לא פולשנית דגימה של נוזל שורות Mucosal עבור כימות של In Vivo דרכי הנשימה העליונות החיסון-מגשרת רמות

הנוזל שורות mucosal של האף מפצה את החלק הנוזלי של מערכת הנשימה העליונה. זה מורכב של מטריצה מורכבת של מגשרים נגזר הגומלין בין האפיתל תאים חיסוניים המרכיבות את השורה הראשונה של הגנה מפני פולשים מיקרואורגניזמים. רירית האף הינו נגיש בקלות, ויש קשר פונקציונלי ו חזק בין האף של הסמפונות¹. את התא הוא בעל עניין מיוחד ביחס למחלות דרכי הנשימה נפוצות בילדות, כגון אסטמה, קדחת השחת, אלא גם למגוון הפרעות נשימה אחרות נפוץ יותר מאוחר יותר בחיים.

כאן, אנו מתארים יישום שיטה מדגם ללא הפרעה הרירית רירית נוזל מתוך חלל האף באמצעות טכניקה המבוססת על נייר סינון, לא פולשנית, וכן הליך מיצוי הבאים, נהגה elute חלבון מבוססת analytes מהעיתונים סינון לפני כימות שלהם. טכניקה זו, לדוגמה, ניתן להשיג ויוו המערכת החיסונית חתימות של אנשים בריאים וגם אנשים עם מחלות נשימה שונות. יתר על כן, קיימת אפשרות לבחון חשיפות חשיבות עבור חתימה המערכת החיסונית ספציפיים וכן להעריך אם זה כמנבא או מתווך של התפתחות המחלה מאוחר יותר.

שורות mucosal נוזל שהושגו בעבר על ידי שטיפה של חלל האף², אשר לעיתים קרובות לפניו מבחן אתגר האף, איפה אלרגן הוא הציג ברמות גבוהות כדי לעורר תגובה דלקתית של,^3,4. עם זאת, טכניקת שטיפה של חלל האף הוא לא ריאלי אצל ילדים צעירים, מציגה גורם לדילול לא ידוע, אשר מבלבל את התוצאות, מתווך מדולל רמות יכול ליפול מתחת לגבול זיהוי של assay⁵. יתר על כן, בשל הגורם דילול לא ידוע, התגובות analyte נמדד מתוך הבדיקות אתגר האף אינן דומות בין אנשים, וכך להגביל את התועלת של טכניקת שטיפה של חלל האף במדגם הגדרת. לבסוף האתגר אלרגן ישימה רק במקצועות sensitized, אתגרים אחרים, כגון האתגר היסטמין, אינן רלוונטיות מבחינה פיזיולוגית, ובכך לגרום השפעה התקרה על שחרור המתווך. בעיות אלה הם עקפו בטכניקת מבוססי-נייר סינון הציג אוסף נוזלים שורות mucosal, איפה בודדים הפרשת נוזלים ורמות analyte הגורמים היחידים המשפיעים השונות הבין-אישי.

במהלך ההליך החילוץ, analytes הן eluted מהעיתון מסנן לאחר התוספת של אמצעי אחסון זהים המאגר כדי כל הדגימות. זה מעדיף דומה שמחוץ דילול של כל הדגימות. מאגר החילוץ של אלבומין מבוססי תמיסת מלח מול משמש עבור השלב החילוץ; זה מאפשר הפקת מבוססי חלבונים מתווכים ומייצב חלבונים כדי להגביל דנטורציה במהלך ההקפאה עוקבות של חלבונים eluted לפני כמת. כדי למנוע השפלה חלבון במהלך שלב החילוץ, קוקטייל של מעכבי פרוטאז נוסף למאגר החילוץ.

היישום של טכניקות המאפשרות כימות של הפרעה, ויוו-מתווכים חיסוניים שנוצר באתרי הרירית הוא בעל חשיבות עליונה. ראשית, האתר הרירית מפצה אימונולוגי האיבר הגדול ביותר בגוף. שנית, המיקום האף הוא אתר ראשי של חשיפה לאוויר, קשורה באופן הדוק תא אימונולוגי הנשימה של הריאות¹. שלישית, האפשרות של מדידות איבר חשוב זה עם שיטה לא פולשנית פותחת את האפשרות לספק שפע של מידע על ציר חשוב חיידק-החיסון אינטראקציה ביחס מחלה את דרכי הנשימה ובריאות. רביעית, יש הרבה יישומים אפשריים אחרים של טכניקה זו, כגון לימוד שינויים המקומיות אימונולוגי בניסויים אקראי, מבוקר של סמים, יסודות קורט.

אנחנו בתחילה ליישם את הטכניקה מחקרים פוטנציאליים קופנהגן על אסטמה במדגם₂₀₀₀ (COPSAC₂₀₀₀) ילדות, שבו קבענו את הפרופיל החיסונית של נוזל שורות mucosal בת 7 ילדים עם דלקת אלרגית לעומת פקדים בריא¹³. לאחר מכן, אנחנו הוחלו בהצלחה טכניקה זו האורך COPSAC₂₀₁₀ עוקבה ופרופילים דרכי הנשימה המוערך המערכת החיסונית 1 חודש, 2 שנים ולאחר 6 שנים של גיל ועל מופעים של תסמינים נשימתיים חריפה. תוצאות neonates בן חודש 1 הראו אגודות חשוב בין החתימה מערכת החיסון לבין חשיפה סביבתית מוקדמת-חיים^{7,8,9,10,11,12}.