線虫の遺伝子発現レベルの間に寿命変調下広い範囲食事制限によってエンコードされた情報の定量化

1 細菌文化の準備、一般的なワーム培養用プレート 250 mL 瓶のホストゲノム スープ (LB) メディアの 100 mL を準備し、オートクレーブに入れることによって殺菌しなさい。。 大腸菌 株 OP50 の単一コロニーをボトルに接種、37 ° C で一晩インキュベートし、4 ° c まで必要な文化を格納します。 滅菌 6 cm プラスチック シャーレに滅菌線虫成長の 5 L 中 (NGM) 寒天培地 15 そして因数 12 mL ボリュームを準備します。 一晩を設定し、必要になるまで 4 ° C で保存する寒天を許可します。 シード NGM プレート冷蔵 OP50 文化の 225 μ L で使用する、少なくとも 3 日前までに。20 ° c まで必要な板を格納します。 2。細菌文化および実験のための希薄の準備 2 L の三角フラスコに LB 媒体の 500 mL の 2 つのロットを準備し、オートクレーブに入れることによって殺菌しなさい。 OP50 単一コロニー各フラスコに接種し 37 ° c 前後 14 h の 200 rpm で揺れ成長 は、50 μ g/mL の最終的な集中に抗生物質のストレプトマイシンと文化を補足します。37 ° C で 30 分で 15 分間氷の上を入れ、フラスコの揺れ続ける 個別滅菌遠心ボトル (理想的には 500 mL 容量瓶文化の分割を避けるために) に各文化の転送 450 mL。それが細菌の濃度を決定するためとしているが、氷の上残りの文化を保持します。 スピン ・ ダウン 4 ° C で 25 分間、冷却遠心機セットで 4500 x g でボトル破棄上清と氷のボトルを保存 は、分光光度計のゼロに滅菌ポンドのポンド使用 1 mL の滅菌の 900 μ L で各フラスコから残っている文化の 100 μ L を希釈し、各カルチャの 10 倍希釈の OD 600 を決定します。たとえば、一晩かけて培養の 10 倍希釈の OD 600 が 0.28 なら文化が 2.8 の実際の外径 600。 使用 1.12 x 10 の細菌の作業原液 10 OP50 セル/mL、56 の OD 600 に相当します。したがって、上から 2.8 の例外径 600 を使用するで再懸濁します 450 mL 文化からペレット 22.50 mL をこの場合は、元のボリュームの 20 番目。滅菌 S 基底溶液 50 μ g/mL (SB + 連鎖球菌) にストレプトマイシンを補充と細菌を再懸濁します。 滅菌 SB + 連鎖球菌性の適切なボリュームでペレットを再懸濁します。 SB に在庫のシリアル希薄からの実験で使用されるすべての後続の濃度を作る + 表 1 に示す希釈倍率を使用して連鎖球菌。 3。寿命実験を設定 注: 6 cm 処理培養 12 ml ストレプトマイシン、carbenicillin (NSC), 50 μ g/mL の最終的な集中の両方を添加した NGM 寒天の寿命試金されます。これらの組織培養プレート、ワームの板の壁に付着し、乾燥が大幅減ります、寿命試金なしでまたは非常に低細菌濃度も適しています。2 種類の抗生物質の使用は、プレートに細菌の濃度を制御するに重要である薬剤耐性を開発から OP50 ひずみを防ぎます。また、抗生剤は細菌を不活性で病原菌の感染 16 ワームの寿命に及ぼす影響を最小化します。これらの実験における細菌濃度の食品関連のコンポーネントのみを考慮することができます。多くの 線虫 の老化研究を補う化学フッ素 2 NGM プレート ′-デオキシウリジン大人を滅菌する (FUdR)。ただし、FUdR を使用することができますその使用は長寿の試金 17 , 18 , 19 , といくつかの交絡の問題を引き起こすことができます問題が発生します。 20, 21. Entchev ら (2015 年) 12 の 卵 5 22 , 23, 阻害する RNAi に L4 幼虫の暴露によってこの問題を回避、卵殻の形成をブロックすることによって卵子の胚遷移受精 線虫 卵母細胞の死の結果します。 試金するが c. の elegans 文化系統シード NGM プレート 20 ° c. を許可すべての動物の制服ファッションとの次世代影響を任意のアカウント可能性があります成長を確実にするうち餓死するプレート発達条件。 