We demonstreren de semi-geautomatiseerde radiochemische synthese van [ 18 F] 3F4AP en kwaliteitscontroles.
3- [18F] fluor-4-aminopyridine, [18F] 3F4AP, is een radiofluorinated analoog van het FDA-goedgekeurd geneesmiddel voor multiple sclerose 4-aminopyridine (4AP). Deze verbinding wordt momenteel onderzocht als een PET-tracer voor demyelinisatie. We hebben onlangs een nieuwe chemische reactie beschreven om metafluorinated pyridines te produceren die bestaan uit directe fluorinering van een pyridine-N-oxide en het gebruik van deze reactie voor de radiochemische synthese van [18F] 3F4AP. In dit artikel tonen we hoe u deze tracer kunt produceren met behulp van een geautomatiseerde synthesizer en een in-house vloeibare hydrogeneringsreactor. We tonen ook de standaard kwaliteitscontroleprocedures die zijn uitgevoerd voordat de radiotracer wordt vrijgelaten voor preklinische dierenbeeldstudies. Deze semi-geautomatiseerde procedure kan dienen als basis voor de toekomstige productie van [ 18 F] 3F4AP voor klinische studies.
Het vermogen om een klein molecuulgeneesmiddel niet-invasieve in het menselijk lichaam op te sporen, heeft een groot potentieel voor precisiegeneeskunde. Onder de moleculaire beeldvormingstechnieken heeft positronemissie-tomografie (PET) veel gunstige eigenschappen: de hoge gevoeligheid van PET-detectors maakt het detecteren en kwantificeren van zeer kleine hoeveelheden radioactief materiaal mogelijk en de eigenschappen van de scanners maken het mogelijk om de ruimtelijke mapping van de lokalisatie 1 , 2 , 3 . PET laat bijvoorbeeld detectie en lokalisatie van tumoren en metastase toe op basis van het niveau van opname van een radioactief glucose analoog, [18F] FDG 4 . PET kan ook lokalisatie en kwantificering van specifieke hersenreceptoren en hun bezettingsgraad bieden die waardevol kunnen zijn voor het diagnosticeren en begrijpen van neurologische en psychiatrische stoornissen 5 . Om te ontwikkelenEen kleine molecuul PET-tracer, moet de verbinding van belang worden gemerkt met een positronemissie-isotoop, typisch 11 C of 18 F. Tussen deze twee radio-isotopen heeft 18 F een langer halveringstijd (109 min tegen 20,3 voor 11 C) , Waardoor multidosis en offsite productie mogelijk is. Niettemin kan het toevoegen van 18 F aan een molecuul uitdagend zijn. 18 V etikettering vereist snelle reacties die compatibel zijn met automatisering die de chemicus verlaagt van directe behandeling van de activiteit en het ontvangen van hoog geabsorbeerde stralingsdoses.
We hebben onlangs het gebruik van pyridine-N-oxiden beschreven als precursoren voor de fluorinering van pyridines en het gebruik van deze chemie bij de radiochemische synthese van [18F] 3F4AP 6 , een radiofluorinated analoog van het FDA-goedgekeurde geneesmiddel voor multiple sclerose, 4- Aminopyridine (4AP) 7 , 8 , 9 . thIs een nieuwe radiotracer momenteel onderzocht als een PET-tracer voor demyelinisatie 10 , 11 , 12 . In dit videoartikel tonen we de semi-geautomatiseerde synthese van deze verbinding aan met behulp van een IBA Synthera Synthesis Unit (hierna aangeduid als "de synthesizer") en een in-house vloeibaar hydrogeneringsapparaat. De synthese is gebaseerd op de reactie getoond in figuur 1 . Voorbereiding voor de procedure duurt ongeveer 1 uur, radiolabeling en zuivering 1,5 uur en kwaliteitscontroleprocedures 0,5 uur.
De bereiding van PET-tracers vereist een efficiënte etikettering met minimale gebruikersinterventie om de blootstelling aan straling 14 te beperken. Hier beschrijven we de eerste semi-geautomatiseerde procedure voor de radiochemische synthese van [ 18 F] 3F4AP, een PET-tracer die momenteel onderzocht wordt voor het afbeelden van demyelinisatie. Deze semi-geautomatiseerde methode produceert de radiotracer met hoge zuiverheid en voldoende specifieke activiteit voor dierstudies. Voorgaande methoden voor de synthese van deze verbinding waren gebaseerd op handmatige synthese 6 , die de hoeveelheid radioactieve tracer die kan worden geproduceerd aanzienlijk beperkt. Het hebben van een geautomatiseerde methode voor de synthese biedt ook meer reproduceerbare opbrengsten en maakt het makkelijker om de procedure over te brengen naar andere laboratoria met soortgelijke apparatuur. Toekomstige inspanningen om de procedure volledig te automatiseren, zullen instrumenteel zijn in de productie van de sporen in grote hoeveelheden voor studies bij grote dieren of mensen.
