À l’aide de In Vivo et tissulaire et cellulaire Explant approches à l’étude de la morphogénèse et la pathogenèse de l’aorte embryonnaire et périnatale

Les systèmes circulatoires de fonction multicellulaires pour fournir des nutriments et l’oxygène aux cellules qui ne sont pas en contact avec le milieu extérieur et pour enlever des déchets produits et dioxyde de carbone de ces cellules. Chez les vertébrés, le principal système circulatoire est composé du cœur, qui pompe le sang à travers une série de vaisseaux sanguins. Les murs de gros vaisseaux sanguins, comme les artères et les veines, se composent de trois couches : je) l’intima ou la couche interne de cellules endothéliales ; II) le support, ou la couche intermédiaire d’une alternance de circonférence allongés des cellules musculaires lisses CML et lamelles élastiques ; et iii) l’adventice ou couche extérieure du tissu conjonctif et des fibroblastes. La grande majorité des études en biologie vasculaire se consacrée sur les cellules endothéliales, enquête sur la formation de nouveaux tubes de bordées de cellules endothéliales par l’intermédiaire de l’angiogenèse. En comparaison, les CGS reçoivent relativement peu d’attention. Cependant, CML est un type de cellule critique dans la construction de la paroi artérielle normale et dans les pathologies vasculaires.

L’aorte est l’artère de plus gros calibre dans l’organisme, qui reçoit le débit cardiaque du ventricule gauche du cœur. Il est touché par diverses maladies humaines, y compris l’athérosclérose, anévrisme et dissection. Dans les organismes adultes, l’aorte et ses branches principales sont intensément étudiés dans des modèles de maladies vasculaires. Par exemple, régime riche en graisses nourri des souris qui ont la valeur null pour le gène codant le récepteur des lipoprotéines de basse densité ou apolipoprotéine E, développer l’athérosclérose et des études de cartographie sort récentes indiquent que SMCs préexistants donnent naissance à plusieurs types de cellules dans le plaque d’athérosclérose¹. Dans les anévrismes de l’aorte, changements pathologiques incluent l’apoptose SMC et remodelage^2,3de la matrice extracellulaire.

Considérablement moins est connu au sujet de la morphogenèse de la SMC et la pathogenèse pendant la période embryonnaire et périnatale. Ici, nous fournissons des protocoles pour l’étude embryonnaires et périnatale aortique SMCs in vivo, des explants de tissus et de cellules isolées. Par exemple, l’article premier du protocole délimite cartographie sort et analyse clonale chez les souris embryonnaires. Recombinase cre exprimée sous le contrôle d’un promoteur spécifique à la cellule facilite le marquage des cellules spécifiques et leur progéniture^4,5,6; Toutefois, un contrôle temporel de l’étiquetage spécifique des cellules peut être difficile durant le développement embryonnaire chez la souris. Dans ce contexte, nous fournissons avec embryons expriment le conditionnel CreER sous un promoteur actif dans les CGS (e.g.,Myh11 ou Acta2) et un reporter de la Cre, méthodes d’injection de tamoxifène ou son métabolite actif 4-OH-tamoxifène chez les mères enceintes et pour analyser les cellules marquées dans les embryons ou descendants postnatal. En outre, contrairement aux études de cartographie du destin, dont principalement utiliser Cre reporters avec un seul journaliste fluorophore^1,7, l’analyse clonale est considérablement amélioré avec des journalistes de Cre multicolores.

La deuxième et la troisième section du protocole décrire des méthodes d’isolement et de mise en culture des explants aortiques embryonnaires et SMCs aortiques de nouveaux-nés, respectivement. Ces approches permettent la manipulation des voies de signalisation, plus précisément dans les explants aortiques ou CML et pour analyser les effets directs des agents pharmacologiques. Ainsi, le rôle de certains gènes dans le tissu d’intérêt peut subir de façon beaucoup plus rapide que par le biais de manipulations génétiques traditionnelles chez les souris. En outre, les études SMC isolés facilitent l’analyse de la migration cellulaire et adhérence, qui sont techniquement limité in vivo.

Enfin, la quatrième section du protocole délimite le placement d’une pompe osmotique mini sous-cutanée, chargé avec des agents pharmacologiques chez des souris enceintes (ou des femmes enceintes). Cette méthode facilite l’analyse de l’effet sur le développement embryonnaire causé par des agents nécessitant une perfusion continue en raison d’un métabolisme rapide. L’alternative des injections fréquentes n’est pas pratique pour de nombreux agents et doit être évitée, car elle peut causer une gêne importante dans le barrage enceinte.