A entrada do poder em biorreatores mexidas pode ser medida através do torque que age no eixo do rotor durante a rotação. Este manuscrito descreve como um rolamento de ar pode ser usado para efetivamente reduzir as perdas de atrito observadas em selos mecânicos e melhorar a precisão das medições entrada de energia em pequenos vasos.
A entrada do poder em biorreatores mexidas é um parâmetro importante de expansão e pode ser medida através do torque que age no eixo do rotor durante a rotação. No entanto, a determinação experimental da entrada de energia em pequenos vasos é ainda um desafio devido a perdas relativamente alta fricção dentro normalmente usadas buchas, mancais e/ou vedações do eixo e a precisão dos medidores de binário disponível comercialmente. Assim, apenas dados limitados para biorreatores, sistemas de uso único em particular, estão disponíveis na literatura, dificultando as comparações entre diferentes sistemas de uso único e suas contrapartes convencionais.
Este manuscrito fornece um protocolo sobre como medir as entradas de energia em biorreatores de escala de bancada em uma ampla gama de condições de turbulência, que pode ser descrito pelo número adimensional de Reynolds (Re). As perdas de atrito acima mencionados são efetivamente reduzidas pelo uso de um rolamento de ar. O procedimento sobre como definir, conduzir e avaliar uma alimentação baseada em binário de entrada medição, com foco especial em condições de agitação típica de cultura de células com baixa a moderada turbulência (100 < Re < 2,104), é descrito em detalhes. A entrada de energia de vários biorreatores multi-uso e uso único é fornecida pelo poder adimensional número (também chamado de número de Newton, P0), que é determinado para ser no intervalo de P0 ≈ 0,3 e P0 ≈ 4.5 para os números de Reynolds máximos em biorreatores os diferentes.
Entrada de energia é um parâmetro de engenharia chave para a caracterização e o dimensionamento do biorreatores porque se relaciona com muitas operações unitárias, tais como homogeneização1,2,3, dispersão de gás-líquido2 , 4 , 5, de transferência de calor6 e suspensão sólido7. Entrada de energia é também associada a tensão de cisalhamento, o que pode particularmente afeta crescimento e formação de produto em cisalhamento células sensíveis culturas8,9,10,11.
As técnicas mais comuns para a medição da potência entrada em biorreatores mexidas baseiam-se na energia elétrica desenhar12,13,14, Calorimetria12,15 (ou seja, estacionária calor equilíbrio ou aquecimento dinâmico através da agitação) ou o torque sobre o agitador. Este último pode experimentalmente determinado pelo dinamômetros, medidores de torque ou extensómetros, que tem sido aplicados para uma variedade de agitadores, incluindo simples ou multi-estágio Rushton turbinas1,16,17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25, lâmina arremessada impulsores19,20,23,26,27, InterMig19,21 e Scaba impulsores28 , 29. uma revisão detalhada é fornecida por Ascanio et al (2004)30.
Do torque (T), a entrada de poder (P) pode ser estimada da EQ. 1, onde N é a velocidade de rotação do agitador.
(1)
Para dar conta perdas ocorrendo na agitação (em rolamentos, vedações e o motor em si), o torque eficaz (TFEP) deve ser determinado como a diferença entre o valor medido no recipiente vazio (TD) e no líquido (TL ). Finalmente, o número adimensional poder (P0, também conhecido como número de Newton), que é definido pela EQ. 2 onde ρL denota a densidade líquida e d representa o diâmetro do rotor, pode ser usado para comparar diferentes agitadores.
(2)
É sabido que o número de potência é uma função do número de Reynolds (ou seja, a turbulência) e torna-se constante em condições totalmente turbulentas. O número de Reynolds do impulsor é definido pela EQ. 3, onde ηL é a viscosidade do líquido.
(3)
Não obstante, as medições de entrada de energia em biorreatores de pequena escala são ainda um desafio devido às perdas relativamente alta fricção dentro mecânicos rolamentos dos eixos do rotor e a precisão limitada de medidores de binário mais comercialmente disponível. Consequentemente, apenas alguns relatos sobre o poder de entrada medições na escala de bancada biorreatores foram publicados17,18,22,24,31,32. Há também uma falta de dados sobre a entrada de energia em biorreatores de uso único, que são entregues pelos fabricantes preassembled, esterilizado e pronto para usar33,34. Ao contrário de suas contrapartes reutilizáveis, a maioria dos biorreatores de uso único são agitados por turbinas especialmente projetadas, dificultando as comparações.