<p cLass = "jove_content"> Deze procedure maakt gebruik van nucleofiele uitwisseling van 19 F voor 18 F om de radio-isotoop in het molecuul van belang op te nemen. De voordelen van deze reactie zijn dat het snel is en bijna uitsluitend het gewenste product produceert zonder dat er een potentieel lange zuiveringsstap nodig is om de overmaat van voorloper te verwijderen. Eén beperking van het gebruik van fluoride-uitwisselingsreacties zoals die welke hier gebruikt wordt, is dat door de initiële massa van de koude verbinding de definitieve specifieke activiteit gedefinieerd als hoeveelheid radioactiviteit in mCi over de hoeveelheid verbinding in μmol beperkt kan zijn. Onder onze standaardomstandigheden, beginnend met 100-200 mCi van 18 F en 50 μg precursor, is de typische specifieke activiteit aan het eind van de synthese tot 100-200 mCi / μmol, wat voldoende lijkt voor preklinische PET beeldvormende studies . Niettemin kan de specifieke activiteit verbeteren door het startbedrag voor 18 F te verhogen – </suP> terwijl de massa hoeveelheid laag blijft. Er zijn verscheidene rapporten gedaan van het produceren van radioliganden door fluoride-uitwisseling met een hoge specifieke activiteit (1-3 Ci / μmol) door te beginnen met hoge activiteit en lage precursorhoeveelheden 15 , 16 .Net als bij alle radiochemische syntheses van PET-tracers is het van groot belang om snel te werken om radioactieve verval te minimaliseren. Het is ook belangrijk om de tijdsbehandeling van de radioactieve materialen te minimaliseren, de juiste afscherming te gebruiken en de afstand tussen het radioactieve materiaal en de gebruiker te maximaliseren om de blootstelling aan straling te beperken. Deze aspecten zijn bijzonder belangrijk tijdens de tweede helft van het protocol (zuivering en kwaliteitscontrole) waarin de gebruiker de oplossing manueel in de HPLC moet injecteren, de fracties verzamelen en het eindproduct filteren.
Net als bij alle radiochemische syntheses van PET-tracers is het van cruciaal belang om snel te werken om m te kunnen mInactiveren radioactieve verval. Het is ook belangrijk om de tijdsbehandeling van de radioactieve materialen te minimaliseren, de juiste afscherming te gebruiken en de afstand tussen het radioactieve materiaal en de gebruiker te maximaliseren om de blootstelling aan straling te beperken. Deze aspecten zijn in het bijzonder belangrijk tijdens de tweede helft van het protocol (hydrogenering en zuivering) waarin de gebruiker de oplossing manueel in de waterstof moet injecteren, de fracties verzamelen, de droogprocedure opstellen, het product opnieuw oplossen in buffer en filteren. Tijdens de filterstap is het gemakkelijk om een groot aantal radioactieve stoffen in de muren van de injectieflacons te verliezen. Zo is het belangrijk om te proberen alle vloeistof te verzamelen alvorens te filtreren. Het gebruik van een grotere hoeveelheid buffer om op te lossen kan de opbrengst van herstel verbeteren, maar het gebruik ervan wordt ontmoedigd omdat het een groter volume op de HPLC vereist, waardoor de piek het volume van de uiteindelijke dosis verbrengt en verhoogt.
Om een probleem op te lossenOm de procedure te optimaliseren is het belangrijk om de opbrengsten van elke stap bij te houden. Voor de meeste stappen wordt dit gewoon gedaan door de hoeveelheid radioactiviteit te meten vóór en na elke stap. In het geval van de reactie kunnen de opbrengsten worden berekend door kwantificering van de HPLC pieken. Tabel 1 in de resultaten sectie toont de typische opbrengsten voor elke stap. Tabel 2 hieronder bevat veel van de vaak geconfronteerde fouten met mogelijke redenen voor het falen en hoe u ze kunt corrigeren.
