アミロイド組織イメージング ステンド グラス ハイパー スペクトルで発光共役オリゴチオフェンと共焦点顕微鏡と蛍光寿命イメージング

異常に折られた蛋白質のアミロイドへの堆積は、多くの病気プロセスのキー イベントです。細胞外のアミロイド a β ペプチドの構成、過リン酸化タウによって形成される細胞内の蛋白のもつれはアルツハイマー病患者の脳で発見されます。異なった蛋白質、例えばトランスサイレチン (TTR)、血清アミロイド A タンパク質 (SAA)、igg 抗体軽鎖ミスフォールドタンパクと中枢神経系の外組織のアミロイド沈着としてマニフェストの範囲。アミロイド堆積物が知られており、我々 はまだ以上の世紀の勉強不足かアミロイドの詳細な知識が、分子レベルでこのプロセスを防ぐために何を行うことができます堆積が開始されます。アルツハイマー病、アミロイドーシスのプロセスがどのように神経変性に関連付けられてであるかを裏付ける必要です。アミロイドーシスの治療法のミッションで 1 つのキーのクエストは小説を開発するアミロイドの発生、進行、および回帰; 監視のためのツールを微調整したがって対象となるアミロイド検出は鍵です。長い目で見れば、臨床診断感度および選択性アミロイド染色方法^7,15の増加からお越しの。この点で現在の課題は途方もなく、非常に活発な研究領域です。臨床開発、臨床試験の 1 つの主な問題は、予後診断です。これらの病気の可能性があります開始も症状が現れるが、そこの治療が病気の識別をする必要がありますを開始する前にします。ここで、感度は新規方法論の重要な側面です。さらに、いくつかのタンパク質の凝集体、有毒である、いくつかが、保護およびいくつか、中立的なために、この問題はさらに複雑です。したがって神経変性タンパク質の凝集疾患の多様性を報告した異種表現型を説明する集計別種の存在が示唆されているので、特定の集約型を監視する機能は不可欠です。例えば、プリオン蛋白質は、アミノ酸の同一の一次シーケンスことができます特定のプリオン株に上昇を与える個別の集計型に折り畳ま方法の典型的な例です。同様な多型は、a β ペプチド、α-シヌクレイン、タウに報告されています。この点で、LCOs は、異なる集計から光学割り当ての卓越したツールであると示されています。プリオン系統特異蛋白質を集約、いくつかの種類の全身性アミロイドーシスとして多型の a β は、たんぱく質とタウ凝集体は、LCOs のコンホメーション誘導光学現象により区別されています。

アミロイドの沈着は、分子の精密の生化学や生物物理学的方法と浸透しにくい組織で行われるイベントです。プローブ イベント前のヴィヴォ体内および体外同じ LCO 分子を使用する可能性体内で前のヴィヴォまたはを適用することは技術を使用して発生する解明のイベントのステージを設定します体外^11,17のサンプルします。最近報告された高分解能構造モデルを示して LCO 型米州自由貿易地域 (pFTAA) 結合すること 6 レジスタで平行 β ストランド¹⁸にわたる線維の軸と平行に整列側鎖によって形成された空洞であることを示す原子分解能 LCO ターゲットのエンティティに関する知識を得ることが可能です。本質的には pFTAA の結合共振器と結合モードはコンゴ赤¹⁹、反復的な正荷電 Lys 側鎖と並ぶ溝によって決まりますに似ています。LCOs の親和性は、コンゴ赤チェーンの柔軟性と疎水性空洞に向かってチオフェン環の硫黄原子の強いファンデルワールス相互作用による可能性が高いとより良い比較する表示されます。Prefibrillar 種 (ThT 応答) の前に^5,20の検出が表示されます繰り返し β シート、レジスタで並列-β ストランド、なる pFTAA よりも長い 2 つのチオフェンをされている hFTAA の構成に依存最大 8 β 鎖の交差に します。

汚損のプロトコルは、次の手順で撮影トラブルに注意を支払う必要があります: (i) 固定: 組織サンプルの豊富な固定できるアミロイド構造を混乱させるし、誘起蛍光スペクトルの変化を検出する可能性を制限hFTAA 分子の立体構造の歪み。新鮮凍結材料から凍結切片の軽度の固定は最適なスペクトル分解能を達成するために好まれる。ただし、hFTAA は染色し、アミロイドが減少効果とスペクトル変化少ない固定ティッシュの蛍光を発する。(ii) エピトープ露出: 抗体の結合のためにバインドする hFTAA のための能力を減らすかもしれない時折のエピトープの露出を達成するために組織の前処理は、アミロイド構造を中断します。これは問題、エピトープ露出は抗体の汚損のプロトコル、抗体の hFTAA の連続部分を使用して重要なステップ、それぞれ考えられます。(iii) overstaining: hFTAA は非常に敏感。作業ソリューションは、nM の低濃度に保つ必要があります。問題の背景を汚す場合 hFTAA の濃度が低下します。組織でスパース hFTAA をバインド要素では、hFTAA の過剰は集計でき、取り付け中に蓄積されます。これは、組織自体の焦点面ではない蛍光として認識されます。これが表示された場合は、カバー スリップ セクションのスライドすることができます、PBS で洗浄し、新鮮な取り付け中、新しいカバー スリップ マウントまで PBS でマウントされたスライドを浸します。(iv) フィルター ベース イメージング: ロングパス フィルターまたは複数検出チャンネルを使用してスペクトル大抵解決蛍光について述べる。hFTAA は、短いパス フィルターを使用しても監視できます。コントラストを削減し、複数の色を検出する可能性を廃止することを認識ください。

過去年にわたって明らかと研究ツール、蛍光 LCOs、hFTAA が非常に有望なプロパティを表示する、特になっています。結果は、様々 なタンパク質と病気の状態、血清アミロイド A、トランスサイレチン、免疫グロブリン軽鎖の全身性アミロイド (タウ、封入体筋炎) 細胞内凝集体の hFTAA 検出に至る実証されている (カッパとラムダ) seminogelin 1、プリオン蛋白質 (臨床サンプルを含む)²¹膵島アミロイドポリペプチド インスリン^7,15診断ツールとして hFTAA の実装の制限要因は、ルーチンのアミロイドの病理学研究所でその蛍光顕微鏡は広く使用されませんです。さらに、診療所で彼は容易に利用できません。ただし、hFTAA のアミロイド染色し、蛍光顕微鏡フィルター ベースの蛍光顕微鏡で臨床検査室で使用されているし、する必要があります。無料診断法として考慮されます。これは最近トランスサイレチン アミロイドーシス自動ファッション²²で蛍光性のための基本的な設定を使用して手根管生検で実証されました。

さらに、に加えて、各種のタンパク質 hFTAA 蛍光認識様々 な線維の種類と事前維アミロイド凝集体、例えば経路維種が検出され、特徴付けられます。この文書に 3 つの顕微鏡検査の技術を使用してさまざまなサンプルに 1 つ LCO を説明してきました。生体分子ターゲットの多彩な検出など、表面プラズモン共鳴 (SPR)²³で相互作用の記録と陽電子放出のカイネティックスの LCOs の開発に関する合成における構造制御の使用を許可しても断層レントゲン写真撮影 (ペット)²⁴。

これまでに 25 以上の異なる LCOs が公開されています。アミロイド イメージングの LCOs の使用の増加が増加するは、知識とこれら疾患に関連する集計の組み立て、分解、および臓器・存在している個人に干渉について理解します。