外ヴァーサ栄養血管の血流をブロックすることにより腹部の大動脈瘤の齧歯動物モデルの作成

動物のケアと実験動物のケアのための浜松大学学校の医学動物ケア委員会中心にガイドラインに従って行われた。 1。 モデルを作成するため手術 注: 10 のビードの殺菌剤に手術器具を配置 s 術。術中滅菌手袋を使用します。 使用ラット 300-400 g. の重量を量るラットに食糧へのアクセスを許可および水の 自由。 は、イソフルラン吸入 (2.0 3.0 mL/L) とラットを麻酔します。つま先のピンチによって適切な anesthetization を確認します。 電気カミソリ、腹部の毛を剃るし、アルコールとポビドン ヨード液と腹部をスクラブします。 は、仰臥位操作テーブルの上にネズミを配置します。ラット獣医軟膏を使用 ' 麻酔中の乾燥を防ぐため s 目。 は、はさみを使用して腹側正中腹部切開で開腹したを実行します。明確な手術野を確保するため腹部の内容を腹腔内傷リトラクターを使用して滅菌ガーゼでパックします。 血管周囲組織から大動脈を切断する が優しくをピックアップし、ピンセットで大動脈の壁を公開してから分岐する左腎静脈のレベルから後腹膜腔の上行大動脈の剥離する後腹膜を引き裂く、血管周囲組織 ( 図 1 a). ブロック血液 5-0 絹弦と腹部大動脈から分岐血管を大動脈の内腔を狭くしない大動脈から時点で供給 Ligate。 大動脈の血流をブロックする 血管クリップすぐ下腎動脈と大動脈の分岐のすぐ上に配置します 。 注: クリップのサイズは、血流を完全にブロックする大動脈の直径よりも大きくなければなりません。一時的な 5-0 絹弦の合字もクリップではなく血流をブロックするため十分だ。 ポリウレタン製カテーテルを挿入する遠位大動脈腎動脈の枝に隣接するクリップからマイクロはさみ 5 mm を使用して前の大動脈壁をカット、大動脈の壁の表面にドット出血を作成すると似ています。 ポリウレタン製カテーテルを挿入 (0.55 mm、内径外径 0.37 mm) 水で大動脈の血を洗い流すため切開浅く針留置 24 ゲージを使用します。ポリウレタン製カテーテルに水で満たされた 1 mL の注射器の管理し、水で大動脈の血の残りを洗い流します。洗浄した後に、大動脈からカテーテルを削除します。 ポリウレタン製カテーテルを挿入する前に (1.20 mm、内径外径 0.94 mm) 長さ 10 mm ( 図 1 b) をポリウレタン製のカテーテルをカット、18 g の留置針を使用しています。 挿入カット ステップ 1.9 の切開から大動脈の内腔にポリウレタン製のカテーテルの作品。完全に大動脈の内腔に 10 mm のカテーテルを挿入し、切開の位置に合わせてカテーテルの中点の位置を変更 (すなわち カテーテルで切開をカバー). 切開を縫合 8-0 モノフィラメント文字列 ( 図 1) を使用して修復します。 結紮 5-0 絹弦とポリウレタン製のカテーテル ( 図 1) の組み合わせを用いた腹部大動脈 。 注: 留置カテーテルによる大動脈の内腔を維持できます。カテーテルの位置を始まるようにしっかりと大動脈を縛る。外科医 ' 形成二重止め結びの結び目の最初のスローをつなぐとき、それは余分なねじれを追加します、追加ターンがより多くの摩擦を提供し、緩みを減らすことができますので、s の結び目をお勧めします。 結紮後、大動脈分岐部の血管クリップを取り外し、順行血流を回復する腎動脈以下の血管クリップを取り外します。総大動脈の拍動を確認します。 は、2 つの層、腹膜および 4-0 ポリプロピレン縫合糸で、他のレイヤーで腹部切開を閉じる。しっかりと突出した器官を防ぐために切開部を縫合します。 は、腹部の切開に局所リドカインを適用します。意識が戻るまで、加熱パッドのラットを配置します。放置しないでください、ラットまでそれは胸骨の横臥を維持するために十分な意識を取り戻しました。それは完全に回復するまで他のラットの会社に操作を経たラットを返しません。 は、操作後ラットを密接に監視します。ラットが苦痛や体の重量損失の兆候を示している場合、滅菌生理食塩水 (1.0 2.0 mL) のボーラスを皮下注入します。 は術後、超音波エコーで拡大した大動脈の経時的発展を観察します。説明 5 として腹部大動脈の外側のエッジにエッジの内側から最大径測定。 2。収穫、修正、および弾性線維 (EVG) 染色 28 日術後管理ペントバルビ タール ナトリウム ≥ 100 mg/kg 腹腔内にラットを安楽死させる。 カット ラット ' s 腹部キャビティ腹。メスを使用して初期の切開を行います。はさみを使用して動脈瘤を収穫し、24-48 h. のための中立的バッファー 10% ホルマリンで収穫された大動脈を配置 注: 外科医は、大動脈やその他の臓器に損傷を防ぐため、動脈瘤を公開するときに注意しなければなりません。AAA の形成を示す、高架の腹部臓器を観察すべき。生体内の イメージと 前のヴィヴォ イメージ 図 2 を示していますAAAs のこの代表的なサンプルが破裂しない。 EVG 染色 9 準備その行動 に調製した溶液 の ' 特定の順序で、次を混合することによって s ヘマトキシリン: アルコール ヘマトキシリン 20 mL、10% 塩化第二鉄 8.0 mLルゴール ' s ヨウ素 8 mL。各添加の間ソリューションをミックスします。このソリューションは必要に応じて新鮮な準備することができます。 準備バン維 ' 1% 酸フクシンを混合することによって s ソリューション 1 mL 及び飽和ピクリン酸 45 mL。一晩立つし、よく混ぜるようにします。このソリューションは、2 週間安定。 10% した FeCl 3 40 mL に 10 mL を混合することによって差別化ソリューション (2% 塩化第二鉄) の準備蒸留水します。このソリューションは必要に応じて新鮮な準備があります。 準備 5% ハイポ チオ硫酸ナトリウム 5.0 g 100 ml の蒸留水に溶解します。この解決策は、1 年間安定した。 染色手順 注: 詳細に 9 を参照を参照してください。 10 分が、その行動、大動脈の蒸留水で収穫された大動脈固定パラフィン切片を簡単に、メタンハイド レート ' s ヘマトキシリン 25 分洗浄水と 10-30 倍 (2% した FeCl 3) ソリューションの差別化でひと泳ぎ。水ですすいでください。5% ハイポ 1 分水で洗浄のために配置します。ヴァン維の場所 ' s 向け 5 分 Dehydrate 以下のアルコールで順序: 30 の 75%、90%、95%、100%、100% のアルコールそれぞれ秒。その後、2 回、5 分間のキシレンのオフにします。樹脂製取付中 coverslip の場所 。 注: 弾性線維は黒に青黒表示します。核: bla にブルーck。コラーゲン: 赤;およびその他の組織の要素: 黄色。