La puissance absorbée dans des bioréacteurs agitées peut être mesurée par le couple qui agit sur l’arbre d’entraînement pendant la rotation. Cet article décrit comment un roulement d’air peut être utilisé efficacement réduire les pertes par frottement observés dans les garnitures mécaniques et améliorer la précision des mesures d’entrée de puissance dans les petits vaisseaux.
La puissance absorbée dans des bioréacteurs brassées est un paramètre important d’intensifier et peut être mesurée par le couple qui agit sur l’arbre d’entraînement pendant la rotation. Toutefois, la détermination expérimentale de la puissance absorbée dans les petits vaisseaux est encore difficile en raison de pertes de charge relativement élevée à l’intérieur des bagues généralement utilisés, roulements et/ou joints d’arbre et la précision des compteurs de couple disponible dans le commerce. Ainsi, seules des données limitées pour les bioréacteurs à petite échelle, les systèmes en particulier à usage unique, sont disponibles dans la littérature, ce qui rend les comparaisons entre les différents systèmes à usage unique et leurs homologues conventionnels difficile.
Ce manuscrit fournit un protocole sur la mesure des entrées d’alimentation dans des bioréacteurs de benchtop échelle sur un large éventail de conditions de turbulence, ce qui peut être décrite par le nombre sans dimension de Reynolds (Re). Les pertes par frottement susmentionnés sont effectivement réduites par l’utilisation d’un appui aérien. La procédure sur la façon de mettre en place, mener et évaluer une puissance axée sur le couple d’entrée de mesure, avec un accent particulier sur les conditions d’agitation typique de culture cellulaire à faible ou des turbulences modérées (100 < Re < 2·104), est décrite en détail. La puissance absorbée de plusieurs bioréacteurs à usages multiples et à usage unique est fournie par le nombre sans dimension de puissance (également appelé numéro de Newton, P,0), qui est considéré comme étant dans la gamme de P0 ≈ 0,3 et P0 ≈ 4,5 pour les nombres de Reynolds maximales dans les bioréacteurs différents.
Puissance d’entrée est un paramètre clé de génie pour la caractérisation et l’intensification de bioréacteurs parce qu’il concerne plusieurs opérations unitaires, par exemple l’homogénéisation1,2,3, dispersion de gaz-liquide2 , 4 , 5, transfert de chaleur6 et suspension solide7. Puissance d’entrée est également associée à la contrainte de cisaillement, qui peuvent notamment affectent la croissance et la formation produit en cisaillement cellule photosensible cultures8,9,10,11.
Les techniques les plus courantes pour la mesure de la puissance absorbée dans des bioréacteurs brassées sont basées sur l’alimentation électrique attirer12,13,14, calorimétrie12,15 (c’est-à-dire stationnaire chaleur équilibre ou chauffage dynamique par le biais de l’agitation) ou le couple sur l’agitateur. Ce dernier peut être expérimentalement déterminé par dynamomètres, couple mètres ou les jauges de contrainte, qui ont été appliquées à une variété d’agitateurs, y compris simple ou multi-étages Rushton turbines1,16,17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25, lame inclinée roues19,20,23,26,27, culbuteur19,21 et Scaba roues28 , 29. un examen détaillé est fourni par Ascanio et coll. (2004)30.
Depuis le couple (T), la puissance absorbée (P) peut être estimée de l’équation 1, où N est la vitesse de rotation de l’agitateur.
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Afin de tenir compte des pertes qui se produisent dans l’agitation (dans les roulements, joints et le moteur lui-même), le couple efficace (Teff) doit être déterminé comme étant la différence entre la valeur mesurée dans le réservoir vide (TD) et dans le liquide (TL ). Enfin, le nombre de puissance sans dimension (P0, également connu sous le nom Newton nombre), qui est défini par l’équation 2 où ρL indique la densité du liquide et d représente le diamètre de la roue, permet de comparer différents agitateurs.
(2)
Il est bien connu que le nombre de puissance est une fonction du nombre de Reynolds (c.-à-d. la turbulence) et devient constant dans des conditions entièrement turbulentes. La roue de nombre de Reynolds est définie par EQ. 3, où ηL est la viscosité du liquide.
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Néanmoins, les mesures d’entrée de puissance dans des bioréacteurs à petite échelle sont encore difficiles en raison des pertes de friction relativement élevé à l’intérieur des roulements mécaniques des arbres à turbine et la précision limitée des compteurs de couple plus commercialement disponible. En conséquence, seuls quelques rapports sur le pouvoir d’entrée des mesures à l’échelle de benchtop bioréacteurs ont été publié17,18,22,24,31,32. Il y a aussi un manque de données sur l’alimentation dans des bioréacteurs à usage unique, qui sont livrés par les fabricants pré-assemblées, stérilisés et prêts à l’emploi33,34. Contrairement à leurs homologues réutilisables, la plupart des bioréacteurs à usage unique sont agités par turbines spécialement conçus, ce qui rend la comparaison difficile.
