La potenza assorbita in bioreattori agitate può essere misurata attraverso la coppia che agisce sull’albero della girante durante la rotazione. Questo manoscritto descrive come un cuscinetto di aria può essere utilizzato per ridurre le perdite per attrito osservate in tenute meccaniche efficacemente e migliorare la precisione delle misurazioni della potenza ingresso nei piccoli vasi.
La potenza assorbita in bioreattori agitate è un importante parametro di scalabilità verticale e può essere misurata attraverso la coppia che agisce sull’albero della girante durante la rotazione. Tuttavia, la determinazione sperimentale dell’input di potere in piccoli vasi è ancora difficile a causa di perdite di attrito relativamente alta all’interno in genere usate boccole, cuscinetti e/o tenute e la precisione di torsiometri commercialmente disponibili. Così, solo i dati limitati per bioreattori in piccola scala, sistemi monouso in particolare, sono disponibili in letteratura, rendendo difficile il confronto tra diversi sistemi monouso e le loro controparti convenzionali.
Questo manoscritto fornisce un protocollo su come misurare gli ingressi di alimentazione in bioreattori scala benchtop sopra una vasta gamma di condizioni di turbolenza, che può essere descritto dal numero di Reynolds adimensionale (Re). Le perdite di attrito di cui sopra sono ridotti in modo efficace mediante l’uso di un cuscinetto di aria. La procedura su come impostare, condurre e valutare un’alimentazione basata su coppia misura, con particolare attenzione alle condizioni di agitazione tipico di coltura delle cellule con bassa a moderata turbolenza in ingresso (100 < Re < 2·104), è descritto in dettaglio. L’alimentazione di diversi bioreattori multi-uso e monouso è fornito dal numero adimensionale potenza (chiamato anche numero di Newton, P0), che è determinato per essere nella gamma di P0 ≈ 0,3 e P0 ≈ 4.5 per i massimi numeri di Reynolds nei bioreattori differenti.
Potenza in ingresso è un parametro chiave di ingegneria per la caratterizzazione e la scalabilità di bioreattori perché si riferisce a numerose operazioni di unità, quali omogeneizzazione1,2,3, dispersione di gas-liquido2 , 4 , 5, calore trasferimento6 e sospensione solido7. Potenza in ingresso è associato anche con sollecitazione di taglio, che può in particolare effetto crescita e formazione di prodotto nel taglio delle cellule sensibili culture8,9,10,11.
Le tecniche più comuni per la misurazione della potenza assorbita in bioreattori agitate sono basati su energia elettrica disegno12,13,14, calorimetria12,15 (calore, cioè fisso equilibrio o riscaldamento dinamico attraverso l’agitazione) o la coppia al momento l’agitatore. Quest’ultimo può essere determinato sperimentalmente da dinamometri, torsiometri o estensimetri, che sono stati applicati per una varietà di agitatori, tra cui singole o multi-fase Rushton turbine1,16,17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25, tetto spiovente lama giranti19,20,23,26,27, InterMig19,21 e Scaba giranti28 , 29. una revisione dettagliata è fornita da Ascanio et al (2004)30.
Dalla coppia (T), la potenza in ingresso (P) può essere stimato da EQ. 1, dove N è la velocità di rotazione dell’agitatore.
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Al fine di tener conto delle perdite che si verificano nell’agitazione (in cuscinetti, guarnizioni e il motore stesso), la coppia effettiva (TFEP) dovrebbe essere determinata come differenza tra il valore misurato nel recipiente vuoto (TD) e nel liquido (TL ). Infine, il numero adimensionale potenza (P0, noto anche come numero di Newton), che è definito da EQ. 2 dove ρL denota la densità del liquido e d rappresenta il diametro della girante, utilizzabile per confrontare diversi agitatori.
(2)
È ben noto che il numero di potenza è una funzione del numero di Reynolds (cioè la turbolenza) e diventa costante in condizioni completamente turbolente. La girante numero di Reynolds è definita da EQ. 3, dove ηL è la viscosità del liquido.
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Tuttavia, misure di input di potere in bioreattori su piccola scala sono ancora impegnative a causa le perdite di attrito relativamente alta all’interno di cuscinetti meccanici degli alberi girante e la precisione limitata di torsiometri più commercialmente disponibili. Di conseguenza, soltanto alcuni rapporti sulla potenza ingresso misure in scala di benchtop bioreattori sono stati pubblicati17,18,22,24,31,32. C’è anche una mancanza di dati circa la potenza assorbita in bioreattori monouso, che vengono consegnati dai produttori preassemblati, sterilizzato e ready-to-use33,34. Contrariamente alle loro controparti riutilizzabili, maggior parte dei bioreattori monouso sono agitati da giranti appositamente progettati, rendendo difficile il confronto.
