Ca المتقدرية^{2 +} الاحتفاظ بالقدرات المقايسة و Ca^{2 +}--تسبب تورم المتقدرية الإنزيم

الميتوكوندريا هي الأجهزة الخلوية الرئيسية لإنتاج ما يقرب من 95 في المائة ATP تستخدمها الفسفرة في خلايا الثدييات. وأفيد أن يلتقيه micromolar تركيز Ca^{2 +} من الميتوكوندريا، ووجود ADP والفوسفات غير العضوية يمكن أن فوسفوريلاتي ADP إلى ATP توليف¹. عندما يذهب تركيز Ca سيتوسوليك^{2 +} عتبة، الميتوكوندريا يمكن امتصاص Ca^{2 +} سرعة وافلوكس ذلك ببطء. وهكذا، يمكن الميتوكوندريا الأداء تدفق زيادة سيتوسوليك Ca^{2 +}. لا صلة لها بالمشاركة في الفسفرة، كاليفورنيا المتقدرية^{2 +} أيضا المشاركة في إشارات الكالسيوم سيتوسوليك وتنشيط إليه apoptotic الميتوكوندريا بحمل فتح مبتب في الداخلية المتقدرية غشاء². وقد اعترف على نطاق واسع أن ارتفاع غير طبيعي في كاليفورنيا داخل الخلية^{2 +} يمكن أن تحدث تورم المتقدرية الضخمة عن طريق فتح مبتب³. وهكذا، وهذا البروتوكول يهدف إلى تقييم الوظيفة المتقدرية بقياس المتقدرية Ca^{2 +} الاحتفاظ بالقدرات و Ca^{2 +}-تسبب تورم المتقدرية.

Ca^{2 +} الاحتفاظ بالقدرات هو قياس قدرة الميتوكوندريا على امتصاص الكالسيوم سيتوسوليك. يمكن المخزن المؤقت الكالسيوم الحر سيتوسوليك الميتوكوندريا وتنظيم العمليات الخلوية المعتمدة على الكالسيوم عن طريق امتصاص الكالسيوم في شكل رواسب غير نشط. يحدث البصر Ca^{2 +} القدرة على الاحتفاظ في الإجهاد الظواهر المرتبطة بالحد من الطاقة والأعصاب حتى الأمراض^4،5. الميتوكوندريا المعزولة أو الخلايا بيرميبيليزيد ديجيتونين يمكن استخدامها لتحديد Ca^{2 +} الاحتفاظ بالقدرة، وقدرة مرتفعة على تراكم Ca^{2 +} من الميتوكوندريا المعزولة مع غلوتامات الإضافي ومآلات لا يتم عزل المتقدرية الداخلي⁶. ينبغي استخدام كمية معاير من ديجيتونين بيرميبيليزي في الأغشية البلازمية من أنواع مختلفة من الخلايا. ملح هيكسابوتاسيوم Ca^{2 +}-ملزمة صبغة الفلورسنت الخضراء، Ca^{2 +}-خلية إيمبيرمينت الحساسة تظهر مؤشر الضوء منفعل، كانت تستخدم على نطاق واسع⁷. Ca^{2 +}-ملزمة الخضراء صبغة الفلورسنت هو مؤشر تقارب منخفضة وتستخدم لإظهار أن داخل الخلايا الحرة Ca^{2 +} تركيزات يواصل الارتفاع خلال فترات طويلة (5 دقائق) التحفيز⁸. هذا الأسلوب هو أقل حساسية من تقنية تصفية المشعة ولكن تم تبسيطها إلى حد كبير. Ca إضافية^{2 +} يرفع fluorescence الكالسيوم الأخضر وترجع Ca^{2 +} امتصاص الميتوكوندريا الأسفار لخط الأساس. وقدمت إضافات متتالية من Ca^{2 +} حتى الميتوكوندريا فشل في امتصاص اكستراميتوتشوندريال Ca^{2 + 9}. يمكن استخدام قارئ ميكروسكوبية الأسفار لتقرير الأسفار الكالسيوم الخضراء باستمرار.

بعد Ca^{2 +} تراكم، depolarized الميتوكوندريا، إصدار Ca^{2 +} في المتوسط، وبدأ الإنتفاخ. Ca^{2 +}–تسبب تورم يستخدم للإشارة إلى افتتاح mPTP الميتوكوندريا. المجهر الإلكتروني، والانخفاض في امتصاص الضوء في 540 نانومتر يمكن استخدامها لقياس Ca^{2 +}-تسبب تورم المتقدرية^10،11. يمكن تحديد حجم الميتوكوندريا مباشرة بواسطة زاوية الأمام تشتت الضوء¹²، حيث تعكس انخفاض امتصاص سلبية تورم المتقدرية المصفوفة.

هنا، نحن توضيح المنهجية لدراسة المتقدرية Ca^{2 +} الاحتفاظ بالقدرات و Ca^{2 +}-تسبب تورم المتقدرية في الميتوكوندريا المعزولة من الخلايا SH-SY5Y.