転送が飢えたプレート滅菌メスを使用して、新しいプレートと呼ばれるプロセスでそれを下に置くから L1 幼虫を新しいシード NGM プレート寒天培地 (5 mm × 5 mm) の小さい部分を切り出して飢えた ' チャンク ' 線虫 研究通信で統一 15。ワームは、L4 の段階に達するまでに成長します。5 L4 幼虫ひずみが個々 のシード NGM プレートに転送し、20 ° C で保管これらの動物は、P0 世代を表す。 使用 L4 F1 世代を設定する P0 世代の子孫。30 シード NGM プレートに野生型 N2 ひずみの F1 L4 幼虫を個別に配置します 。 注: 突然変異体の緊張のため、必要な枚数はその成長率に依存します。たとえば、daf-7(ok3125) 動物を受ける 20 ° C で一時的な期間直逮捕したがって、この株は少ない L4 幼虫ワームの N2 野生型のプレートよりもを生成します。 この違いを補うために前日までの daf-7(ok3125) プレートをセット N2 よりプレートし、大きい数で良い作業比率は 3:1 です。 転送同期 L4 段 NGM プレートに 卵 5 遺伝子をターゲット dsRNA を表現する HT115 菌 225 μ L でシードされ、距離を置いて 1 mM IPTG と 50 μ G/ml carbenicillin (RNAi 板) を添加した F1 親の子孫20 ° C 24 時間。ひずみ、プレートあたり 15 動物の密度で保管につき、少なくとも 360 ワームは実験ごとに必要な。 転送ワーム 卵 5 RNAi 治療後、NSC プレートに 20 ° C での追加 24 時間 2 x 10 9 セル/mL (表 1) の濃度でストレプトマイシン処理 OP50 の 225 μ L でシードこれおよびすべてのそれに続く転送中にワームに物理的な損傷を避けるためにそっとすくう動物から薄い非常に穏やかに曲げられたワームの選択を使用してワームの下に。新しいプレートの表面に置かれたフロート SB + 連鎖球菌の 10 μ L の液滴に浸すことによってワームを動物を選ぶ。 次の日再配布食品レベル l のそれぞれを表す NSC プレート ワーム細菌を含まない NSC プレートのセットと同様に、表 1 で isted。細菌の関連性の高い濃度の 225 μ L をすべて NSC シードで 225 μ L SB + 連鎖球菌細菌無料 NSC プレートをシードします。ひずみあたりの餌料環境あたり少なくとも 4 つのプレートで、プレートごと 15 動物の密度でワームを維持します。プレートを所望の実験温度にシフトします。 新鮮な NSC プレートに転送ワーム シード 表 2 に記載されているスケジュールに従って適切な食品の濃度と。 針金で軽く催促した運動 スコア動物を選ぶ。死としてスコアに応答に失敗します。動物すべての転送で死のポイントとし、毎日の後に得点最後の転送ポイントします。 4。イメージング実験を設定 注: このセクションで説明する手順は、特定の温度で 1 つの実験的食状態をイメージングのための株あたり十分なワームを生成するのに十分な。このプロトコルは、任意の日にイメージングされる条件の数に合わせてスケールできます。ただし、期間は合理的と異なる系統間で動物イメージングの日に 12 時間以上の年齢差がないことを確保するのに実験的なデザインには注意が必要があります。これはもっと密接に遺伝子のネイティブの規制をよく似ているなど単一コピーの遺伝子組み換えをイメージされている転写記者には強くお勧めします。プロトコルを以下 の表 3 にまとめられても他の実験的ワークフローに使用することができます株の一致大きい同期年齢人口を取得するための合理化された方法を提供します。 イメージング実験ワームの密度を増すように 10 cm 処理組織培養プレート上で動物の文化 (∼ プレートごと 100 動物) 寿命アッセイより。 クロスのような形成で冷蔵 OP50 文化 5 225 μ 因数と NGM 寒天と種子の 30 mL で 10 cm プレートを埋める。 5。記者の文化系統の初期 に試金するが c. の elegans 文化系統シード NGM プレート 20 ° c. を許可すべての動物の制服ファッションで、可能性のある任意のアカウントに成長を確実にするうち餓死するプレート発達条件による次世代影響します。 チャンク飢えた L1 幼虫に NGM プレートをシードし、L4 の段階に達するまでに成長します。20 ° C で 2 つのシード NGM プレートにひずみあたり 3 L4 幼虫を転送します。