La entrada de energía en biorreactores agitados puede medirse a través del esfuerzo de torsión que actúa sobre el eje impulsor durante la rotación. Este manuscrito describe cómo se puede utilizar un cojinete de aire efectivamente reducir las pérdidas por fricción en sellos mecánicos y mejorar la precisión de las mediciones de entrada potencia en vasos pequeños.
La entrada de energía en biorreactores agitados es un importante parámetro de escalado y puede medirse a través del esfuerzo de torsión que actúa sobre el eje impulsor durante la rotación. Sin embargo, la determinación experimental de la entrada de energía en los vasos pequeños es todavía un reto debido a las pérdidas por fricción relativamente alta interior típicamente usadas bujes, rodamientos o sellos del eje y la exactitud de los metros de par motor disponible en el mercado. Por lo tanto, solamente datos limitados para Biorreactores en pequeña escala, en particular de un solo uso sistemas, están disponibles en la literatura, haciendo difícil las comparaciones entre distintos sistemas de un solo uso y sus contrapartes convencionales.
Este manuscrito ofrece un protocolo sobre cómo medir entradas de alimentación en biorreactores de escala consiste en un amplio rango de condiciones de turbulencia, que puede ser descrito por el sin dimensiones número de Reynolds (Re). Las pérdidas por fricción mencionados se reducen con eficacia por el uso de un cojinete de aire. El procedimiento sobre cómo establecer, realizar y evaluar un poder basado en el esfuerzo de torsión de entrada medida, con especial énfasis en las condiciones de agitación típica de cultivo celular con bajo a moderado turbulencia (100 < Re < 2·104), se describe en detalle. El número adimensional de la potencia (también llamado número de Newton, P0), que se determina que en la gama de P0 ≈ 0,3 y P0 ≈ 4.5 para los números de Reynolds máximo proporciona la entrada de varios biorreactores de uso múltiple y de un solo uso en diferentes biorreactores.
Potencia de entrada es un parámetro clave de la ingeniería para la caracterización y escalamiento de biorreactores porque se relaciona con muchas operaciones de la unidad, tales como homogeneización1,2,3, dispersión gas-líquido2 , 4 , 5, de transferencia de calor6 y suspensión sólidos7. Entrada de energía se asocia también con la tensión de esquileo, que particularmente afectan crecimiento y formación de producto en corte célula sensible culturas8,9,10,11.
Las técnicas más comunes para la medición de la corriente en biorreactores agitados se basan en energía eléctrica drenaje12,13,14, calorimetría12,15 (es decir estacionaria calor equilibrio o calefacción dinámica a través de la agitación) o el par de apriete sobre el agitador. Este último puede ser determinado experimentalmente por dinamómetros, torquímetros o galgas, que se han aplicado para una variedad de mezcladores, incluyendo una o varias etapas Rushton turbinas1,16,17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25, dos aguas hoja impulsores19,20,23,26,27, InterMig19,21 y Scaba impulsores28 , 29. se proporciona una revisión detallada por Ascanio et al., (2004)30.
Desde el par (T), la entrada de potencia (P) puede estimarse de la ecuación 1, donde N es el número de revoluciones del agitador.
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Para explicar las pérdidas que ocurren en la agitación (en cojinetes, sellos y el motor sí mismo), el par efectivo (Teff) debe determinarse como la diferencia entre el valor medido en el recipiente vacío (TD) y en el líquido (TL ). Por último, el número adimensional de la potencia (P0, también conocido como número de Newton), que se define por la ecuación 2 donde ρL denota la densidad del líquido y d representa el diámetro del impulsor, se puede utilizar para comparar diferentes agitadores.
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Es bien sabido que el número de potencia es una función del número de Reynolds (es decir, la turbulencia) y se vuelve constante bajo condiciones totalmente turbulentas. El número de Reynolds del impulsor está definido por la ecuación 3, donde ηL es la viscosidad del líquido.
(3)
Sin embargo, medidas de entrada de potencia en biorreactores de pequeña escala son todavía un reto debido a las pérdidas por fricción relativamente alta dentro de cojinetes mecánicos del eje impulsor y la exactitud limitada de torquímetros más comercialmente disponibles. En consecuencia, solamente algunos informes sobre la energía de entrada medidas en escala de banco Biorreactores han sido publicaron17,18,22,24,31,32. También hay una falta de datos sobre la entrada de energía en un solo uso de biorreactores, que son entregados por los fabricantes montados, esterilizado y listo para su uso33,34. En contraste con sus contrapartes reutilizables, más de un solo uso Biorreactores se agitan por hélices especialmente diseñadas, dificultando las comparaciones.
