L'isolement et la culture des neurones de la moelle épinière chez les souris néonatales

La compréhension de la pathologie de la moelle épinière nécessite l'utilisation de divers modèles, à la fois sur les niveaux macroscopique et microscopique. Les modèles grand et petit animal ^{1 , 2 , 3} sont utilisés pour des recherches in vivo de la maladie de la moelle épinière et des blessures. Tout en étudiant ces problèmes in vivo a ses mérites, l'analyse de la moelle épinière est limitée à l'homogénat de la moelle épinière entière ou aux sections de tissu ⁴ . Cela crée une certaine ambiguïté en essayant d'isoler des réponses et des cibles spécifiques dans la moelle épinière parmi ses neurones résidents et la glande environnante. La disponibilité croissante de souris manipulées génétiquement permet des recherches plus détaillées de la biologie aux niveaux cellulaire et moléculaire. Ainsi, un modèle de souris néonatal est utilisé ici, ce qui permet d'étudier les propriétés uniques et la biologie des neurones de la moelle épinière in vitro .

L'isolement et le maintien des neurones in vitro ne sont pas particulièrement simples. Il existe une abondance relative de techniques d'isolement des neurones du tissu cortical des rongeurs adultes qui semblent entraîner un nombre important de neurones isolés ( c'est-à-dire des millions) ^{5 , 6 , 7.} En revanche, le rendement des neurones du tissu de la moelle épinière est inférieur à ^{8 , 9 , 10} , en partie à cause de la plus petite masse de tissu. En outre, chez les souris, il existe une relative pénurie de techniques d'isolement néonatal Les neurones de la moelle épinière et les méthodes existantes sont limitées par des rendements inférieurs des neurones ( c.-à-d. Des centaines) ⁹ ou des techniques laborieuses et lourdes nécessitant l'isolement de souris embryonnaires ¹⁰ .

Dans ce protocole, nousUtiliser une technique qui permet l'isolement efficace des coûts et des ressources d'un nombre important de neurones provenant de la moelle épinière de souris néonatales. Comme c'est fréquent dans les techniques publiées précédemment, nous utilisons la papaïne comme protéase enzymatique, ce qui permet la libération de neurones du tissu de la moelle épinière ^{5 , 6} . En outre, nous utilisons un gradient de densité pour la séparation des cellules raffinées, qui a précédemment été efficace ^{6 , 10} . Alors que le milieu dans lequel les cellules sont incubées peut varier, dans notre expérience et tel que précédemment publié ¹¹ , la supplémentation avec un supplément de milieu de culture B27 frais s'est révélée critique pour la longévité des neurones. Les neurones sont généralement viables jusqu'à 10 jours, ce qui permet d'effectuer un traitement.