これらの動物は、P0 世代を表す。 では、P0 世代の L4 子孫を使用して、F1 世代を設定します。4 シード NGM プレートに野生型記者ひずみの F1 L4 幼虫を配置します。突然変異系統の必要枚数は、その成長率に依存します。Daf-7(ok3125) の前の例を使用して、このような背景で記者株 3 回ナンバー プレートを必要と、野生型記者株、成長率の違いを考慮する前に 2 日間を設定する必要があります。 6。卵コレクションと同期の記者系統 注: 線虫 の老化研究コミュニティの興味のいくつかの遺伝子は、成長と変異、産卵の欠陥により困難になります。異なる遺伝子型の動物の大規模な同期集団を生成します。たとえば、daf-7(ok3125) 突然変異は、野生型 N2 ひずみと比較して厳しい産卵欠陥を引き起こします。したがって、十分なを取得する定量的イメージング実験のための異なる系統の同期の L4 幼虫数手動でワームを拾うよりもより強固な方法論が必要です。このため、転写レポーターは、亜塩素酸ナトリウム (NaClO) にさらされた/水酸化ナトリウム (NaOH) を破る妊娠大人の溶体化処理、動物を開き、産卵すると一般的に呼ばれるプロセスを解放する ' 漂白' 線虫 の研究コミュニティ 15。 アカウントの成長の差の系統間料金し、各株の板必要があります収穫し、漂白するとき計算。野生型および daf-7(ok3125) の記者系統を漂白するときの例 表 3 を参照してください。 は連続 SB の 15 mL を使用して、該当する日を皿のある特定の緊張のワームを洗浄し、滅菌 15 mL チューブに収集します。自然堆積物に動物ができ 7 mL に液体の量を調整します。 追加 2 mL 5 %naclo と妊娠の大人を含む管 5 M NaOH の 1 mL は 。3 min 以上室温で混合物を優しく揺する。NaClO は水酸化ナトリウム液に含まれている受精卵を解放をバラバラにしワームを引き起こすバクテリアや虫を殺すでしょう。胚の周り卵殻のキチンは露光時間が比較的短い限り、治療の影響からのそれらを保護します。渦 ~ 30 のチューブ 3 分培養後ワーム死体の崩壊をさらに容易にする s. 3 分孵化卵をペレットに 1 分間、1,000 x g で混合スピンダウン後。卵を邪魔しないように各管内 ~0.5 mL を残して真空フラスコに接続して滅菌ガラス ピペットを使用して上清のほとんどを離れて吸い出しなさい。 SB の 9.5 mL にペレットを再懸濁します、巻き上がり・遠心分離のステップ ステップ追加 2 回、卵は SB で合計 3 回洗浄されているを繰り返します。 最終洗浄後から遠心分離を介して卵のペレット、上澄みの 0.5 mL 以外のすべてを破棄します。SB の 3 つのシード 10 cm NGM プレートに 100 μ L 分注し、残りの 0.5 mL で卵を再懸濁します。100 μ L を各プレート上すべての 5 細菌の芝生の上に均一に分散します。野生型株はプレートごと 200 を超える密度での堆積が卵ない。 48 h と L4 幼虫の非常に同種の人口を取得する 20 の ° C で保持プレート。遅延成長表現型を持つ系統は利用可能な多くの卵をデポジットし、インキュベーション時間を増やすことをお勧めします。たとえば、daf-7(ok3125) を保持-卵を孵化・ L4 段階に到達できるように ~ 64 h 20 ° C で記者系統を含むします。 7。卵 5 RNAi とレポーターの治療 連続 SB の 15 mL を使用して 3 つの皿のワームを洗浄し、滅菌 15 ml チューブに液体を収集します。自然堆積する L4 幼虫を許可し、すべて ~0.5 mL の液体が吸引します。野生型のe 記者系統、この手順は任意の幼虫 L4 より若いを削除します。突然変異の背景でこのステップ エイズ daf-7(ok3125) 場合耐性など任意の逮捕された幼虫の除去します。 では、9 ml の SB のワームを再懸濁します。もう一度、L4 幼虫の沈降速度を監視し、L4 幼虫のほとんどが小球形一度 ~0.5 mL 上澄みだけ吸引します。このプロセスをもう一度繰り返します。L4 幼虫の大半が解決したら、以外のすべての液体の ~0.5 mL 吸引します。 追加 10 μ L の滅菌 S 基底を 0.1% 添加したプルロニック F-127 (SB + Plu) L4 幼虫を含む液体。