フルーツフライで免疫染色でステロイド合成器官とそのインタラクティブ臓器を可視化するためのプロトコル<em>キイロショウジョウバエ</em

多細胞生物では、細胞の集団は、体全体のために不可欠である彼らの生体活動の専門機能に恵まれています。その任務を果たすために、各組織または器官は、それらの機能に関連する遺伝子のシリーズを発現し、開発のコンテキスト内でそれらの活性を編成するために他の組織と通信します。このような特殊な細胞機能およびインター器官相互作用を特徴づけるために、我々は、細胞の他のタイプの多アーキテクチャにそのまま保持されると共にセルのグループを指定する必要があります。

そのような特殊な器官の一例は、多くの生合成酵素が活性ステロイドホルモン¹にコレステロールから変換ステップを仲介ステロイド産生器官です。これらの酵素の遺伝子のほとんどは、特にステロイドの器官で発現され、生合成経路がしっかり体液入力とニューロンの入力を介して多くの外部刺激により調節されます。一度合成、ステロイドホルモンは、体液中に分泌され、遺伝子²の種々の発現を調節するため、多くの組織および器官を標的とします。したがって、ステロイドホルモンの作用は、恒常性、成長、および再生を維持するためのシステム応答を誘導します。

ステロイドホルモン生合成の機能及びステロイドホルモンの多面的な行動を調査するために、 キイロショウジョウバエは、適切なモデル系として利用することができます。幼虫の段階では、昆虫ステロイドホルモン、エクジステロイドは、専門的な内分泌器官で生合成される前胸腺^（PG）3と呼ばれます。 PGでは、いくつかのecdysteroidogenic酵素は、具体的には、適切な発達段階⁴に脱皮および変態制御する、エクジソンにコレステロールから複数の変換ステップを触媒します。したがって、エクジステロイド力価の動的変化が規制されています環境合図に応答して、多くのシグナル伝達経路によって。一方、成人の段階では、エクジステロイドは、再生、睡眠、メモリ、および寿命^{5、6、7、8}を含む生理学における重要な役割を果たしています。エクジステロイドが積極卵形成^{6、7、8、9、10、11}の進行を調節する、卵巣で生合成されることが知られています。最近では、生殖細胞系列幹細胞（GSCs）の数が^12を刺激交配に応じて、エクジステロイドとのセックスペプチドのシグナル伝達に影響されることを報告しています。

よく注釈付きゲノム情報を含むキイロショウジョウバエ遺伝学および細胞生物学の強力なツール、バイナリ遺伝子発現系、およびトランスジェニックのRNAi技術は、PGおよび卵巣^13、14、15で生合成をエクジステロイドために不可欠な遺伝子を同定するために私たちを有効にしています。 ecdysteroidogenic遺伝子が同定されたら、これらの遺伝子の転写調節および遺伝子産物の動的局在は、生合成経路¹⁶で検査することができます。この目的のために、定量的逆転写PCR、in situハイブリダイゼーション RNA、及び免疫組織学的分析が行われます。これらの技術の適用は、困難なタスクを含みます。 PGまたは卵巣の精巧な解剖。 1は、果物のサンプリングのために解剖を飛ぶの重要なスキルを練習する必要があるので、特に、ショウジョウバエのPGは、他の昆虫（ 例えばカイコとクロバエ）に比べて相対的に小さいです。さらに、両方のecdysteroidogenic器官は神経支配を受けます中枢神経系^{（CNS）17、18、19、20}秒から。したがって、正確な解剖学的な分析のために、ecdysteroidogenic器官は彼らの神経接続を破壊しない、CNSおよび他の器官と一緒にそのまま保持されなければなりません。

ここでは、Dにおけるステロイド産生器官の解剖と可視化のためのプロトコルを提供します。 ショウジョウバエ。解剖の技術を学ぶことはこれらの実験のための重要な出発点です。また、1が正常にいくつかの抗体とGAL4ドライバーラインとステロイド産生臓器並びにそれらのインタラクティブな器官にラベルを付けることができます。これらの技術、材料、および遺伝学を利用して、一つはステロイドホルモンの生合成の総合的なメカニズムを研究することができます。