En Vivo Seguimiento de humanos derivados del adiposo células madre mesenquimales en un modelo de artrosis de rodilla de ratas con tinte fluorescente membrana lipofílica

Osteoartritis de rodilla (KOA) es un desorden degenerativo, resultantes de la pérdida de cartílago articular y la inflamación progresiva, que se ha convertido en una enfermedad crónica importante en los ancianos en el mundo¹. Sin embargo, los tratamientos actuales con fármacos antiinflamatorios, suplementos físicos y procedimientos quirúrgicos sólo pueden proporcionar alivio temporal de dolor sintomático².

Humanas derivado de adiposo células madre mesenquimales (haMSCs) se han convertido en un prometedor remedio regenerativo para la osteoartritis de la rodilla, debido a su diferenciación multipotent potencial para regeneración de cartílago e inmunomoduladores propiedades^{3, 4}. En comparación con vías farmacológicas para investigar mecanismos de acción en vivo, seguimiento de haMSCs vivo en modelos animales de pequeño KOA es actualmente instructivo para establecer la razón de ser de y la factibilidad de la terapia de haMSC antes de la aplicación clínica. Para las pruebas preclínicas, meniscectomy medial (MM) desestabiliza la carga mecánica de la articulación para inducir KOA en ratas, que ofrece un modelo relativamente factible con reproducibilidad constante⁵. La aparición de KOA inducida por MM es anterior a la transección del ligamento cruzado anterior sola o combinada con parcial meniscectomy intermedio⁶. Por lo tanto, las interacciones a largo plazo entre haMSCs inyectado con el microambiente patológico de KOA son a menudo evaluadas en ratas inducidas por MM^7,8.

Aunque la eficacia terapéutica de haMSCs ha sido ampliamente divulgado conocimiento relevante sobre la persistencia en vivo de haMSCs implantado mediante inyección intra-articular (IA) es escaso^9,10. Por lo tanto, distintos métodos de etiquetado celulares han sido desarrollados, incluyendo el immunohistology¹¹, luciferasa¹², transfección de¹³ proteína fluorescente verde, óxido de hierro de etiquetado para la proyección de imagen de resonancia magnética (MRI)¹⁴ y numerosas células fluorescentes tintes^8,15,16. Comparado con el análisis de la histología de la mano de obra intensiva, en vivo no invasivo la proyección de imagen emplea dispositivos ópticos para detectar la distribución en tiempo real y dinámica de las células etiquetadas con señales fluorescentes^10,17. Para la proyección de imagen funcional de células vivas, etiquetado fluorescente de cytocompatible es una técnica de sofisticado rastreo radioactivo libre para revelar actividades celulares después de trasplante de células madre¹⁸. Por otra parte, tintes lipofílicos fluorescentes multicoloras poseen ventajas sobre tintes hidrófilos amino reactivos o proteínas fluorescentes, incluyendo la permeabilidad de la célula mejorada y mayor fluorescencia cuántica rendimientos¹⁹.

Por lo tanto, los protocolos aquí utilizan un rojo láser para excitar las células etiquetadas con carbocyanines lipofílico hizo (DilC₁₈(5)), que es un far-red fluorescente Dil (dialkylcarbocyanines) analógico²⁰. Los espectros de excitación y emisión rojo-cambiado de puesto de evita autofluorescent interferencia y permite la proyección de imagen durante un largo período de tiempo en animales vivos⁸de tejidos profundos. Este método de seguimiento de células en vivo con que es válido para el monitoreo de células madre trasplantadas, tales como haMSCs, en modelos animales, que es esencial para entender y mejorar la actual terapia regenerativa con células madre.