عالية الدقة ذوبان ير ل تكمل مستقبلات 1 طول تعدد الأشكال التنميط الجيني: أداة مبتكرة لمرض الزهايمر الجينات تقييم القابلية

أد، وهو السبب الأكثر شيوعا من الخرف، ويؤثر على أكثر من 30 مليون شخص في جميع أنحاء العالم، وهو مشكلة صحية عامة رئيسية ¹ . سريريا، يتميز أد الاضطرابات العصبية مما يؤدي إلى فقدان التدريجي للاستقلالية ² . يتميز أد من قبل اثنين من العلامات العصبية المرضية، وهي ودائع اميلويد خارج الخلوية والتشابك الخلايا العصبية داخل الخلايا ³ .

تقليديا، وفقا لعمر بداية المرض، يصنف أد إلى شكلين. الأول هو بداية في وقت مبكر (إيواد)، حيث بداية غالبا ما يحدث قبل سن 65؛ وهذا النموذج يمثل أقل من 5٪ من الحالات أد. وهو نادر، وراثي جسمي المهيمن شكل من أد، مما يؤدي إلى طفرات اختراق كامل إما في بروتين السلائف اميلويد ( أب) ⁴ ، بريسينيلين 1 ( PSEN1 ) ⁵ ، أو بريسينيلين 2 ( PSEN2 )> 6 الجينات. ثانيا، الشكل الأكثر شيوعا من المرض (> 90٪ من حالات أد) يسمى "متفرقة" في وقت متأخر ظهور (لواد) وغالبا ما يحدث في الأفراد الذين تتراوح أعمارهم بين 65 سنة أو أكثر. وهو ينتج عن عوامل خطر وراثية وبيئية متعددة ⁷ . في لواد، أليل 4 من بروتين أبوليبوبروتين E ( أبو ) هو عامل الخطر الجيني الرئيسي ^{8 ، 9} . وعلاوة على ذلك، تم تحديد أكثر من 20 موقع الجينات من خلال دراسات الارتباط على نطاق الجينوم (غواس) على أنها مرتبطة مع خطر م، واحدة منها كونها المكون التكميلي (3B / 4B) مستقبلات 1 ( CR1 ) الجين ¹⁰ ، وتقع على كروموسوم 1q32 في مجموعة من البروتينات المرتبطة بالمكملات. يرمز الجين CR1 البروتينات المستقبلة من النوع 1 (CR1)، وهو مكون من منظمي النشاط التكميلي.

CR1 (C3b / C4b مستقبلات، CD35)، بروتين سكري غشائي من أبروكسيماتإلي 200 كيلو دالتون ¹¹ ، ويرتبط C3b، C4b، C3bi، C1q، مانان ملزم ليتين (مبل)، والبكتيريا تكملة فيكولين ¹² . الوظيفة البيولوجية ل CR1 تختلف مع أنواع الخلايا التي يتم التعبير عنها. في البشر، 90٪ من مجموع تعميم CR1 وجدت في خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) ¹³ . على سطح كرات الدم الحمراء، CR1 يربط C3b- أو C4b-أوبسونزد الكائنات الحية الدقيقة أو المجمعات المناعية، وتسهيل إزالتها من التداول. مجمعات ملزمة ل CR1 يتم نقلها في الواقع إلى البالعات عندما كرات الدم الحمراء تذهب من خلال الكبد والطحال ^{11 ، 14} . من خلال الحد من ترسب C3B و C4b، CR1 قد منع تكملة المفرط تفعيل. لذلك، يعتبر التعبير عن CR1 على كرات الدم الحمراء عنصرا أساسيا في حماية الأنسجة، مثل الجهاز العصبي الدماغي، ضد ترسب معقد المناعي والأمراض الناتجة. ومن المعروف أيضا CR1 على كرات الدم الحمراءتلعب دورا هاما في العدوى المسببة للأمراض ^{15 ، 16} . وبالإضافة إلى ذلك، CR1، باعتبارها لاعبا رئيسيا في الحصانة الفطرية، وتشارك في تنظيم شلال تكملة وفي نقل وإزالة المجمعات المناعية. CR1 يمارس هذا النشاط عن طريق ربط شظايا C3b و C4b وتفكيك التحولات الكلاسيكية والبديلة (تفكك C2a من مجمع C4b2a والتفكك من C3b من مجمع C3bBb). وباعتبارها عامل مساعد لعامل بروتين البلازما سيرين I (في)، فإن CR1 يثبط المسارات التكميلية الكلاسيكية والبديلة عن طريق زيادة انشقاق C4b و C3b بواسطة في، وهي خاصية تعرف باسم النشاط المساعد (كا)، ومن خلال تثبيط حلقة التضخيم C3 ، بدوره منع مزيد من تفعيل تكملة. يقدم روجرز وزملاؤه أدلة على أن الببتيد A can يمكن ربط وتفعيل المسار التكميلي في غياب الأجسام المضادة ¹⁷ وتشير إلى أن الببتيد A is هو كلمستمدة من الدورة الدموية عن طريق التمسك بالتماسك الذي يعتمد على CR1 المعبر عنه في كرات الدم الحمراء ¹⁸ .