Para cerrar esta brecha, un método fiable para medir entrada energía con especial énfasis en agitadores de la escala de laboratorio se ha desarrollado recientemente35. Los valores de par medidos en los vasos vacíos, que fueron causados por las pérdidas por fricción, efectivamente fueron reducidos por el uso de un cojinete de aire. En consecuencia, una amplia gama de condiciones de operación con baja a moderada turbulencia (100 < Re < 2·104) podría ser investigado y se ha previsto la entrada de varios biorreactores de uso múltiple y de un solo uso.
El presente estudio proporciona un protocolo de medición detallada del método previamente desarrollado y describe cómo establecer, realizar y evaluar una medida de entrada de energía par en biorreactores de escala de laboratorio. Especial atención es en sistemas comercialmente disponibles a solo y multi uso. Un procedimiento de medición automatizada se utiliza para reducir el esfuerzo experimental.
A pesar de la importancia de la alimentación (específica) para la caracterización de la ingeniería y scaling-up/down de biorreactores, sólo algunas publicaciones sobre investigaciones experimentales en biorreactores escala de banco, sobre todo de un solo uso sistemas en el rango de volumen de litros de un dígito, puede encontrarse en la literatura. Una de las razones para esta falta de datos puede verse en la dificultad de las mediciones de entrada exactos de la energía en tan pequeña escala. Con el fin de superar algunas de estas dificultades, el presente estudio proporciona un protocolo detallado para medidas entrada de par base de potencia que están soportadas por un cojinete de aire para reducir al mínimo las pérdidas por fricción en el cojinete. La aplicabilidad del método fue demostrada utilizando tres biorreactores de uso individual disponibles comercialmente como biorreactores de uso múltiple en escalas entre 1 L y el volumen de trabajo de 10 L.
Basándonos en nuestra experiencia con las mediciones de par base, son los factores más importantes a la dirección: 1) reducir el par de muertos reduciendo al mínimo las pérdidas por fricción en los cojinetes y de sellos, en particular en laboratorio escala biorreactores y 2) la selección de un medidor de par adecuado para las condiciones de agitación y tamaño deseado del biorreactor. Como ha sido demostrado anterior35, el par de muertos puede reducirse dramáticamente por el uso de un cojinete de aire. En el presente estudio, se utilizó un buje de aire de bajo costo de material de carbón poroso. El esfuerzo de torsión residual en los vasos vacíos probado fueron típicamente por debajo de 0,5 mN·m con índices de agitación de hasta 900 rpm, correspondientes a las velocidades de punta de impulsor de 3 m·s-1. En cambio, el par de muertos del biorreactor #6 con el rodamiento de eje mecánico incorporado fue, por ejemplo, entre mN·m 9,4 y 20 mN·m, y valores comparables de alrededor de 3 mN·m se han reportado también para el biorreactor #732. Se trata de un orden de magnitud superior a los valores obtenidos en la configuración experimental propuesta.
Además el cojinete de aire, el medidor de esfuerzo de torsión utilizado es el componente más crítico. Un medidor de par motor disponible en el mercado que está diseñado para medir esfuerzo de torsión estático y dinámico, velocidad de rotación y ángulo de la rotación fue seleccionado para este estudio. Teniendo en cuenta los Biorreactores de interés con volúmenes de trabajo máximos de 10 L y los agitadores correspondientes, fue elegido un par nominal de 0.2 N·m. Se encontró que alta reproducibilidad con la desviación estándar relativa de replica < 5% y se pueden obtener mediciones fiables para pares eficaces como mN·m 2, correspondiente a sólo el 1% del esfuerzo de torsión nominal. Por lo tanto, el rango de medición del sensor aplicado en el presente estudio fue significativamente mayor que los resultados que se han publicado basados en un estudio interlaboratorio de los miembros del grupo de trabajo alemán GVC-VDI en mezcla41.