Al fine di colmare questa lacuna, un metodo affidabile per misure di potenza ingresso con focus particolare su Agitatori da laboratorio scala è stato sviluppato recentemente35. I valori di coppia misurati nei vasi vuoti, che sono stati causati da perdite di attrito, sono stati ridotti in modo efficace mediante l’uso di un cuscinetto di aria. Di conseguenza, una vasta gamma di condizioni operative con bassa turbolenza moderata (100 < Re < 2·104) potrebbe essere studiato e l’alimentazione di diversi bioreattori multi-uso e monouso è stato fornito.
Il presente studio fornisce un protocollo di misura dettagliata del metodo precedentemente sviluppato e viene descritto come impostare, condurre e valutare una misura di ingresso alimentazione basata su coppia in bioreattori di scala di laboratorio. Particolare attenzione è su sistemi single – e multi – uso commercialmente disponibili. Una procedura di misura automatizzati è utilizzata per ridurre lo sforzo sperimentale.
Nonostante l’importanza dell’input di potere (specifico) per la caratterizzazione ingegneristica e scaling-up/down di bioreattori, solo poche pubblicazioni su indagini sperimentali in bioreattori per bilancia da banco, particolarmente monouso sistemi nella una cifra litro range di volume, può essere trovato nella letteratura. Uno dei motivi per questa mancanza di dati può essere visto nelle difficoltà di misure ingresso alimentazione accurata di tali piccole squame. Al fine di superare alcune di queste difficoltà, lo studio presente fornisce un protocollo dettagliato per misure di input potenza coppia basata che sono supportate da un cuscinetto di aria per ridurre al minimo le perdite di attrito del cuscinetto. L’applicabilità del metodo è stata dimostrata utilizzando tre commercialmente disponibili monouso bioreattori così come multi-uso bioreattori in scale tra 1L e volume di lavoro di 10 L.
Basandoci sulla nostra esperienza con le misure di coppia basato, i fattori più critici all’indirizzo sono: 1) riduce la coppia di morta riducendo al minimo le perdite di attrito all’interno i cuscinetti e le guarnizioni, in particolare nel laboratorio scala bioreattori e 2) la selezione di un Misuratore di coppia adatto per le condizioni di dimensione e agitazione di bioreattore desiderata. Come è stato dimostrato precedenti35, la coppia morta può essere drasticamente ridotto mediante l’uso di un cuscinetto di aria. Nello studio presente, una boccola di aria basso costo materiale poroso carbonio è stata utilizzata. La coppia residua nei vasi vuoti testati erano in genere sotto 0,5 MN · m con tassi di agitazione fino a 900 giri/min, corrispondente alla velocità di punta di girante di fino a 3 relativa-1. Al contrario, la coppia morta del bioreattore #6 con il cuscinetto albero meccanico incorporato era, per esempio, tra 9,4 MN · m e 20 MN · m, e i valori comparabili di circa 3 MN · m inoltre sono stati segnalati per il bioreattore #732. Si tratta di circa un ordine di grandezza superiore rispetto i valori ottenuti nel setup sperimentale proposto.
Oltre il cuscinetto di aria, il misuratore di coppia utilizzato è il componente più critico. Un misuratore di coppia disponibili in commercio che è stato progettato per la misura statica e dinamica di coppia, velocità di rotazione e angolo di rotazione è stato selezionato per questo studio. Considerando i bioreattori di interesse con volumi di lavoro massimi di 10 L e gli agitatori corrispondenti, una coppia nominale di 0.2 Nm è stato scelto. È stato trovato che un’elevata riproducibilità con deviazione standard relativa di replica < 5% e misurazioni affidabili possono essere ottenute per coppie efficace à partir 2 MN · m, corrispondente al solo 1% della coppia nominale. Quindi, il campo di misura del sensore applicato nello studio presente era significativamente più ampio di risultati che sono stati pubblicati sulla base di un studio interlaboratorio dei membri del gruppo di lavoro tedesco GVC-VDI41di miscelazione.
