Erstellung eines Nagetier Modells der abdominalen Aortenaneurysma Vaskulogenese Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

Tierpflege und Experimente wurden gemäß den Richtlinien des Hamamatsu Universität Schule von Medizin Tier Pflege Committee im Zentrum für Animal Care durchgeführt. 1. chirurgische Verfahren für die Erstellung des Modells Hinweis: Legen Sie die chirurgischen Instrumente in einem Wulst-Sterilisator für 10 s präoperativ. Sterile Handschuhe intraoperativ. Verwendung männliche Ratten mit einem Gewicht von 300-400 g. ermöglichen die Ratten Zugang zu Nahrung und Wasser Ad Libitum. Betäuben die Ratte mit Isofluran Inhalation (2,0-3,0 mL/L). Richtige Anesthetization durch Zehe Prise bestätigen. Haare auf dem Bauch mit einen elektrischen Rasierapparat Rasieren und schrubben den Bauch mit Alkohol und einem Povidon-Jod-Lösung. Legen Sie die Ratte in die Rückenlage auf dem OP-Tisch. Verwenden Sie Tierarzt Salbe auf die Ratte ' s Augen Trockenheit während der Narkose zu verhindern. Führen eine Laparotomie mit einem ventralen Mittellinie Bauchschnitt mit einer Schere. Um eine klare OP-Feld zu sichern, packen den Abdominal-Inhalt in die Bauchhöhle mit steriler Gaze mit einer Wunde Retraktor. Die Aorta aus dem perivaskuläre Gewebe lösen sanft abholen und reißen das Retroperitoneum mit einer Pinzette zu entlarven die aortalen Wand und ein Peeling Infrarenal Aorta im Retroperitonealraum von der Ebene der linken Nieren Ader an der Bifurkation von der perivaskuläre Gewebe ( Abbildung 1A). Ligate Verzweigung aus der Bauchschlagader mit einem 5: 0 Seidenschnur in Block Blut Schiffe liefern an einem Punkt weg von der Aorta, die nicht der Aorta Lumen einengen wird. , Aorten-Blutfluss blockieren platzieren vaskuläre Clips direkt unterhalb der Nierenarterien und knapp oberhalb der Bifurkation der Aorta. Hinweis: Die Größe der Clips sollte größer als der Aorta Durchmesser, den Blutfluss völlig zu blockieren. Eine vorübergehende 5-0 Seidenschnur Ligatur ist auch ausreichend für die Sperrung Durchblutung statt der Clips. Ähnlich wie bei Erstellen einer Blutung Punkt auf der Oberfläche der aortalen Wand, schneiden die vordere aortalen Wand mit einer Mikro-Schere 5 mm distal aus der Aorta Clip, angrenzend an den Nierenarterien Zweigen, zum einen Polyurethan-Katheter einfügen. Legen Sie einen Polyurethan-Katheter (außen-ø 0,55 mm Innendurchmesser 0,37 mm) mit einer 24-Gauge Innewohnung Nadel flach durch die Inzision Blut in die Aorta mit Wasser abzuwaschen. Verwalten einer 1-mL-Spritze in der Polyurethan-Katheter mit Wasser gefüllt und das restliche Blut in die Aorta mit Wasser wegspülen. Nach Bewässerung, den Katheter entfernen aus der Aorta. Vor ein Polyurethan-Katheter (Außendurchmesser 1,20 mm Innendurchmesser 0,94 mm) schneiden Sie mit einer innewohnenden 18-Gauge-Nadel, die Polyurethan-Katheter bis 10 mm lang ( Abbildung 1 b). Legen Sie den Schnitt Stück der Polyurethan-Katheter in die Aorta Lumen von der Schnitt im Schritt 1,9. Komplett 10 mm Katheter in das Lumen der Aorta zu platzieren, und positionieren Sie den Mittelpunkt des Katheters an die Position des Schnittes (d. h., den Schnitt mit dem Katheter zu decken). Reparieren die Inzision mit unterbrochenen Nähten mit einem 8-0 monofile Schnur ( Abbildung 1). Verbinden die Bauchschlagader mit einer Kombination aus 5-0 Seidenschnur und Polyurethan-Katheter ( Abbildung 1). Hinweis: Die Aorta Lumen sind von der indwelling Katheter pflegbar. Verbinden Sie die Aorta fest, um zu verhindern, dass die Position des Katheters Szenario. Der Chirurg ' s Knoten wird empfohlen, da es einen extra-Kick, fügt wenn der erste Wurf des Knotens, bilden