これは界面活性剤として機能し、幼虫がプラスチック ピペット チップの内部表面に付着することを防ぎます。 は軽く 卵 5 RNAi 細菌の 5 x 225 μ L で p200 でも低保持ピペット チップとシードは、3 つの 10 cm RNAi プレートの上に 150 μ L 分注を使用して幼虫を再懸濁します。ワームはすべて 5 細菌芝生全体に均等に分散することを確認します。 液体が寒天に吸収されて、手動でにそれらを選ぶことによって洗浄方法によって除去されなかったプレートから任意の非 L4 幼虫を削除します。20 ° C 24 時間でプレートを保存 8。広い範囲の DR の開始 注: 24 h 後 卵 5 RNAi 治療、プレート上に堆積したもともと L4 幼虫 1 日古い大人になっているでしょう。 プレートに 1 日間の古い大人だけを残して、この段階でオフ前の手動削除手順をエスケープ任意の若い幼虫を狙い撃ちします。 各緊張に 15 mL チューブに 15 ml の滅菌の SB + 連鎖球菌性の三つのプレートから生後 1 日大人を洗います。自然堆積するワームを許可して、上澄みの 0.5 mL だけを吸引します。9.5 ml SB + 連鎖球菌性のワームを再懸濁し、堆積作用と洗浄の手順を繰り返します。 最終洗浄後、土砂にワームを可能にし、すべてが清の 0.5 mL 吸引します。10 μ L SB + Plu を追加し、軽く P200 ピペット チップと 5 x 225 μ L 細菌濃度 2 x 10 の 9 セル/mL でシード NSC プレート上に 100 μ L 分注して使用して幼虫を再懸濁します。 すべての 5 つの細菌の芝生の間で均等に 配布、100 μ L。顕微鏡下でプレート上に存在の動物数の推定: 目的との間に皿の上 100-150 ワームしています。 は、この範囲と、因数 2 つ追加プレート内にあるワームの密度を達成するために必要な液量を決定します。またこの範囲に該当し、20 ° C 24 時間でプレートを格納する最初のプレートにワームの数を調整 次の日、2 日間の古い大人を収集し、NSC プレートを新しい食品 (表 1) の目的の実験的濃度を播種手順 2 と 3 で説明する方法を再配布します。液体は寒天に吸収されて、24 時間の所望の実験温度にプレートをシフト 次の日、3 日の古い大人を収集し、新鮮な NSC 板 8.3、8.4 の手順で説明したメソッドを再利用する食品の実験的濃度が同じシードに配布。液体は、寒天に吸収される、プレート 48 h. の実験温度に戻ります は 5 日間の古い大人を収集し、新鮮な NSC 板 8.3、8.4 の手順で説明したメソッドを再利用する食品の実験的濃度が同じシードを配布します。液体は、寒天に吸収される、プレート 24 時間の実験の温度に戻る 9。レポーターのマイクロ イメージング系統 成人の 6 日、カスタム マイクロ流体プラットフォーム 24 , 25 を使用して動物をイメージします。物理的に三つのプレートの動物からピックアップし、SB + 連鎖球菌 4.5 mL を含む 5 mL クライオ チューブ内の中断します。 一度ワーム土砂以外のすべての上澄みの ~0.5 mL 吸引、SB + 連鎖球菌の 4 mL で動物を再懸濁します。この洗浄は、イメージングを妨げる可能性があります余分な細菌を削除します。ワームは、圧力駆動型フロー 24 , 25 を介してカスタム マイクロ流体デバイスに導入されます。デバイス内にある個々 のワームに指示し、カスタム ソフトウェアの制御の下でチップに弁の圧力駆動型 26 ゲート画像チャンネル内に閉じ込められた。 ワームは、イメージングのチャネルに頭から閉じ込められている、一度収集蛍光 z-スタック 2 μ m の手順、標準の落射蛍光顕微鏡を用いた石油目的 (1.3 NA) とカメラ X 40 で 50 のセクション。同時に発光スプリッターを使用して、分析のため保存されている転写記者のそれぞれの赤と緑の蛍光画像を収集します。カスタム ソフトウェアを使用して画像の取得を自動化します。 カスタム MATLAB スクリプト 27 (https://github.com/meizhan/SVMelegans で入手可能) を使用して自動的に画像を処理します。Z スタックは MATLAB に読み込まれ、ニューロンのペアと画像平面内の場所を識別するために分析します。最大の予測は計算し、およびしきい値処理アルゴリズムを利用して個々 の蛍光セルを検索します。