Die Leistungsaufnahme in gerührten Bioreaktoren kann durch das Drehmoment gemessen werden, die während der Drehung auf das Laufrad Welle fungiert. Dieses Manuskript wird beschrieben, wie ein Luftlager verwendet werden kann, um effektiv reduzieren Reibungsverluste in Gleitringdichtungen beobachtet und verbessert die Genauigkeit der Eingabe Leistungsmessungen in kleinen Gefäßen.
Die Leistungsaufnahme in gerührten Bioreaktoren ist ein wichtiger Parameter der Skalierung und durch das Drehmoment, das während der Drehung auf das Laufrad Welle wirkt gemessen werden kann. Allerdings ist die experimentelle Bestimmung der Leistungsaufnahme in kleinen Gefäßen aufgrund relativ hohe Reibungsverluste im Inneren in der Regel verwendeten Buchsen, Lager und/oder Wellendichtungen und die Genauigkeit von kommerziell verfügbaren Drehmoments m immer noch eine Herausforderung. So gibt es nur begrenzte Daten für kleinräumige Bioreaktoren, insbesondere Single-Use-Systeme in der Literatur, erschwert Vergleiche zwischen verschiedenen Single-Use-Systeme und ihre konventionellen Pendants.
Diese Handschrift enthält ein Protokoll zum Netzeingänge in Bioreaktoren Benchtop Skala über einen weiten Bereich von turbulenzbedingungen zu messen, die durch die dimensionslose Reynolds-Zahl (Re) beschrieben werden kann. Die oben genannten Reibungsverluste werden durch den Einsatz von einem Luftlager wirkungsvoll reduziert. Das Verfahren zum Einrichten, Durchführung und Auswertung einer Drehmoment-basierte macht Eingang Messung, mit besonderem Fokus auf Zelle typische Unruhe Kulturbedingungen mit niedrigen bis mäßigen Turbulenzen (100 < Re < 2·104), wird im Detail beschrieben. Die Leistungsaufnahme von mehreren Multi-Use und Einweg-Bioreaktoren erfolgt durch die dimensionslose macht Anzahl (auch genannt Newton Nummer, P0), bestimmt im Bereich von P0 ≈ 0,3 und P0 ≈ 4,5 für die maximale Reynolds-Zahlen werden in den verschiedenen Bioreaktoren.
Leistungsaufnahme ist engineering Schlüsselparameter für die Charakterisierung und Skalierung von Bioreaktoren, denn es bezieht sich auf viele Grundoperationen, z. B. Homogenisierung1,2,3, Gas-Flüssigkeits-Dispersion2 , 4 , 5, Heat Transfer6 und solide Aufhängung7. Leistungsaufnahme ist Scherbeanspruchung, die besonders beeinflussen Wachstum und Produktbildung in Scherung sensible Zelle Kulturen8,9,10,11können auch zugeordnet.
Am häufigsten verwendeten Techniken ziehen für die Messung der Leistungsaufnahme in gerührten Bioreaktoren basieren auf elektrischen Strom12,13,14, Kalorimetrie12,15 (d.h. stationäre Wärme- Gleichgewicht oder dynamische Heizung durch die Agitation) oder das Drehmoment auf das Rührwerk. Letzteres kann experimentell bestimmt werden Dynamometer, Drehmoment m oder Dehnungsmessstreifen, die für eine Vielzahl von Rührwerken, einschließlich ein- oder mehrstufigen Rushton Turbinen1,16,17 angewendet wurden , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25, geneigte Klinge Laufräder19,20,23,26,27, InterMig19,21 und Scaba Laufräder28 , 29. eine detaillierte Überprüfung erfolgt durch Ascanio Et Al. (2004)30.
Aus dem Drehmoment (T) kann die Leistungsaufnahme (P) aus GL. 1, abschätzen, wo N die Drehzahl des Rührwerks ist.