Sin embargo, la gama de la velocidad del agitador debe seleccionarse cuidadosamente con respecto a la resolución del sensor de par, el par nominal y formación de vórtice. Este último con frecuencia ocurre en unbaffled Biorreactores agitados a altas velocidades y puede causar daños al medidor de esfuerzo de torsión. Tanto las velocidades de mínimo y máximo agitador factibles pueden ser limitantes del método descrito en este estudio. Además de nuestro anterior trabajo35, este estudio también participan el biorreactor #3, el miembro más pequeño en la familia de biorreactor de vidrio suministrado por el fabricante, que es agitado por dos etapas hélices con un diámetro de 42 mm. Una característica de potencia comparable a en el biorreactor geométricamente similar #4 se obtuvo con la configuración experimental presentada. Esto es notable puesto que el par de escalas con M d5 densidad líquida dada, geometría del impulsor (es decir número de energía) y velocidad de rotación (ver ecuación 1 y ecuación 2). En consecuencia, un aproximadamente 40% menor par de impulsor resulta de un diámetro de impulsor más pequeño de 10%, por ejemplo. Sin embargo, velocidades de rotación más alto en la escala de 1 L que en la escala de 2 L se requiere durante la operación para resolver el par producido con el medidor de par disponible. Por los deflectores incorporados del biorreactor #3, no se observó ninguna formación de vortex, pero esto puede convertirse en un problema con los vasos unbaffled. Hay que destacar que la constante en las cifras de potencia que se encontraron entre las dos escalas puede causar errores de medición causados por la resolución del sensor limitado (además de las diferencias geométricas). Otras investigaciones están obligadas a sacar conclusiones finales sobre la escala mínima a la que la configuración propuesta es todavía factible.
Sin embargo, el mismo protocolo fue utilizado para la medición de entrada de potencia en varios vasos de vidrio de distintos fabricantes con volúmenes de trabajo de entre 1 L y 10 L en nuestro laboratorio. Esto pone de relieve la transferabilidad del método utilizado para la caracterización de los sistemas del biorreactor diferentes. El esfuerzo experimental podría reducirse de mediciones automatizadas mediante la gestión de la receta dentro de la automatización proporcionada por el software de la unidad de control y el tratamiento automatizado de datos basado en el universal lenguaje de Matlab.
Además, debe señalarse que, mediante el uso de la sacarosa que contiene, medios económicos modelo newtoniano, un número de gran rango de Reynolds (100 < Re < 6·104), dependiendo de la escala y agitador, fue cubierto. Hay que destacar también que el límite inferior de la gama de turbulencia es generalmente irrelevante para cultivos de células animales con agua-como los medios de comunicación, incluso si se utilizan velocidades de rotor muy bajo. Sin embargo, aumentos significativos en la viscosidad del caldo, que se traduce en el comportamiento de amortiguación e incluso no-newtonianos de turbulencia se han descrito para hongos – y culturas basadas en células de la planta. Por ejemplo, viscosidad aparente en las culturas de la planta de hasta 400-fold en comparación con el agua ha sido reportado42, que conduce a mucho más bajos números de Reynolds.
Por último, utilizando el biorreactor #7 como un primer estudio de caso, se ha demostrado que puede utilizarse la configuración experimental propuesta para estudiar el efecto de modificaciones de diseño en la entrada de energía a escala de laboratorio. En combinación con técnicas de prototipado rápido, esto puede ser una poderosa herramienta para estudios de diseño de impulsor, que se forman parte de la labor futura.
The authors have nothing to disclose.
Los autores desean agradecer a Dieter Häussler y Gautschi Beat por su ayuda durante el juego experimental para arriba. Agradecemos también a Caroline Hyde inglés prueba de lectura.
T20WN torque meter | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Nominal torque 0.2 Nm | |
Spider-8 | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
HBM Spider8 is no longer available for sale. QuantumX DAQ system (especially the QuantumX modules MX840A and MX440A) are recommended. |
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Catman easy software | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Version 4.2.2 | |
Air bearing | IBS precision engineering | 13 mm air bushing | |
Stainless steel impeller shaft | Bioengineering AG | Shaft tolerance -0.0076 mm | |
Brushless motor AKM2 | Kollmorgen | ||
Metal bellow coupling | Uiker AG | ||
Finesse RDPDmini control unit | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | No longer supported (the replacement product G3Lab universal controller can be used) | |
Sucrose | Migros Schweiz AG | Food grade | |
Matlab software | Mathworks | Version R2017a | |
Finesse μTruBio PC software | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | Version 3.1 (no longer supported) | |
SmartGlass 1L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 1L in Table 2 | |
SmartGlass 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 3L in Table 2 | |
SmartVessel 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
Mobius CellReady 3L | Merck Millipore | referred to as Cell Ready Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
UniVessel SU 2L | Sartorius Stedim Biotech | referred to as Single-Use 2L Bioreactor in Table 2 |