einen doppelten Überhandknoten binden und ein zusätzlicher Runde bietet mehr Reibung und Lockerung verringern kann. Nach Ligation, entfernen Sie den vaskulären Clip an der Aorta Bifurkation, und entfernen Sie dann den vaskulären Clip unterhalb der Nierenarterien, den Antegrade Blutfluss wiederherzustellen. Bestätigen Brutto Aorten Pulsation. In der Nähe der Bauchschnitt in zwei Schichten, das Bauchfell und andere Schichten mit einer 4: 0-Polypropylen-Naht. Fest Naht den Schnitt um eine verwinkelte Organ zu verhindern. Gelten aktuell Lidocain auf den Bauchschnitt. Legen Sie die Ratte auf ein Heizkissen bis Bewusstsein zurückkehrt. Nicht unbeaufsichtigt lassen eine Ratte bis es ausreichend Bewusstsein zur Aufrechterhaltung der sternalen liegen wiedererlangt hat. Nicht zurück, eine Ratte, die Operation, um die Gesellschaft von anderen Ratten durchlaufen hat, bis es vollständig erholt hat. Überwachen die Ratte nach der Operation. Einen Bolus von sterilen Kochsalzlösung (1,0-2,0 mL) subkutan zu injizieren, wenn eine Ratte Anzeichen von Stress oder Körper Gewichtsverlust zeigt. Beobachten postoperativ, die Zeitverlauf Entwicklung der erweiterten Aorta auf eine Ultraschall-echokardiographische. Maßnahme der maximale Durchmesser von innen Kante an der Außenkante der Bauchschlagader wie beschrieben 5. 2. Ernte, Befestigung und Elastica-van Gieson (EVG) färben achtundzwanzig Tage postoperativ, Natrium-Pentobarbital verwalten ≥ 100 mg/kg intraperitoneal, die Ratten einzuschläfern. Aufschneiden die Ratte ' s Bauch Hohlräume ventral. Machen Sie den ersten Schnitt mit einem Skalpell. Das Aneurysma mit einer Schere zu ernten und legen Sie die geernteten Hauptschlagadern in 10 % neutral gepufferte Formalin für 24-48 h Hinweis: Der Chirurg muss vorsichtig, Verletzung der Aorta und andere Organe zu verhindern, wenn das Aneurysma auszusetzen sein. Ein erhöhter Abdominal-Organ sollte beobachtet werden, AAA Bildung angibt. Abbildung 2 zeigt eine in Vivo und ex Vivo Bild; Dieses repräsentative Stichprobe von AAAs ist nicht gebrochen. EVG Färbung 9 Vorbereitung der Lösung Prepare Verhoeff ' s Hämatoxylin durch Mischen der folgenden Schritte in der angegebenen Reihenfolge: alkoholische Hämatoxylin 20 mL, 10 % Eisenchlorid 8,0 mL und Lugol ' s Jod 8 mL. Mischen Sie die Lösung zwischen jeder Zugabe. Diese Lösung nach Bedarf frisch zubereitet werden. Vorbereiten Van Gieson ' s Lösung durch Mischen von 1 % saures Fuchsin 1 mL und gesättigten Pikrinsäure 45 mL. Lassen Sie über Nacht stehen und gut mischen. Diese Lösung ist für 2 Wochen stabil. Bereiten differenzierenden Lösung (2 % Eisenchlorid) durch das Mischen von 10 % FeCl 3 10 mL in 40 mL destilliertem Wasser. Diese Lösung kann frisch nach Bedarf zubereitet werden. Vorbereitung 5 % Hypo durch 5,0 g Natriumthiosulfat in 100 mL destilliertem Wasser auflösen. Diese Lösung ist für 1 Jahr stabil. Retikuläres Verfahren Hinweis: siehe Referenz 9 für Details. Kurz, Hydrat die feste Paraffin Abschnitte des geernteten Hauptschlagadern in destilliertem Wasser für 10 Minuten statt der Hauptschlagadern in Verhoeff ' s Hämatoxylin für 25 min. Waschen mit Wasser und Tauchen 10 – 30 Mal in Lösung (2 % FeCl 3) zu unterscheiden. Wasser abspülen. Legen Sie in 5 % Hypo für 1 min. unter Wasser reinigen. Ort in Van Gieson ' s Lösung für 5 min. Gelief in Alkohol in der folgenden Reihenfolge: 75 %, 90 %, 95 %, 100 % und 100 % Alkohol für 30 s. Dann deaktivieren Sie in Xylol für 5 min, zweimal. Auf einem Deckgläschen mit harzigen Eindeckmedium. Hinweis: die elastischen Fasern erscheinen blauschwarz bis schwarz; Kerne: blau in BlaCk; Kollagen: rot; und andere Gewebe Elemente: gelbe.