L'induction de mésenchymateuses-épithélial Transitions dans les cellules Sarcome

plasticité phénotypique se réfère à une transition réversible entre les phénotypes cellulaires, et est généralement divisé en deux types, les transitions épithéliale-mésenchymateuse (EMT) et les transitions mésenchymateuses-à-épithéliale (MET). Cette plasticité phénotypique joue un rôle important dans les processus normaux d'organismes multicellulaires, tels que le développement et la cicatrisation des plaies ^1; cependant, ces mêmes voies et les programmes d'expression génique peuvent également conduire à des maladies, telles que la fibrose (revue dans ^{2, 3, 4)} et les métastases de carcinome (revue dans les références ^{5, 6, 7, 8).} Au cours de métastases, par exemple, EMT perturbe la polarité cellulaire, les interactions entre cellules et favorise l' invasion ^{9, 10.} Ensemble, EMT contribuents à un état phénotypiques qui facilite la diffusion des cellules cancéreuses. En outre, EMT conduit également à une foule d'autres modifications phénotypiques qui entraînent un phénotype agressif, y compris la dérégulation du métabolisme des cellules cancéreuses ^6, le développement de la résistance aux médicaments ^{11, 12,} une augmentation de la capacité d'initiation de la tumeur ^{13, 14} et l' hôte évasion immunitaire ^15.

La plasticité phénotypique a été bien étudiée dans la progression du cancer; cependant, les sarcomes présentent également la plasticité phénotypique. Fait intéressant, il semble que certains des mêmes facteurs de plasticité phénotypique dans les cancers contribuent également à la plasticité du sarcome et l'agressivité. Par exemple, les cellules tumorales circulantes (CTC) provenant de patients atteints de sarcome ont été montrés pour exprimer EpCAM, une protéine de surface cellulaire qui se trouve généralement sur les cellules epitheliales ^16. Addinellement, 250 échantillons de sarcomes des tissus mous ont été classés comme epithelial ou mésenchymateuses comme basé sur l'expression des gènes. Les patients dans la signature des marqueurs biologiques epithelial avaient un meilleur pronostic que les patients avec la signature de marqueurs biologiques mésenchymateuses comme ^17. Ceci est en accord avec de nombreux cancers, où les patients ayant plus carcinomes epithelial ont de meilleurs résultats par rapport aux patients avec plus de tumeurs mésenchymateuses comme ^18.

Alors que certains sarcomes affichent des biomarqueurs et des voies d'expression des gènes compatibles avec MET, restent mal compris les fondements moléculaires de cette plasticité phénotypique. Pour étudier les mécanismes et les conducteurs de MET sarcomes, nous avons développé un modèle d'induction MET en utilisant deux facteurs spécifiques à l'épithélium, la microARN (miR) -200 famille et comme grainyhead 2 (GRHL2). Les miR-200 sont une famille de petits ARN non codants qui régulent l'expression des gènes en se liant à la 3' UTR de MessenGer ARN et en empêchant la traduction en protéine. La famille miR-200 se compose de deux sous-groupes – contenant une miR-141 et miR-200a, et l'autre comprenant miR-200b, miR-200c, et miR-429. Les membres de la famille miR-200 sont enrichis dans les tissus épithéliaux, et la perte de miR-200s est associée à des métastases dans les cancers ^19. La famille miR-200 est également downregulated dans les sarcomes des tissus mous par rapport aux tissus normaux ^20. Tout comme les miR-200s, GRHL2 est un régulateur clé qui est important pour le développement de l' épithélium ^21. Le facteur de transcription GRHL2 agit de deux manières de réguler à la hausse des gènes épithéliaux, tels que la E-cadhérine: 1) Dans les cellules epitheliales, GRHL2 refoule directement le régulateur maître EMT, ZEB1 ^22; et 2) GRHL2 active directement la transcription de gènes ²³ epitheliales. Nos enquêtes précédentes ont montré que l'expression combinée de miR-200s et GRHL2 dans les cellules de sarcomeinduit un phénotype de type ²⁴ MET. Nous présentons ici un protocole détaillé pour créer un modèle in vitro d'induction MET dans les cellules de sarcome en utilisant l' expression ectopique de miR-200s et GRHL2.