相対距離とワーム内の場所に基づいて細胞の識別を計算 ' s 頭。 レポーター蛍光を定量化する は、z スタックから各細胞の場所の周りの三次元ボリュームを抽出します。完全にすべてのケースでセル全体をカプセル化する最も明るいピクセルの一貫性のある数で強度を積分します。 各動物の腸の自家蛍光の実験条件や固有ひずみ変化からの干渉を除去するために のモードの推定 (ADF および ASI) 腸に最も近いセルのペアの背景強度の計算、ニューロンのまわりの容積の震度分布。最終的な出力を得るため、蛍光からこの背景の輝度の値を減算します。 10。データ アセンブリ 注: 画像処理ソフトウェアで分析したすべてのニューロンの蛍光強度は遺伝子の分布を推定するために使用するフィルター式データ ファイル (FED) に結合され式 (テンプレート R と C++ スクリプトが https://github.com/giovannidiana/templates で利用可能). チェックは各処理イメージを手動ですべてのセルの正しい本人確認をします。誤ったセルの識別とイメージは、除外ファイルに記録する必要があります。ダイアナら (2017 年) の 13 除外ファイルをバイナリ テーブルから成ります ' 0 ' の修正と ' 1 ' が正しくないセルの識別のため。テーブル内の行の数はワームの撮像撮像の各セルの列 (すなわち ASI、ADF と NSM) の数に等しいします。 FED ファイルを生成: 実行 bash スクリプト " gen_data + 時間 " セル固有のファイルを各ワームのイメージから得られた式の値の組み合わせを生成するフィルター除外ファイルを使用します。Bash スクリプトがアノテーション ファイルを読み取り、画像処理ソフトウェアによって生成された各フォルダーの < folderprefix > 実験の条件や除外ファイルを抽出する _EXP.txt < folderprefix > _X.csv 正しくのみを選択するにはニューロンを識別します。式の値がファイルから読み取られます < folderprefix > コントロール < ニューロン > .csv。にすべてのファイルを連結 " FED_split.dat " 実験バッチ コードによって並べ替え、ワームのラベルおよびセル id。 実行 " 種 " (C++ プログラム、使用量:./FED_split.dat FED_merged.dat を並べ替える) 非ゼロ蛍光セルごとにエントリを選択し、FED_merged.dat 内の単一の行に結合します。 11。エンコードされた情報の推定 注: 次の手順は、どのように遺伝子発現のセットによってエンコードされた特定の環境条件に関する情報を定量化します。ダイアナ ら で(2017) 13 食品の豊富な環境でのエンコード情報を調べたところ、ただし、メソッド自体は環境状態の任意の離散数に該当します。情報エントロピー、冗長性などの情報論的変数を定量化する必要不可欠な要素が考慮設定環境刺激による神経の反応の結合確率分布。このような推定を実行するには、それはワームの人口にわたって応答の十分なサンプリングをして重要です。ガウス分布を比較的小さいサンプルから推定できます。ただし、信頼性の高い密度推定のための適切なサンプル サイズを定量化する発現分布の予想される形のアイデアを持っていることが重要です。複数の異なる試験やむを得ない変動によるそれは別の繰り返し同じ実験から得られる分布の中央値が体系的に再配置されないことを確認することが不可欠または統計的特徴量のいずれか、式の分布は、複数の試験大幅変更されません。それは裁判-裁判に影響を与えるそれらの環境/生物学的要因を平均する試験内のワームの数と試行数のバランスを取る重要な裁判-裁判の変動は、各試行内変動と互換性が、場合に変動します。情報理論的解析を大きくバイアスがこれらの要因をアンダー サンプリングします。 として、R スクリプト " code3D.R " ファイルに基づく三次元密度を生成するためのテンプレートを提供します " FED_merged.dat "、特定の FED ヘッダー形式に従ってこのテンプレートを変更します。一覧 " HeaderNames " しながら給電ファイルの各フィールドの名前を表す " RONames " 読み出しのリストです。スクリプトは、R パッケージを使用して ' ks ' 28 , 29 GS と hypercubic グリッド内の多変量分布を推定するための最小値と最大値の間の範囲を分割する各ディメンションに大箱各読み出しのためのデータセット内の値。