適切なポジショニングと骨のマイクロ アーキテクチャを使用して体内のマイクロ-コンピューター断層撮影の焦点の高分解能イメージングのためのラットの後肢の拘束

このプロトコルには、適切な麻酔、配置、および拘束ラットの生体内でµCT の後肢のスキャン中に最初の詳細なガイドラインと視聴者がしています。これらのガイドラインでは、高解像度を取得する生体内のµCT スキャン システムのユーザーと 3 次元骨のマイクロ アーキテクチャの定量化のため処理することができます脛骨の高品質の画像を有効にします。不自然な位置ではなく適切な位置と拘束を伴う適切な麻酔ラットだけでなく、ピンと張った、それまで他のすべての重要な構造から後肢を拡張するために必要なプロトコルでの重要なステップです。最適なイメージングの結果、完全なリラクゼーションのレベルにラットを麻酔すること、眼瞼およびペダルの反射が失われることが不可欠です。さらに、スキャンの足を拡張する必要があります、全体の足と足首を泡で拘束する必要があります。スキャンの脚の最適な位置決めを達成するために上記の方法がように: 1) 試験中のラットの後肢の回転と各脚の同じ領域を通過する x 線ビームが可能、同じ方向に向きが一貫してサンプルとして周辺後肢の随意と不随意の 2) 両方の移動は発生しません、取得した画像の品質に影響するアーチファクトの可能性を最小限に抑える3) オブジェクト (すなわち尾) から障害物はできない、BMD と TMD の不正確な測定を生成する部分容積効果の可能性を最小限に抑える。これらのガイドラインは、イソフルラン代謝と位置決めのレートひずみと体サイズ²²によって異なります、それぞれ個々 のラットの変更可能性があります。スキャン機生体内で最も一般的な実験動物用に設計された (すなわちマウス、ラット、ウサギ、モルモット) 動物の異なるサイズのスキャンを許可する交換可能な動物段階があるだろうと。したがって、体重の広い範囲に対応することができます彼ら。

体内の µCT スキャン位置し、初期スキャンから得られるイメージでは、質の悪い場合は再スキャンするラットのための許可は繰り返しスキャン、放射線およびイソフルラン麻酔の追加投与のラットを公開時間の長期間。毎月繰り返される放射線被ばくラット脛骨に焦点を当てた 4 ヵ月以上 600 mGy の骨のマイクロ アーキテクチャ¹対側下肢に比較して副作用は発生しませんが、これで繰り返される 2 つのスキャンの安全性を確認しませんすぐに連続。説明した手法のさらなる制限、骨の構造のいくつかの変更を呼び出すことができますまだ、それを維持するために適用される力でピンと張った後肢を拡張する必要があります。スキャン中に後肢の抑制の重症度は、それぞれの研究目的に依存している毎月繰り返される生体内でµCT のイメージング 1 つ後肢を含む当研究室の過去の研究結果、皮質の違いでマイクロ建築パラメーター、偏心、繰り返された延長、安定化、 ¹スキャンを受けていない側の後肢に比較します。偏心は、皮質骨と荷重の変更への応答の変化のような楕円形の尺度です。したがって、µCT生体内イメージングを繰り返すポジショニングとの後肢の抑制のこのメソッドを使用して、考慮しなければならない荷重マイクロ建築パラメーター評価と解釈が変更されたとき。

上記のガイドラインはイメージングと骨の分析のために提供されている中、は、後肢の軟部組織を撮像するときプロトコルに若干の調整を行う必要があります。具体的には、現在のプロシージャ misshapes スキャンの時間の異常な位置に軟部組織 (筋肉、脂肪組織) の向きと後肢の胴体から拡張し、拘束の方法を考慮し、撮影する必要があります。したがって、後肢の軟部組織のイメージングに使用するこのモデルを推定する際は、減らすか、お互いに関連して組織の位置の変更を排除する拘束法にいくつかの調整を行ってください。

さらに、ガイドラインに書かれている特別に基づいて我々 の研究グループの経験、ただし、他市販生体内の µCT スキャナーに対応するため変更することができます。位置し、後肢を抑制するその他の推奨される方法は、システムをスキャンする生体内でµCT の製造業者によって可能性があります。µCT 単位最も市販体内ポリプロピレン、発泡スチロールと受容可能な材料およびスキャンの脚を抑制するための方法として足の突出を保持する歯科用ワックス、プラスチック チューブ。しかし、このプロトコルで紹介した方法より一貫した位置決めやスキャンした脚の拘束を提供し、一貫して高品質の画像を生成します。本手法で説明するガイドラインは、気化器、チューブ、マスク、誘導室、酸素など、ラットの麻酔に必要な特殊な装置を必要とします。研究者の代替以上の利点を提供する意識の特定の深さに迅速かつ正確に麻酔することができますそれ注射麻酔薬と比較してコストがやや高い装置が関連付けられていますが、メソッド。

高解像度生体内でµCT 技術を活用する研究者は、彼らの介入を調査するビデオ、本手法のガイドラインを使用して興味のこと正しく一貫してオリエント ・高のラット後肢を抑制x 線の画像。これは µCT 画像取り込み体内のフィールドに連続を提供し一貫性と正確性の研究内の最適化に向けてのステップとして機能し、文学研究間での比較を有効にします。同様に、これらのプロトコルおよび方法は、いくつかの変更が必要な^2,10になりますが、マウスを含む他の齧歯動物種で使用する拡張できます。たとえば、泡管の足の拘束は、スキャン中に脚の動きの可能性を最小限に抑えるため足首を含めることができます。さらに、完全な足は、フォーム ホルダーに収まるでしょう。したがって、ラットの足を確保するようにつま先をホルダーの端を拡張しません。さらに、マウスの体では、ラットとしてテープと同じ拘束は必要ありません。小さい鼻の円錐形は、スキャン中にマウスで麻酔を維持するために使用できます。小さい鼻の円錐形を使用できない場合利用可能な鼻の円錐形をニトリル手袋を確保、小切開は、鼻の周りのシールを維持しながら麻酔を提供するためにマウスの鼻に合うことができるスペースを提供する手袋できます。

脛骨近位端骨のラットにおける微細構造変化を調査のメインのサイトですが、大腿骨や腰椎など他の骨格のサイトの適切な一貫した位置のためのガイドラインは調査して設立文献の一貫性。しかし、腰椎のイメージングを含む今後の研究に着手しているときの考慮事項は脊椎の画像化により、周囲の臓器や組織への放射線被ばくとしてなされなければなりません。