Spinal Cord Neurons Isolatie en Cultuur van Neonatale Muizen

Het begrijpen van ruggengraatpatologie vereist het gebruik van verschillende modellen, zowel op macroscopische als microscopische niveaus. Grote en kleine dierenmodellen ^{1 , 2 , 3} worden gebruikt voor in vivo onderzoeken naar ruggengraatziekte en letsel. Terwijl het bestuderen van deze problemen in vivo zijn voordelen heeft, is de analyse van het ruggenmerg beperkt tot het gehele ruggenmerghomogenaat of aan weefselafdelingen ⁴ . Dit zorgt voor een beetje dubbelzinnigheid bij het proberen om specifieke reacties en doelen in het ruggenmerg tussen zijn inwendige neuronen en omliggende glia te isoleren. De toenemende beschikbaarheid van genetisch gemanipuleerde muizen zorgt voor meer gedetailleerde onderzoeken van de biologie op cellulaire en moleculaire niveaus. Zo wordt hier een neonataal muismodel gebruikt, waarmee in vitro de unieke eigenschappen en biologie van ruggengraatneuronen kunnen worden onderzocht.

Ent "> Het isoleren en onderhouden van neuronen in vitro is niet bijzonder eenvoudig. Er is een relatief groot aantal technieken voor neuronisolatie van het corticale weefsel van volwassen knaagdieren die lijken te leiden tot een aanzienlijk aantal geïsoleerde neuronen (dat wil zeggen miljoenen) ^{5 , 6 , 7.} In tegenstelling is de opbrengst van neuronen van het ruggenmergweefsel lager ^{8 , 9 , 10} , mede door de kleinere massa weefsel. Verder is er bij muizen een relatief lage mate van technieken voor de isolatie van neonatale Ruggenmergneuronen, en bestaande methoden worden beperkt door lagere neuronopbrengsten ( dwz honderden) ⁹ of moeizame en resourcezware technieken die de isolatie van embryonale muizen vereisen ¹⁰ .

In dit protocol, wijGebruik een techniek die het mogelijk maakt om een ​​kostbare en resource-effectieve isolatie van een aanzienlijk aantal neuronen uit de ruggenmergen van neonatale muizen mogelijk te maken. Zoals gebruikelijk bij eerder gepubliceerde technieken, gebruiken we papain als enzymatisch protease, waardoor neuronen uit het ruggengraatweefsel ^{5 , 6} vrijkomen. Daarnaast gebruiken we een dichtheidsgradiënt voor verfijnde celscheidingen, die eerder bleek effectief te zijn ^{6 , 10} . Terwijl het medium waarin de cellen geïncubeerd zijn, kunnen verschillen, in onze ervaring en zoals eerder gepubliceerd ¹¹ , is de aanvulling met vers B27-kweekmedium supplement essentieel voor de lange levensduur van de neuron. De neuronen zijn meestal levensvatbaar voor maximaal 10 dagen, waardoor de behandeling kan worden uitgevoerd.