A fim de colmatar esta lacuna, um método confiável para medições de entrada de energia com foco especial em agitadores de escala de laboratório foi desenvolvido recentemente35. Os valores de torque medidos nos vasos vazios, causados pelas perdas de fricção, efetivamente foram reduzidos pelo uso de um rolamento de ar. Por conseguinte, uma ampla gama de condições operacionais com baixa a moderada turbulência (100 < Re < 2,104) poderia ser investigado e a entrada de energia de vários biorreatores multi-uso e uso único foi fornecida.
O presente estudo fornece um protocolo de medição detalhada do método previamente desenvolvido e descreve como definir, conduzir e avaliar uma medição de entrada de energia baseado em binário em biorreatores de escala de laboratório. Foco especial é comercialmente disponíveis sistemas de reutilização de single e multi. Um procedimento de medição automatizado é usado para reduzir o esforço experimental.
Apesar da importância da entrada de energia (específico) para a caracterização de engenharia e dimensionamento-up/down de biorreatores, apenas algumas publicações sobre investigações experimentais em biorreatores de escala de bancada, particularmente uso único sistemas na faixa de volume de litros de um dígito, podem ser encontrados na literatura. Uma das razões para esta falta de dados pode ser vista nas dificuldades de entrada medições precisas poder tais escalas pequenas. Para superar algumas destas dificuldades, o presente estudo fornece um protocolo detalhado para binário com base poder entrada as medições que é suportados por um rolamento de ar para minimizar as perdas de atrito no rolamento. A aplicabilidade do método foi demonstrada usando três biorreatores de uso único comercialmente disponíveis, bem como biorreatores de multi-uso em escalas entre 1 L e o volume de trabalho de 10 L.
Baseado em nossa experiência com as medições de torque com base, são os fatores mais críticos para o endereço: 1) reduzindo o torque morto, minimizando as perdas de fricção dentro os rolamentos e vedações, em particular no laboratório escala biorreatores e 2) a seleção de um Torquímetro apropriado para as condições de tamanho e agitação de biorreator desejado. Como foi demonstrado anteriormente35, o torque morto pode ser drasticamente reduzido pelo uso de um rolamento de ar. No presente estudo, utilizou-se uma bucha de ar de baixo custo, feita de material poroso de carbono. O torque residual nos vasos vazios testados eram tipicamente abaixo de 0.5 mN·m com taxas de agitação de até 900 rpm, correspondente às velocidades de ponta de rotor de até 3 s-1. Em contraste, o torque morto de bioreator #6 com o rolamento do eixo mecânico interno foi, por exemplo, entre mN·m 9.4 e 20 mN·m, e valores comparáveis de cerca de 3 mN·m também foram relatados para o biorreator #732. Isto é sobre uma ordem de magnitude maior do que os valores obtidos na configuração experimental da proposta.
Além do rolamento de ar, o torquímetro utilizado é o componente mais importante. Um medidor de binário comercialmente disponível que é projetado para medir o torque de estática e dinâmica, velocidade de rotação e ângulo de rotação foi selecionado para este estudo. Considerando os biorreatores de interesse, com volumes de trabalho máximo de 10 L e os agitadores correspondentes, um torque nominal de 0,2 nm foi escolhido. Verificou-se que grande reprodutibilidade com desvio-padrão relativo de Replica < 5% e medições fiáveis podem ser obtidas para tão baixo quanto mN·m 2, correspondendo a apenas 1% do torque nominal eficaz torques. Portanto, a faixa de medição do sensor aplicado no presente estudo foi significativamente maior do que os resultados que foram publicados com base em um estudo interlaboratorial dos membros do grupo alemão GVC-VDI na mistura de41.