Afin de combler cette lacune, une méthode fiable pour les mesures d’entrée de puissance avec un accent particulier sur les agitateurs d’échelle de laboratoire a été mis au point récemment35. Les valeurs de couple mesurés dans les récipients vides, qui ont été provoquées par les pertes par frottement, ont été efficacement réduits par l’utilisation d’un appui aérien. Par conséquent, un large éventail de conditions d’exploitation à faible ou des turbulences modérées (100 < Re < 2·104) pourrait être l’objet d’une enquête et la puissance absorbée de plusieurs bioréacteurs à usages multiples et à usage unique a été fournie.
La présente étude fournit un protocole de mesure détaillée de la méthode développée précédemment et explique comment mettre en place, mener et évaluer une mesure de puissance axée sur le couple d’entrée dans des bioréacteurs échelle de laboratoire. Spécial porte principalement sur les systèmes single – et multi – use disponibles dans le commerce. Une procédure de mesure automatisé est utilisée pour réduire l’effort expérimental.
Malgré l’importance de l’alimentation (spécifiques) pour la caractérisation de génie et scaling-up/down de bioréacteurs, seulement quelques publications sur les investigations expérimentales dans des bioréacteurs de benchtop d’échelle, en particulier à usage unique systèmes dans la plage de volume de litre à un chiffre, se trouvent dans la littérature. Une des raisons de cette absence de données peuvent être vu dans les difficultés des mesures d’entrée de puissance précis dans ces petites écailles. Afin de surmonter certaines de ces difficultés, la présente étude fournit un protocole détaillé pour les mesures d’entrée de puissance couple basé qui sont pris en charge par un roulement d’air afin de minimiser les pertes par frottement dans le roulement. L’applicabilité de la méthode a été démontrée à l’aide de trois bioréacteurs à usage unique disponibles dans le commerce, mais aussi des bioréacteurs multi-usage en écailles entre 1 L et le volume de travail de 10 L.
Basé sur notre expérience avec les mesures de couple de base, les facteurs les plus critiques à l’adresse sont : 1) réduire le couple de mort en réduisant au minimum les pertes par frottement dans les roulements et les joints d’étanchéité, en particulier en laboratoire à l’échelle bioréacteurs et 2) le choix d’un compteur de couple approprié pour les conditions de taille et d’agitation de bioréacteur désirée. Comme l’a montré plus tôt35, le couple mort peut être considérablement réduit par l’utilisation d’un appui aérien. Dans la présente étude, un coussinet d’air faible coût en matériau poreux carbone a été utilisé. Le couple résiduel dans les récipients vides testés étaient généralement inférieures à 0,5 mN·m avec des taux d’agitation de jusqu’à 900 tr/min, correspondant à des vitesses de pointe de turbine de jusqu’à 3 Màs-1. En revanche, le couple mort du bioréacteur #6 avec le roulement de l’arbre mécanique intégré a été, par exemple, entre mN·m 9,4 et mN·m 20, et des valeurs comparables d’environ 3 mN·m ont été également rapportés pour le bioréacteur #732. Il s’agit d’environ un ordre de grandeur plus élevé que les valeurs obtenues dans le montage expérimental proposé.
Sans compter que le roulement de l’air, le couple-mètre utilisé est l’élément le plus critique. Un compteur de couple disponible dans le commerce qui est conçu pour mesurer le couple statique et dynamique, vitesse de rotation et l’angle de rotation a été choisi pour cette étude. Si l’on considère les bioréacteurs d’intérêt avec des volumes de travail maximale de 10 L et les agitateurs correspondantes, un couple nominal de 0,2 N·m a été choisi. Il a été constaté que la reproductibilité élevée avec écart-type relatif de réplique < 5 % et des mesures fiables peuvent être obtenus des couples efficace aussi bas que 2 mN·m, correspondant à seulement 1 % du couple nominal. La plage de mesure du capteur appliquée dans la présente étude était donc nettement plus large que les résultats qui ont été publiés basés sur une étude interlaboratoire des membres du groupe de travail sur le mélange41VDI-GVC allemand.