とき内部変数 " グループ " 密度推定用データはすべて 0 に設定されます。ときに、" グループ " ラベル 1 〜 5、データセットは 5 の切り離されたセットに分かれての間、5 つのセットの 1 つの除外に伴うデータの 80% から推定する式密度。この機能を後で不確実性の見積もりに使用します 。 メモ: code3D.R の使用法: Rscript code3D.R < GT > < 食品 > < GS > < outfolder > < ラベル > < グループ > < frac > GT を表す遺伝子型、食品、環境条件、outfolder は、既存フォルダー、分布が格納される、ラベルはファイル名プレフィックスであり frac は、使用されるデータセットの一部。 各環境条件が異なるグリッドと多変量の分布を生成する GS (例えば 20,30,40 ビン) のサイズします。計算負荷を減らすためには、細かい解像度が大きく変化しない情報の推定と、GS の値が小さいほどお勧めします。遺伝子発現分布がフォルダーで書かれている < outfolder > ファイル名構造を持つ code3D.R が単一の列のテキスト ファイルを実行時に指定 < ラベル > _ < GT > _ < 食品 > _GS < GS > _group < グループ >. ダット 注: 上記の手順は、条件付き確率分布の見積もりを提供 ここ g を示しますすべての読み出しのベクトル、f は環境条件。ただし、遺伝子発現と環境 30 , 31 間相互情報を計算する 。 入力の配布必要があります 遺伝子発現の平均も決定する (入力-) 。コーディング機能を特徴付けるための有意義な量はすべての可能な入力のディストリビューションでの相互情報量を最大化することによって得ることができるチャネル容量入力分布を直接使用できない場合。 システムのチャネル容量と環境の入力情報を最大化する分布を推定する有元 Blahut 32 アルゴリズムを適用遺伝子発現分布を用いたします。C++ プログラムのアルゴリズムの実装の例を見つけることができます " Ccap3D.cpp " 立体の遺伝子表現のコード分析ダイアナら (2017) 13。例: GT123 遺伝子型分布から得られる場合データ (グループ 3) グリッド サイズの 80% の 30 を等しいし、フォルダーに格納 "./pdf/" プレフィックス ラベルを使用して = " PDF "。GT123 バック グラウンドでエンコードされた情報を計算するコマンドです/Ccap3D GT123 pdf PDF 30 3 注: システムによってエンコードされた情報の推定は不確実性、密度推定の選択などの複数の光源による影響を受ける。アルゴリズムおよびサンプル サイズのバイアス。各アルゴリズムによって導入された組織的な先入観のサイズを評価する別の密度推定法を用いた 11.1 11.2 の手順を繰り返す必要があります。 サンプル サイズによる不確かさを推定する は、手順 11.1 11.2 から 1 〜 5 の間のグループの情報を再計算します。これら 5 つの独立したサンプリング データの 80% の間で変動情報推定に関するサンプル サイズの影響が反映されます。 の手順を使用して、情報を計算サンプル サイズ バイアスを修正する (手順 5) のようにデータの割合が増加する以上 11.1 11.2 (ジャック ナイフ法) 33. 12。冗長性、ノイズと信号相関の計算 相互情報量を計算する最大の情報の推定から得られた 使用、最適な入力分布 N 各ニューロンの入力と遺伝子発現との間。C++ ソース ファイル " GetMI1D.c " 共同確率分布から限界相互情報を取得するサンプル プログラムです。 チャネル容量を減算し、上記で入手した各ニューロンの相互情報の合計することで冗長性を計算します。 計算、" シャッフル " 情報言葉 13 , 34。C++ のテンプレート ソース ファイルで見つけることができます " GetShuffle.c ". 使用の " シャッフル " 信号とノイズの相関を計算する期間。シグナの我々 が持っている l 相関 、我々 が持っているノイズ相関 . の冗長性に不確実性ノイズを取得し、信号のデータの標準偏差 80% の複数採集から総情報 (前のセクションのステップ 11.3) に関しては相関します。