Creazione di un modello del roditore del Aneurysm aortico addominale bloccando Adventitial Vasa Vasorum perfusione

cura degli animali e gli esperimenti sono stati effettuati conformemente agli orientamenti di Hamamatsu University School di medicina animale cura Comitato presso il centro per la cura degli animali. 1. procedura chirurgica per la creazione del modello Nota: inserire gli strumenti chirurgici in uno sterilizzatore perlina per 10 s preoperatively. Utilizzare guanti sterili intraoperatively. Ratti maschii di uso pesano 300-400 g. consentire i ratti accesso al cibo e acqua ad libitum. Anestetizzare il topo con inalazione isoflurane (2.0-3.0 mL/L). Confermare il corretto amputate di pizzico di punta. La barba capelli sull’addome con un rasoio elettrico e macchia l’addome con alcool e una soluzione povidone-iodio. Inserire il topo in posizione supina sul tavolo operatorio. Usare pomata veterinario il ratto ' gli occhi per prevenire la secchezza mentre sotto anestesia. Eseguire una laparotomia con un’incisione addominale ventrale del midline usando un paio di forbici. Per proteggere un campo chiaro chirurgico, imballare il contenuto addominale all’interno della cavità addominale con garza sterile utilizzando un riavvolgitore ferita. Per staccare l’aorta dal tessuto perivascolare, delicatamente pick up e strappare il retroperitoneum con le pinzette per esporre la parete aortica ed esfoliare l’aorta di infrarenal nello spazio retroperitoneal dal livello della vena renale sinistra alla biforcazione dalla tessuto perivascolare ( Figura 1A). Legano i vasi diramazione dall’aorta addominale con una stringa di seta 5-0 a sangue blocco di alimentazione in un punto lontano dell’aorta che non restringono il lume aortico. Per bloccare il flusso sanguigno aortico, inserire clip vascolari appena sotto l’arteria renale e appena sopra la biforcazione dell’aorta. Nota: La dimensione delle clip deve essere maggiore del diametro aortico di bloccare completamente il flusso di sangue. Un temporaneo legatura seta stringa 5-0 è anche sufficiente per il blocco del flusso sanguigno invece le clip. Simile alla creazione di un’emorragia di punti sulla superficie della parete aortica, tagliata la parete aortica anteriore utilizzando un micro-forbici 5 mm distalmente dalla clip aortica, adiacente ai rami dell’arteria renale, per inserire un catetere in poliuretano. Inserire un catetere in poliuretano (0.55 mm, diametro interno diametro esterno 0,37 mm) con un calibro 24 insito l’ago che digrada dolcemente attraverso l’incisione per lavare via il sangue nell’aorta con acqua. Amministrare una siringa 1 mL riempita con acqua nel catetere in poliuretano e lavare via il sangue rimanente nell’aorta con acqua. Dopo irrigazione, rimuovere il catetere dall’aorta. Prima di inserire un catetere in poliuretano (diametro esterno 1,20 mm, diametro interno mm 0,94) utilizzando un ago di calibro 18 interiore, tagliare il catetere in poliuretano a 10 mm di lunghezza ( Figura 1B). Inserire il taglio pezzo del catetere in poliuretano nel lume aortico dall’incisione effettuata nel passaggio 1,9. Completamente posizionare il catetere di 10 mm nel lume aortico e riposizionare il punto centrale del catetere alla posizione dell’incisione (cioè, coprire l’incisione con il catetere). Riparare l’incisione con i suturare interrotti utilizzando una stringa di 8-0 monofilamento ( Figura 1). Legare l’aorta addominale utilizzando una combinazione di 5-0 laccio in seta e il catetere in poliuretano ( Figura 1). Nota: Il lume aortico può essere mantenuto il catetere. Legare l’aorta saldamente per evitare disallineati la posizione del catetere. Il chirurgo ' nodo s è raccomandato, perché aggiunge un tocco in più quando legando il primo tiro del nodo, formando un doppio nodo semplice, e un turno aggiuntivo fornisce più attrito e può ridurre allentamento. Dopo la legatura, rimuovere la clip vascolare alla biforcazione aortica e quindi rimuovere la clip vascolare sotto l’arteria renale per ripristinare il flusso di sangue anterogrado. Confermare lordo pulsazione aortica. Chiudere l’incisione addominale in due strati, il peritoneo e altri strati, con una sutura in polipropilene 4-0. Strettamente suturare l’incisione per evitare un organo sporta. Applicare lidocaina topica l’incisione addominale. Posizionare il ratto su un rilievo di riscaldamento fino al ritorno di coscienza. Non lasciare incustodito un ratto fino a quando ha riacquistato coscienza sufficiente per mantenere decubito sternale. Non restituiscono un ratto che ha subito l’operazione per la compagnia di altri ratti fino a quando non ha pienamente recuperato. Monitorare attentamente il ratto dopo l’operazione. Iniettare un bolo di soluzione salina sterile (1.0-2.0 mL) per via sottocutanea, se un ratto Mostra segni di perdita di peso di angoscia o corpo. Postoperatorio, osservare lo sviluppo di corso di tempo dell’aorta allargata su un ecogramma di ultrasuono. Misura il diametro massimo dall’interno del bordo al bordo esterno dell’aorta addominale come descritto 5. 2. Raccolta, fissaggio ed Elastica-van Gieson (EVG) colorazione ventotto giorni postoperatorio, amministrare sodio pentobarbital ≥ 100 mg/kg per via intraperitoneale per eutanasia ratti. Taglio aperto ratto ' cavità addominale s ventralmente. Effettuare l’incisione iniziale usando un bisturi. Raccogliere il aneurysm utilizzando forbici e posizionare le aorte raccolte in formalina 10% neutra tamponata per 24-48 h. Nota: Il chirurgo deve essere attento evitare lesioni dell’aorta ed altri organi quando esponendo l’aneurisma. Un organo addominale elevato dovrebbe essere osservato, che indica la formazione di AAA. la figura 2 Mostra un immagine in vivo ed ex vivo immagine; Questo campione rappresentativo di AAAs non è rotto. EVG macchiatura 9 Soluzione preparazione preparare Verhoeff ' ematossilina s mescolando i seguenti nell’ordine indicato: ematossilina alcolica 20 mL, 10% di cloruro ferrico 8,0 mL, e Lugol ' iodio s 8 mL. Miscelare la soluzione tra ogni aggiunta. Questa soluzione può essere preparata fresco q.b.. Preparare Van Gieson ' s soluzione mescolando Fucsina acida 1% 1 mL e satura di acido picrico 45 mL. Lasciare riposare per una notte e mescolare bene. Questa soluzione è stabile per 2 settimane. Preparare soluzione differenziante (2% di cloruro ferrico) mescolando 10% FeCl 3 10ml in 40 mL di acqua distillata. Questa soluzione può essere preparata fresco q.b.. Preparare 5% IPO sciogliendo 5,0 g tiosolfato di sodio in 100 mL di acqua distillata. Questa soluzione è stabile per 1 anno. Procedura di macchiatura Nota: Vedi riferimento 9 per ulteriori dettagli. Brevemente, idratare le sezioni di paraffina fisso di aorte raccolte in acqua distillata per 10 min posto aorte in Verhoeff ' ematossilina di s per 25 min, lavare con acqua e dip 10 – 30 volte nella differenziazione soluzione (2% FeCl 3). Sciacquare in acqua. Posto a 5% IPO per 1 min. lavare in acqua. Posto in Van Gieson ' s soluzione per 5 min. Disidratare in alcool nel seguente ordine: alcool di 75%, 90%, 95%, 100% e 100% per 30 s ciascuno. Quindi deselezionare in xilene per 5 min, due volte. Posto su un vetrino coprioggetto con mezzo di montaggio resinoso. Nota: fibre elastiche appaiono blu-nero al nero; nuclei: blu di blaCK; collagene: rosso; e altri elementi del tessuto: giallo.