Tuttavia, la gamma della velocità agitatore deve essere accuratamente scelte per quanto riguarda la risoluzione del sensore di coppia, la coppia nominale e la formazione di vortice. Quest’ultimo spesso si verifica in bioreattori unbaffled agitati a velocità più elevate e può causare danni per il misuratore di coppia. Entrambe le velocità minime e massime realizzabili agitatore possono essere limitante fattori del metodo descritto in questo studio. Oltre al nostro precedente lavoro35, questo studio inoltre coinvolto il bioreattore #3, il membro più piccolo in famiglia di bioreattore vetro fornito dal produttore, che è agitato da due stadi giranti con diametro di 42 mm. Una caratteristica di potenza paragonabile a quella nel bioreattore geometricamente simile #4 è stata ottenuta con la messa a punto sperimentale presentato. Questo è importante in quanto la coppia di bilance con M d5 per una determinata densità di liquido, geometria della girante (cioè numero di potenza) e velocità di rotazione (Vedi EQ. 1 ed EQ. 2). Di conseguenza, una coppia girante inferiore a circa il 40% deriva da un 10% più piccolo diametro della girante, per esempio. Tuttavia, velocità di rotazione più elevati nella scala 1 L rispetto alla scala di 2L sono stati richiesti durante il funzionamento per risolvere la coppia prodotta con il misuratore di coppia disponibile. Dovuto i deflettori incorporati del bioreattore #3, nessuna formazione di vortice è stata osservata, ma questo può diventare un problema con i vasi unbaffled. Va sottolineato che la costante offset i numeri di potenza che è stata trovata fra le due scale possa derivare da imprecisioni di misura causati dalla risoluzione del sensore limitato (oltre alle differenze geometriche). Ulteriori indagini sono necessarie per trarre conclusioni definitive su scala minima alla quale la configurazione proposta è ancora fattibile.
Tuttavia, lo stesso protocollo è stato utilizzato per misure di input di potere in vari vasi di vetro di diversi produttori con volumi di lavoro di tra 1 e 10 litri nel nostro laboratorio. Ciò evidenzia la trasferibilità del metodo usato per la caratterizzazione di sistemi diversi bioreattore. Lo sforzo sperimentale potrebbe essere ridotto da misure automatizzate utilizzando la gestione delle ricette all’interno il sistema di automazione fornito dal software di unità di controllo e il trattamento automatizzato di dati basato su linguaggio Matlab universale.
Inoltre, va notato che, utilizzando il saccarosio contenenti, supporti economici modello newtoniano, un vasta gamma di Reynolds numeri (100 < Re < 6·104), a seconda dell’agitatore e scala, è stato coperto. Va inoltre sottolineato che il limite inferiore del campo di turbolenza è solitamente irrilevante per colture cellulari animali con acqua-come media, anche se vengono utilizzate velocità girante molto basso. Tuttavia, un aumento significativo della viscosità di brodo, che si traduce nel comportamento di smorzamento e anche non-newtoniani di turbolenza è state descritte per funghi – e culture basate sulle cellule della pianta. Per esempio, viscosità apparente in colture vegetali di fino a 400-fold rispetto all’acqua sono stati segnalati42, che conduce a molto più bassi numeri di Reynolds.
Infine, utilizzando il bioreattore #7 come un primo caso di studio, è stato dimostrato che la messa a punto sperimentale proposto può essere utilizzato per studiare l’effetto delle modifiche di progetto sulla potenza assorbita a scala di laboratorio. In combinazione con tecniche di prototipazione rapida, questo può essere un potente strumento per gli studi di progettazione girante, facenti parti del lavoro futuro.
The authors have nothing to disclose.
Gli autori vorrei ringraziare Dieter Häussler e battere Gautschi per la loro assistenza durante il set sperimentale fino. Siamo grati anche a Caroline Hyde per inglese correzione di bozze.
T20WN torque meter | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Nominal torque 0.2 Nm | |
Spider-8 | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
HBM Spider8 is no longer available for sale. QuantumX DAQ system (especially the QuantumX modules MX840A and MX440A) are recommended. |
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Catman easy software | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Version 4.2.2 | |
Air bearing | IBS precision engineering | 13 mm air bushing | |
Stainless steel impeller shaft | Bioengineering AG | Shaft tolerance -0.0076 mm | |
Brushless motor AKM2 | Kollmorgen | ||
Metal bellow coupling | Uiker AG | ||
Finesse RDPDmini control unit | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | No longer supported (the replacement product G3Lab universal controller can be used) | |
Sucrose | Migros Schweiz AG | Food grade | |
Matlab software | Mathworks | Version R2017a | |
Finesse μTruBio PC software | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | Version 3.1 (no longer supported) | |
SmartGlass 1L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 1L in Table 2 | |
SmartGlass 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 3L in Table 2 | |
SmartVessel 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
Mobius CellReady 3L | Merck Millipore | referred to as Cell Ready Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
UniVessel SU 2L | Sartorius Stedim Biotech | referred to as Single-Use 2L Bioreactor in Table 2 |