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Um Verluste in der Agitation (im Lager, Dichtungen und der Motor selbst) Rechnung zu tragen, sollte das wirksame Drehmoment (TEff) als die Differenz zwischen dem Wert, gemessen in den leeren Behälter (T-D) und in der Flüssigkeit (TL festgelegt werden ). Zu guter Letzt kann die dimensionslose macht Zahl (P0, auch bekannt als Newton Zahl), die durch GL. 2 wo ρL bezeichnet die Dichte die flüssige und d steht für das Laufrad-Durchmesser definiert ist, verschiedene Rührwerke vergleichen verwendet werden.
(2)
Es ist bekannt, dass die macht eine Funktion der Reynoldszahl (d. h. die Turbulenzen ist) und wird vollständig turbulente Bedingungen konstant. GL. 3, woL η die Viskosität der Flüssigkeit ist das Laufrad Reynoldszahl bestimmt.
(3)
Eingabe Leistungsmessungen in kleinem Maßstab Bioreaktoren sind jedoch durch die relativ hohe Reibungsverluste im Inneren mechanischen Lagern der Laufrad-Wellen und die begrenzte Genauigkeit von kommerziell verfügbaren Drehmoments m noch anspruchsvoll. Infolgedessen geben nur wenige Berichte über macht Messungen im Benchtop Maßstab Bioreaktoren wurden17,18,22,24,31,32veröffentlicht. Es gibt auch einen Mangel an Daten über die Leistungsaufnahme in Einweg-Bioreaktoren, die von den Herstellern vormontiert, sterilisiert und Ready-to-Use33,34geliefert werden. Im Gegensatz zu wiederverwendbaren Pendants sind die meisten Einweg-Bioreaktoren von speziell entwickelten Laufräder, erschwert Vergleiche aufgeregt.
Um diese Lücke zu schließen, wurde vor kurzem eine zuverlässige Methode zur Eingabe Leistungsmessungen mit speziellem Fokus auf Labor-Maßstab-Rührer35entwickelt. Die Drehmomentwerte gemessen in die Leere Gefäße, die durch die Reibungsverluste verursacht wurden, wurden durch den Einsatz von einem Luftlager effektiv reduziert. Folglich eine Vielzahl von Betriebsbedingungen mit niedrigen bis mäßigen Turbulenzen (100 < Re < 2·104) könnte untersucht werden, und die Leistungsaufnahme von mehreren Multi-Use und Einweg-Bioreaktoren zur Verfügung gestellt.
Die vorliegende Studie bietet eine detaillierte Messprotokolle der zuvor entwickelten Methode und beschreibt das Einrichten, durchführen und bewerten eine Drehmoment-basierte Eingabe Leistungsmessung im Labor-Maßstab-Bioreaktoren. Besonderer Fokus liegt auf kommerziell erhältliche Single – und multi – use-Systeme. Eine automatisierte Messverfahren wird verwendet, um den experimentellen Aufwand reduzieren.
Trotz der Bedeutung von (bestimmten) Leistungsaufnahme für die technische Charakterisierung und scaling-Up/Down von Bioreaktoren, nur wenige Veröffentlichungen über experimentelle Untersuchungen in Benchtop Skala Bioreaktoren, insbesondere Einweg-Systeme in der einstellige Liter Volumen Palette finden Sie in der Literatur. Ein Grund für diesen Mangel an Daten entnehmen bitte den Schwierigkeiten der genaue Eingabe Leistungsmessungen in solchen kleinen Maßstäben. Um einige dieser Schwierigkeiten zu überwinden, bietet die vorliegende Studie ein detailliertes Protokoll für Drehmoment basierte Eingabe Leistungsmessungen, die durch ein Luftlager, die Reibungsverluste im Lager zu minimieren unterstützt werden. Die Anwendbarkeit der Methode zeigte sich mit drei handelsüblichen Einweg-Bioreaktoren sowie Multi-Use Bioreaktoren in Maßstäben zwischen 1 L und 10 L Arbeitsvolumen.