Néanmoins, la plage de la vitesse de l’agitateur doit être soigneusement sélectionnée en ce qui concerne la résolution du capteur couple, le couple nominal et la formation de vortex. Ce dernier souvent se produit dans des bioréacteurs débafflés agités à des vitesses plus élevées et peut endommager le compteur de couple. Les deux les vitesses minimales et maximales agitateur réalisable peuvent être limitant les facteurs de la méthode décrite dans la présente étude. En plus de nos précédents travaux35, cette étude également impliqué le bioréacteur #3, le plus petit membre de famille de bioréacteur de verre fourni par le fabricant, qui est agité par les roues de deux étages avec un diamètre de 42 mm. Une caractéristique de puissance comparable à celle dans le bioréacteur géométriquement similaire #4 a été obtenue avec le montage expérimental présenté. Ce qui est remarquable car le couple s’ajuste sur M d5 densité liquide donnée, de géométrie de turbine (c’est-à-dire numéro de puissance) et la vitesse de rotation (voir équation 1 et EQ. 2). Par conséquent, un environ 40 % plus faible couple roue résulte d’un diamètre de rotor inférieur de 10 %, par exemple. Néanmoins, les vitesses de rotation plus élevées dans l’échelle de 1 L que dans l’échelle de 2 L étaient tenus au cours de l’opération pour régler le couple produit avec le compteur de couple disponible. Les baffles intégrés du bioréacteur #3, aucune formation de vortex a été observée, mais cela peut devenir un problème avec les navires débafflés. Il convient de souligner que la constante de décalage dans les chiffres de puissance qui a été trouvés entre les deux échelles pourrait résulter des imprécisions de mesure causées par la résolution du capteur limité (en plus de différences géométriques). D’autres recherches sont nécessaires pour tirer des conclusions définitives sur l’échelle minimale au cours de laquelle la configuration proposée est toujours réalisable.
Néanmoins, le même protocole a été utilisé pour les mesures d’entrée de puissance dans les récipients en verre diverses provenant de différents fabricants avec des volumes de travail entre 1 L et 10 L dans notre laboratoire. Cela met en évidence la transférabilité de la méthode utilisée pour la caractérisation des systèmes de bioréacteur différents. L’effort expérimental pourrait être réduit par des mesures automatisées à l’aide de la gestion de recette dans le système d’automatisation fournis par le logiciel d’appareil de contrôle et le traitement automatisé de données basé sur le langage Matlab universels.
En outre, il convient de noter que, en utilisant le saccharose contenant, médias du modèle newtonien à bas prix, un large gamme de Reynolds nombres (100 < Re < 6·104), selon l’échelle et l’agitateur, était couvert. Il convient également de souligner que la limite inférieure de la fourchette de turbulence est généralement pas pertinente pour les cultures de cellules animales avec l’eau-comme les médias, même si roue très faibles vitesses sont utilisées. Cependant, une augmentation significative de la viscosité de bouillon, qui se traduit dans le comportement d’amortissement et même non newtonien de turbulence ont été décrites pour les champignons – et plante des cultures cellulaires. Par exemple, viscosité apparente dans les cultures végétales de jusqu’à 400-fold par rapport à l’eau ont été déclarés42, ce qui conduit à beaucoup plus faibles nombres de Reynolds.
Enfin, en utilisant le bioréacteur #7 comme une première étude de cas, il a été démontré que le montage expérimental proposé peut être utilisé pour étudier l’effet des modifications de conception sur l’entrée d’alimentation à l’échelle du laboratoire. En combinaison avec des techniques de prototypage rapide, cela peut être un outil puissant pour des études de conception de roue à aubes, qui feront parties des travaux futurs.
The authors have nothing to disclose.
Les auteurs tiens à remercier Dieter Häussler et battre Gautschi pour leur aide durant le jeu expérimental vers le haut. Nous sommes également reconnaissants à Caroline Hyde pour preuve anglaise lu.
T20WN torque meter | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Nominal torque 0.2 Nm | |
Spider-8 | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
HBM Spider8 is no longer available for sale. QuantumX DAQ system (especially the QuantumX modules MX840A and MX440A) are recommended. |
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Catman easy software | HBM Hottinger Baldwin Messtechnik GmbH |
Version 4.2.2 | |
Air bearing | IBS precision engineering | 13 mm air bushing | |
Stainless steel impeller shaft | Bioengineering AG | Shaft tolerance -0.0076 mm | |
Brushless motor AKM2 | Kollmorgen | ||
Metal bellow coupling | Uiker AG | ||
Finesse RDPDmini control unit | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | No longer supported (the replacement product G3Lab universal controller can be used) | |
Sucrose | Migros Schweiz AG | Food grade | |
Matlab software | Mathworks | Version R2017a | |
Finesse μTruBio PC software | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | Version 3.1 (no longer supported) | |
SmartGlass 1L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 1L in Table 2 | |
SmartGlass 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Bioreactor 3L in Table 2 | |
SmartVessel 3L | Finesse, a part of Thermo Fisher Scientific | referred to as Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
Mobius CellReady 3L | Merck Millipore | referred to as Cell Ready Single-Use 3L Bioreactor in Table 2 | |
UniVessel SU 2L | Sartorius Stedim Biotech | referred to as Single-Use 2L Bioreactor in Table 2 |