased from other vendors |
| Microtome | Thermo Fisher | HM315R | can be purchased from other vendors |
| Superfrost-Plus slides | Thermo Fisher | 22-037-246 | can be purchased from other vendors |
| Cover glass | Thermo Fisher | 12-543 | can be purchased from other vendors |
| Fluorescence microscope | OLYMPUS | BH2-RFCA | can be purchased from other vendors |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Urethane | BBI | EB0448 | |
| NaCl | Sigma | S9625 | for PBS |
| KCl | Sigma | P9541 | for PBS |
| Na2HPO4.12H2O | Sigma | 71650 | for PBS |
| K2HPO4 | Sigma | P2222 | for PBS |
| NaNO2 | Sigma | 237213 | |
| Heparin Sodium Injection | SPH | H31022051 | for perfusion saline |
| Paraformaldehyde (PFA) | Sigma | P6148 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Xylene | SCR | 10023418 | |
| Paraffin | Thermo Fisher | 8330 | |
| Hematoxylin | Sigma | H9627 | for H&E staining |
| Eosin Y | Sigma | E4009 | for H&E staining |
| rabbit anti growth hormone (GH) | National Hormone | for immunostaining | |
| antibody | Pituitary Program | ||
| Rabbit anti-mouse GFAP antibody | Sigma | G9269 | for immunostaining |
| Goat anti-rabbit IgG, HRP | Jackson | 111-035-003 | for immunostaining |
| TSA system | NEN Life Science Products | NEL700 | for immunostaining |
| Streptavidin, Alexa Fluor 594 | Thermo Fisher | S32356 | for immunostaining |
| Anti-FITC Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher | A11090 | for immunostaining |
References
- Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
- Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
- Zhu, X., Gleiberman, A. S., Rosenfeld, M. G. Molecular physiology of pituitary development: signaling and transcriptional networks. Physiol Rev. 87 (3), 933-963 (2007).
- Bancalari, R. E., Gregory, L. C., McCabe, M. J., Dattani, M. T. Pituitary gland development: an update. Endocr Dev. 23, 1-15 (2012).
- Kelberman, D., Rizzoti, K., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C., Dattani, M. T. Genetic regulation of pituitary gland development in human and mouse. Endocr Rev. 30 (7), 790-829 (2009).
- Peker, S., Kurtkaya-Yapicier, O., Kilic, T., Pamir, M. N. Microsurgical anatomy of the lateral walls of the pituitary fossa. Acta Neurochir (Wien). 147 (6), 641-648 (2005).
- Wolpert, S. M., Molitch, M. E., Goldman, J. A., Wood, J. B. Size, shape, and appearance of the normal female pituitary gland. AJR Am J Roentgenol. 143 (2), 377-381 (1984).
- Carbajo-Perez, E., Watanabe, Y. G. Cellular proliferation in the anterior pituitary of the rat during the postnatal period. Cell Tissue Res. 261 (2), 333-338 (1990).
- Nantie, L. B., Himes, A. D., Getz, D. R., Raetzman, L. T. Notch signaling in postnatal pituitary expansion: proliferation, progenitors, and cell specification. Mol Endocrinol. 28 (5), 731-744 (2014).
- Tzou, S. C., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis. J Vis Exp. (46), (2010).
- Budry, L., et al. Related pituitary cell lineages develop into interdigitated 3D cell networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (30), 12515-12520 (2011).
- Wilson, D. B., Wyatt, D. P. Histopathology of the pituitary gland in neonatal little (lit) mutant mice. Histol Histopathol. 7 (3), 451-455 (1992).
- Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device. J Neurosci Methods. 12 (2), 141-149 (1984).
- Cao, D., et al. ZBTB20 is required for anterior pituitary development and lactotrope specification. Nat Commun. 7, 11121 (2016).