Basierend auf unserer Erfahrung mit den Maßen Drehmoment basiert, sind die wichtigsten Faktoren zur Adresse: Bioreaktoren und (2) die Auswahl der Skalierung (1) Verringerung der Toten Drehmoment durch die Minimierung der Reibungsverluste in den Lagern und Dichtungen, insbesondere im Labor eine geeigneten Drehmoment m für die gewünschte Bioreaktor Größe und Unruhe. Wie frühere35gezeigt hat, kann durch die Verwendung von ein Luftlager tot Drehmoment drastisch. In der vorliegenden Studie wurde eine kostengünstige Luft-Buchse gemacht der poröse Carbon-Material verwendet. Restdrehmoment in die Leere Gefäße, die getestet wurden in der Regel unter 0,5 mN·m mit Agitation Raten von bis zu 900 u/min, Laufrad Umfangsgeschwindigkeiten von bis zu 3 M·s-1entspricht. Im Gegensatz dazu die Toten Drehmoment des Bioreaktors #6 mit dem eingebauten mechanischen Wellenlagerung war zum Beispiel zwischen 9,4 mN·m und 20 mN·m und vergleichbare Werte von etwa 3 mN·m haben auch berichtet, für den Bioreaktor #7-32. Dies ist etwa eine Größenordnung höher als die Werte, die in der vorgeschlagenen Versuchsaufbau.
Neben dem Luftlager ist das Drehmoment-Messgerät verwendet die kritischste Komponente. Ein kommerziell verfügbare Drehmoment-Messgerät, das dient zur Messung der statischen und dynamischen Drehmoment, Drehzahl und Drehwinkel wurde für diese Studie ausgewählt. In Anbetracht der Bioreaktoren von Interesse mit max. Arbeitsvolumen von 10 L und der entsprechenden Rührwerke wurde ein Nenndrehmoment von 0,2 nm gewählt. Es wurde festgestellt, dass hoher Reproduzierbarkeit mit relative Standardabweichung von < 5 repliziert % und zuverlässige Messungen Sie für so niedrig wie 2 mN·m erhalten, nur 1 % des Nennmomentes entsprechend wirksamen Drehmomente. Daher wurde der Messbereich des Sensors angewendet in der vorliegenden Studie deutlich breiter ist als Ergebnisse die veröffentlicht wurden, basierend auf einer laborübergreifenden Studie von Mitgliedern des Arbeitskreises deutsche GVC-VDI auf41mischen.
Das Leistungsspektrum der Rührer Geschwindigkeit sollte dennoch sorgfältig hinsichtlich der Drehmoment-Sensor-Auflösung, das Nenndrehmoment und Wirbelbildung ausgewählt werden. Letztere oft tritt in unbaffled Bioreaktoren bei höheren Geschwindigkeiten unruhig und kann Schäden an das Drehmoment-Messgerät. Sowohl die minimale und maximale machbar Rührwerk Geschwindigkeiten können Faktoren des in dieser Studie beschriebenen Verfahrens begrenzt. Neben unserer bisherigen Arbeiten Sie35, diese Studie beteiligten auch den Bioreaktor #3, das kleinste Mitglied in Glas-Bioreaktor-Familie des Herstellers, die durch zwei-Phasen-Laufräder mit einem Durchmesser von 42 mm aufgeregt ist. Ein vergleichbarer Leistung Merkmal, dass im geometrisch ähnlichen Bioreaktor #4 wurde mit der vorgestellten Versuchsaufbau erhalten. Dies ist bemerkenswert, da das Drehmoment M skaliert d5 für einen gegebenen flüssigkeitsdichte, Laufrad-Geometrie (d.h. macht Nummer) und Drehzahl (siehe GL. 1 und GL. 2). Infolgedessen eine ca. 40 % niedrigeres Laufrad Drehmoment ergibt sich aus einen 10 % geringeren Laufrad-Durchmesser, zum Beispiel. Dennoch bedurfte es höhere Drehzahlen in der 1 L-Skala als in der 2 L-Skala während des Betriebes, das erzeugte Drehmoment mit der zur Verfügung stehende Drehmoment-Messgerät zu lösen. Aufgrund der eingebauten Schikanen des Bioreaktors #3 keine Wirbelbildung beobachtet wurde, aber dies kann ein Problem mit unbaffled Schiffe werden. Es sollte betont werden, dass die Konstante offset in den Strom Zahlen, die zwischen den zwei Skalen gefunden wurde von Messungenauigkeiten, verursacht durch die begrenzte Sensorauflösung (neben geometrischen Unterschiede) führen könnte. Weitere Untersuchungen sind erforderlich, um endgültige Schlussfolgerungen auf den kleinsten Wert, an dem die vorgeschlagene Einrichtung noch machbar ist.