No entanto, a escala da velocidade do agitador deve ser cuidadosamente selecionada em relação a resolução do sensor de torque, o torque nominal e formação de vórtice. Este último muitas vezes ocorre em biorreatores unbaffled agitados em velocidades mais altas e pode causar danos para o torquímetro. Ambas as velocidades mínima e máxima viável agitador podem estar limitando fatores do método descrito neste estudo. Além de nossa anterior trabalho35, este estudo envolveu também o biorreator #3, o menor membro da família de biorreator de vidro fornecido pelo fabricante, que é agitado por rotores de dois estágios com 42 mm de diâmetro. Uma característica de poder comparável àquele em bioreator geometricamente semelhante #4 foi obtida com a instalação experimental apresentada. Isto é notável, desde que o torque pode ser dimensionado com M d5 para uma determinada densidade líquida, geometria de rotor (ou seja, número de poder) e velocidade de rotação (ver EQ. 1 e EQ. 2). Por conseguinte, um aproximadamente 40% mais baixo torque rotor resulta de um diâmetro de rotor 10% menor, por exemplo. No entanto, as velocidades de rotação mais elevadas na escala de 1 L, do que na escala de 2 L foram necessárias durante a operação para resolver o torque produzido com o torquímetro disponível. Devido as chicanas internas de bioreator #3, observou-se sem formação de vórtice, mas isso pode se tornar um problema com os navios unbaffled. Deve-se ressaltar que a constante deslocamento nos números de potência que foi encontrados entre as duas escalas poderia resultar de imprecisões de medição causadas por resolução do sensor limitada (para além das diferenças geométricas). Investigações são necessárias para tirar conclusões finais na escala mínima em que a instalação proposta é ainda viável.
No entanto, o mesmo protocolo foi usado para as medições de entrada de energia em vários vasos de vidro de diferentes fabricantes, com volumes de trabalho de entre 1 L e 10 L em nosso laboratório. Isto ressalta a possibilidade de transferência do método utilizado para a caracterização de sistemas diferentes do biorreator. O esforço experimental poderia ser reduzido por medições automatizadas usando o gerenciamento de receita, dentro do sistema de automação fornecidos pelo software da unidade de controle e o tratamento automatizado de dados baseada na linguagem universal do Matlab.
Além disso, note-se que, usando-se a sacarose que contém, mídia barato modelo Newtoniano, números uma ampla gama de Reynolds (100 < Re < 6·104), dependendo do agitador e escala, estava coberto. Também ressalta-se que o limite inferior do intervalo de turbulência é geralmente irrelevante para culturas de células animais com água-como a mídia, mesmo se impulsor muito baixas velocidades são usadas. No entanto, aumentos significativos na viscosidade caldo, que resulta em comportamento de amortecimento e até mesmo não-newtonianos turbulência foram descritos para fungos – e plantar culturas baseada em célula. Por exemplo, Viscosidade aparente nas culturas de plantas de até 400-fold comparado a água ter sido relatado42, que leva a muito menor números de Reynolds.
Finalmente, usando o biorreator #7 como um primeiro estudo de caso, foi demonstrado que a instalação experimental proposta pode ser usada para estudar o efeito de modificações de projeto sobre a entrada de energia em escala de laboratório. Em combinação com técnicas de prototipagem rápida, esta pode ser uma poderosa ferramenta para estudos de desenho do impulsor, que formará partes do trabalho futuro.
The authors have nothing to disclose.
Os autores gostaria agradecer Häussler Dieter e Gautschi bater sua assistência durante o conjunto experimental acima. Agradecemos também a Caroline Hyde inglês prova lendo.
T20WN torque meter | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Nominal torque 0.2 Nm | |
Spider-8 | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
HBM Spider8 is no longer available for sale. QuantumX DAQ system (especially the QuantumX modules MX840A and MX440A) are recommended. |
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Catman easy software | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Version 4.2.2 | |
Air bearing | IBS precision engineering | 13 mm air bushing | |
Stainless steel impeller shaft | Bioengineering AG | Shaft tolerance -0.0076 mm | |
Brushless motor AKM2 | Kollmorgen | ||
Metal bellow coupling | Uiker AG | ||
Finesse RDPDmini control unit | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | No longer supported (the replacement product G3Lab universal controller can be used) | |
Sucrose | Migros Schweiz AG | Food grade | |
Matlab software | Mathworks | Version R2017a | |
Finesse μTruBio PC software | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | Version 3.1 (no longer supported) | |
SmartGlass 1L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 1L in Table 2 | |
SmartGlass 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 3L in Table 2 | |
SmartVessel 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
Mobius CellReady 3L | Merck Millipore | referred to as Cell Ready Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
UniVessel SU 2L | Sartorius Stedim Biotech | referred to as Single-Use 2L Bioreactor in Table 2 |