Ten slotte, hoewel de procedure die hier wordt aangetoond, specifiek is voor de synthese van [18F] 3F4AP, zijn de algemene werkstromen en veel van de individuele stappen gebruikelijk voor de synthese van andere verbindingen 17 . In dit artikel hebben we ook de typische QC-tests die op een PET-tracer zijn uitgevoerd, aangetoond.
The authors have nothing to disclose.
Dit project werd ondersteund door subsidies NIH / NIBIB 1K99EB020075 aan Pedro Brugarolas en een Innovation Fund Award van de Chicago Innovation Exchange naar Brian Popko en Pedro Brugarolas. Prof. Brian Popko wordt dankbaar erkend voor zijn mentorschap en financiële steun voor het project. Prof. Chin-Tu Chen en het Geïntegreerde Onderzoeksonderzoek voor Kleine Diervoederonderzoek aan de Universiteit van Chicago worden erkend voor het ruim delen van laboratoriumruimte en -apparatuur. IBA is erkend voor het sponsoren van open toegang van dit artikel.
Cyclotron produced [18F]fluoride | House supplied/Zevacor | IBA Cyclone 18 | 100-200 mCi |
Integrated fluid processor for production FLT/FDG | ABX | K-2715SYN | Cassette used for nucleophilic substitution |
Anhydrous acetonitrile | Janssen | 36431-0010 | Transfer under nitrogen |
Methanol | Janssen | 67-56-1 | |
ultrapure water | house supplied | Millipore MilliQ system | |
TBA-HCO3 | ABX | 808.0000.6 | abx.de |
QMA | Waters | WAT023525 | Quaternary methyl ammonium: Anion exchange solid phase extraction cartridge for trap and release of 18F- from the target water |
Sodium bicarbonate | ABX | K-28XX.03 | Prefilled 5 mL syringes |
Alumina-N | Waters | WAT020510 | Alumina-N solid phase extraction cartridge (for trapping unreacted 18F-) |
3-fluoro-4-nitropyridine N-oxide | Synthonix | 76954-0 | Store in desicator. Precursor |
3-fluoro-4-aminopyridine | Sigma Aldrich | 704490-1G | Reference standard |
Oxalic acid | Sigma Aldrich | 75688-50G | |
Sodium phosphate monobasic | Fisher Scientific | S80191-1 | |
Triethyl amine | Fisher Scientific | 04885-1 | |
Ethanol | Decon Labs | DSP-MD.43 | USP |
Final product vial | ABX | K28XX.04 | |
Millex Filter Syringe | Millex | SLGVR04NL | |
10% Pd/C cartridge | Sigma Aldrich | THS-01111-12EA | |
11 mm vials + crimp seals | Fisher Scientific | 03-250-618, 06-451-117, or equivalent | |
13 mm vials + crimp seals | Fisher Scientific | 06-718-992, 06-718-643, or equivalent | |
HPLC vials | Fisher Scientific | 03-391-16, 03-391-17, or equivalent | |
SEMIPREP C18 column | Agilent | 990967-202 | |
V-vials | Alltech | ||
Syringes: 1, 3, 10 mL | Fisher Scientific | 14-829-10D, 14-829-13Q, 14-829-18G, or equivalent | |
Compressed gases: N2, He, H2 | Airgas | UHP N300, UHP HE300, UHP H300, or equivalent | |
TLC plates | Sigma Aldrich | Z193275, or equivalent | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipment | |||
Synthera automated synthesizer | IBA SA, Belgium, iba-worldwide.com | Synthera, 250.001 | Automatic synthesis unit |
In-house hydrogenator | See picture | See text description | |
Hot cells | Comecer | For manipulating radioactive materials | |
RadioTLC scanner | Eckert and Ziegler | For handling sterile materials | |
HPLC | Dionex | Ultimate 3000 | |
Dose calibrator | Capintec | CRC15 | Or equivalent |
Gamma counter | Capintec, 7 Vreeland Road, Florham Park, NJ 07932 | CRC 15, PET-CRC25, or equivalent | For measuring radioactivity |
Personal dosimeters | Packard | Cobra II | For measuring gamma spectrum |
Personal radiation badges and rings | Atlantic Nuclear | Rados Rad-60 Electronic Dosimeter, or equivalent | |
Rotavap + vacuum pump | Landauer | ||
Lead pigs + syringe shields | Heidolph | Or equivalent | |
Geiger counters | Pinestar | ||
Ludlum | Model 3 + Pancake GM detector, 4801605, 47-1539, or equivalent |