ويعرض CR1 ثلاثة أنواع من تعدد الأشكال: الأشكال الهيكلية أو الطولية، تعدد الأشكال الكثافة، ويعتمد على تعدد أشكال الدم ^{11 ، 19} . ويرتبط تعدد الأشكال الهيكلي إلى الاختلاف في عدد تكرار متناظرة طويلة (لرس)، وبالتالي يحدد أربعة الأشكال الإسوية. في الواقع، فإن المجال خارج الخلية من البروتين CR1 يتكون من سلسلة من وحدات تكرار، ودعا يكرر توافق في الآراء قصيرة (سكر) أو يكمل يكرر السيطرة (كبس). وقد أثبتت هذه اللجان من تكملة حمض ديوكسيريبونوكليك (كدنا) CR1. يتم ترتيب لجان مراجعة الدستور في مجموعات جنبا إلى جنب من سبعة، والمعروفة باسم لرس. ويتم ترتيب CR1 في أربع محطات لهر، تسمى LR- A، -B، -C، و D-ناشئة عن ازدواجية وحدة سبع سر ^{19 ، 20 ،21-}

وبترتيب متزايد من التردد، فإن هذه الأشكال الإسوية CR1 التي يحددها لطخة غربية (وب) هي CR1 * 1 (A / F) (الهجرة السريعة على هلام الكهربائي)، CR1 * 2 (B / S) (الهجرة البطيئة على الكهربائي هلام)، CR1 * 3 (C / F`)، و CR1 * 4 (D). ويتألف الشكلان السريان الأكثر شيوعا، وهما CR1 * 1 (A / F) و CR1 * 2 (B / S) من أربعة وخمس لهر، على التوالي، في حين أن CR1 * 3 (C / F`) و CR1 * 4 (D ) تتكون من 3 و 6 لرس، على التوالي. يحتوي الشكل الإسفري الأكثر شيوعا (CR1 * 1)، المكون من 30 سكر، على ثلاثة مواقع ملزم C4b (سكرز 1-3، 8-10، 15-17) ومواقع ملزمتين C3b (سكر 8-10 و 17-17) ، في حين أن سرس 22-28 ربط C1q، فيكولينز، و مبل ^{12 ، 20 ، 21 ، 22 ، 23 ، 24 ، 25} . وهكذا، CR1 * 2 يحتوي على واحد إضافي C3b / C4b موقع ملزم مقارنةd إلى CR1 * 1. الشكل 1 يوضح الهياكل، التسميات، والأوزان الجزيئية من الأشكال الإسوية الأربعة المختلفة من CR1.

كثافة تعدد الأشكال يتوافق مع النمط الظاهري مستقرة التي تمثل مستوى التعبير التأسيسي لل CR1 على كرات الدم الحمراء. في المواضيع القوقازية الصحية، وقد تبين أن عدد جزيئات CR1 لكل رك يمكن أن تختلف بما يصل إلى عامل من عشرة (يتراوح بين 150 إلى 1200 جزيء في الخلية) ²⁶ . كرات الدم الحمراء من النمط الظاهري هيلجيسون لها كثافة CR1 منخفضة جدا، والتي تبين أن أقل من 150 جزيء لكل خلية ^{27 ، 28} . وترتبط كثافة CR1 على كرات الدم الحمراء وراثيا مع نظام بيليليك كودومينانت كودومينانت على الجين CR1 ، ترتبط مع هين دي تقييد تعدد الأشكال شظية طول (رفلب) ²⁹ . طفرة نقطة واحدة في إنترون 27 من الجين CR1، بين إكسونس ترميز الثانيةسر في لر-D، يؤدي إلى توليد موقع هين دي متعدد الأشكال في هذه المنطقة ³⁰ . شظايا الجينوم هين دي من 7.4 و 6.9 كيلو دالتون تحديد الأليلات المرتبطة عالية (H أليل) أو منخفضة (L أليل) CR1 كثافة على كرات الدم الحمراء، على التوالي. ومع ذلك، تم العثور على عدم وجود ارتباط بين كثافة CR1 على كرات الدم الحمراء والأشكال هين dIII في بعض السكان في غرب أفريقيا ^{31، 32.} الآلية التي تربط تنظيم كثافة CR1 إلى تشفير متعدد الأشكال هين دي لا تزال غير معروفة. ومن بين تعدد الأشكال المتعددة، تم الإبلاغ عن ارتباط Q981H في SCR16 و P1786R في SCR28 بكثافة CR1 على كرات الدم الحمراء ^{30 و 33} .

إن تعدد الأشكال (كن)، وفقا للتسمية الدولية، هو نظام فصيلة الدم ال 22 التي سيتم فهرستها من قبل الجمعية الدولية لنقل الدم. أنه يحتوي على 9 مستضدات محددة(KN1 / KN2) و KN3 / KN6 و KN4 / KN7، فضلا عن 3 مستضدات معزولة، KN5، KN8، KN9. مستضدات KN1، KN3، KN4، KN5 هي مستضدات عالية التردد من نظام كن ( أي، أعرب في أكثر من 99٪ من عامة السكان). ومع ذلك، لا يزال دور هذا تعدد الأشكال في أد يحدد ¹³ .

تم تصميم البروتوكول الموصوف في هذا العمل لتحديد الأنماط الجينية متعددة الأشكال الطولية المتورطة في قابلية الإصابة بأمراض عديدة، مثل أد، الذئبة الحمامية الجهازية، والملاريا. طريقة لدينا لتحديد CR1 طول تعدد الأشكال يستفيد من عدد من لسر-بس تضم الأشكال الإسوية CR1 والتفاوتات التسلسل بين لار-B و لر-C ( الشكل 2 ).