Dennoch diente das gleiche Protokoll Eingabe Leistungsmessungen in verschiedenen Glasgefäße von verschiedenen Herstellern mit Arbeitsvolumen von 1 L bis 10 L in unserem Labor. Dies unterstreicht die Übertragbarkeit der verwendeten Methode zur Charakterisierung der verschiedenen bioreaktorsystem. Die experimentellen Aufwand könnte durch automatisierte Messungen mit dem Rezeptmanagement in das Automatisierungssystem von der Steuerungssoftware Einheit zur Verfügung gestellt und die automatisierte Datenverarbeitung basierend auf der universellen Matlab-Sprache reduziert werden.
Ferner sei angemerkt, dass mithilfe der Saccharose, billiges Newtonschen Modell Medien, eine breite Palette von Reynolds-Zahlen enthalten (100 < Re < 6·104), je nach Maßstab und Rührwerk, bedeckt war. Es sollte auch betont werden, dass die untere Grenze des Bereichs Turbulenzen für tierische Zellkulturen mit Wasser-wie Medien, in der Regel nicht relevant ist, auch wenn sehr niedrige Laufrad Geschwindigkeiten verwendet werden. Jedoch deutliche Zuwächse in der Brühe Viskosität, die Ergebnisse in Turbulenzen Dämpfung und sogar nicht-Newtonsches Verhalten für Pilze beschrieben worden und zellbasierte Kulturen zu Pflanzen. Zum Beispiel waren offensichtlichste Viskositäten in Pflanzenkulturen von bis zu 400-fold im Vergleich zu Wasser gemeldeten42, die führt zu wesentlich niedrigeren Reynolds-Zahlen.
Schließlich wurde unter Verwendung des Bioreaktors #7 als eine erste Fallstudie, nachgewiesen, dass die vorgeschlagenen Versuchsaufbau verwendet werden kann, um die Wirkung von Design-Modifikationen auf die Leistungsaufnahme im Labormaßstab untersuchen. Dies kann in Kombination mit rapid-Prototyping-Techniken ein leistungsfähiges Werkzeug für Laufrad Designstudien, bilden Teile der künftigen Arbeit.
The authors have nothing to disclose.
Die Autoren möchte Dieter Häussler und Beat Gautschi für ihre Unterstützung während des experimentellen Setup bis zu danken. Wir sind auch dankbar Caroline Hyde für Englisch Korrekturlesen.
T20WN torque meter | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Nominal torque 0.2 Nm | |
Spider-8 | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
HBM Spider8 is no longer available for sale. QuantumX DAQ system (especially the QuantumX modules MX840A and MX440A) are recommended. |
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Catman easy software | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Version 4.2.2 | |
Air bearing | IBS precision engineering | 13 mm air bushing | |
Stainless steel impeller shaft | Bioengineering AG | Shaft tolerance -0.0076 mm | |
Brushless motor AKM2 | Kollmorgen | ||
Metal bellow coupling | Uiker AG | ||
Finesse RDPDmini control unit | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | No longer supported (the replacement product G3Lab universal controller can be used) | |
Sucrose | Migros Schweiz AG | Food grade | |
Matlab software | Mathworks | Version R2017a | |
Finesse μTruBio PC software | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | Version 3.1 (no longer supported) | |
SmartGlass 1L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 1L in Table 2 | |
SmartGlass 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 3L in Table 2 | |
SmartVessel 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
Mobius CellReady 3L | Merck Millipore | referred to as Cell Ready Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
UniVessel SU 2L | Sartorius Stedim Biotech | referred to as Single-Use 2L Bioreactor in Table 2 |